53 регион – это какой город России – RUS35.ru

Содержание статьи

В Новгородской области регистрационные знаки транспортных средств, за исключением номера региона, не отличаются от знаков других субъектов. Знаки все также обладают серией, регистрационным номером, кодом субъекта, кодом и флагом России.

53 регион: Новгородская область

Главный город: Новгород Великий

Автомобильный номер региона: 53

 

 

Также помимо стандартных номеров для транспортных средств существуют номера для ТС МВД, транзитных ТС, транспортных средств Вооруженных сил РФ и других.

Трехзначный код в Новгородской области.

В некоторых регионах Российской Федерации распространена ситуация, когда количество машин превышает количество регистрационных знаков с сочетанием букв и цифр региона.

В Новгородской области разрешено использование трехзначных номеров.

То есть, на машинах можно увидеть регистрационные знаки как с кодом субъекта 53, так и с кодом субъекта 153.

Краткая характеристика Новгородской области.

Общие сведения.

Субъект расположен на северо-западе страны. В данном регионе преобладают различные пути сообщения с другими областями (как железнодорожные, так и воздушные).

Административно-территориальные единицы региона.

Новгородская область состоит из:

• 3 городов – Боровичей, Старой Руссы и Великого Новгорода;
• 21 района, в которые входят:
  • 7 городов
  • 112 поселений
  • Сельские населенные пункты.

Транспортная инфраструктура (автодороги)

Нынешнее состояние.

 Автомобили являются основным видом транспорта в регионе. По количеству дорожных участков область в несколько раз превосходит средний показатель по стране. Регион известен автомагистралью Центр – Скандинавия. Также существуют дороги: Новгород — Даугавпилс, Шимск — Ст.

Русса — Великие Луки — Невель и др.

Трасса М10 (Е 105) Москва – Санкт-Петербург (или «Россия»), играет важную роль, являясь одним из основных путей для туристических линий –она охватывает большое количество населенных пунктов. Более того, в любое время года критических отклонений от температуры на трассе не наблюдается.

Некоторые дороги области соединены между собой. Так, трасса Р21 (A116) Великий Новгород – Псков соединяет транспортные пути М10 «Россия» и М20 «Псков».

Асфальтное покрытие большинства дорожных участков выполнено по современным технологиям.

Несмотря на то, что регион богат путями сообщения, существуют проблемы с состоянием дорог. В определенных частях дорог технические характеристики не соответствуют нормам и плотности движения, что приводит к пробкам или неисправностям автомобиля. Весной и осенью некоторые дороги становятся труднопроходимыми. В некоторых районах города покрытие пришло в негодность и требует незамедлительного ремонта.

Планируемые изменения в транспортной инфраструктуре.

В настоящее время Правительство Новгородской области разработало проект, в соответствии с которым дороги должны быть усовершенствованы. Это обусловлено низкой пропускной способностью (в особенности трасса М10), приведением некоторых участков дорог в негодность, влиянием сезонов на состояние дорог и движение по ним.

Следует отметить, что ведется активное строительство платной скоростной трассы М11 «Москва – Санкт-Петербург», которая должна повысить пропускную способность трассы М10. К 2018 году ожидается окончание работ.

Новогородская область – 53 регион

53 регион — это какой город или область

53 регион — это Новгородская область в России.

53 регион на автомобильных номерах машины

Код региона регистрации на номерах авто: 53.

Код на номерах машин до 1993 года:

НО.

Столица	Новгород Великий
Площадь	54 501 км²
Население	593 232 человека
Федеральный округ	Северо-Западный
Расстояние до Москвы	490 км по прямой
Часовой пояс	MSK (UTC+3)
Код ОКАТО	49
Экономический район	Северо-Западный

Степень автомобилизации (количество авто на 1 000 человек населения): 325. У каждого третьего жителя региона есть машина.

53 код на номерах авто.

Качество трассы в регионе

Качество дорог в Новгородской области — нормальное, по сравнению с Псковской и Тверской областью.

Нет, с ними все плохо

67.03%

Проголосовало: 91

Соседние регионы

С Новгородской областью (53) граничат следующие субъекты РФ:

Описание региона

В качестве административно-территориальной единицы Новгородская область образована 5 июля 1944 года. Координаты — 58°30′ с. ш. 32°30′ в. д.

Код области: +7 816

Время в регионе сейчас онлайн	Географическое положение
	UTC +3, GMT+3
Часовой пояс по IANA: Europe/Moscow

Геральдический атрибут Новгородской области – щит, на белом фоне которого изображены медведи, поддерживающие княжеский трон из позолоты. В нижней зоне щита (на голубом фоне) запечатлены серебряные рыбы. Элемент, обрамленный листьями из дуба в совокупности с Андреевской лентой, сверху украшает корона.

Флаг региона — это материя прямоугольной формы, разделенная на три вертикальные цветовые полосы (слева – синяя, посередине – белая, справа – красная). В центре знамени воспроизведен герб области в уменьшенном масштабе.

Герб	Флаг

Климат — умеренно-континентальный, с элементами морского. Короткое и нежаркое лето чередуется с мягкой зимой. Средняя годовая температура воздуха — (+6,8°С).

Таблица — Климатограмма региона по году

Погода сейчас в Новгородской области:

53 регион на карте России.

Новгородская область — 53 регион: каталог организаций

Действует ВОЙСКОВАЯ ЧАСТЬ 42195

Командир:Бугарь Евгений Борисович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ НОВГОРОДСКАЯ РАЙОН СОЛЕЦКИЙ ГОРОД СОЛЬЦЫ 2 УЛИЦА ДОС

Дата регистрации:30.05.1953

Уставной капитал:–

ИНН:5315001945

ОГРН:1025301789040

Действует ТСЖ РОГАТИЦА, 31

Председатель Правления:Тарарова Людмила Викторовна

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ НОВГОРОДСКАЯ ГОРОД ВЕЛИКИЙ НОВГОРОД УЛИЦА РОГАТИЦА 31

Дата регистрации:12.10.1964

Уставной капитал:–

ИНН:5321050394

ОГРН:1025300793462

Действует ЖИЛИЩНЫЙ КООПЕРАТИВ №5

Недвижимость

Управление недвижимым имуществом

Управление жилым недвижимым имуществом

Председатель:Лапина Галина Сергеевна

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ НОВГОРОДСКАЯ РАЙОН БОРОВИЧСКИЙ ГОРОД БОРОВИЧИ УЛИЦА ПАРКОВАЯ 7

Дата регистрации:21.01.1965

Уставной капитал:–

ИНН:5320007068

ОГРН:1025300995092

Действует ЖСК № 11 (ВОСХОД)

Председатель:Шестакова Елена Петровна

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ НОВГОРОДСКАЯ ГОРОД ВЕЛИКИЙ НОВГОРОД УЛИЦА РОГАТИЦА 35

Дата регистрации:16.09.1965

Уставной капитал:–

ИНН:5321050210

ОГРН:1025300800535

Действует ЖСК №17 ТЕМП

Недвижимость

Управление недвижимым имуществом

Управление жилым недвижимым имуществом

Председатель:Беляев Сергей Александрович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ НОВГОРОДСКАЯ ГОРОД ВЕЛИКИЙ НОВГОРОД УЛИЦА ПАВЛА ЛЕВИТТА 11

Дата регистрации:30.08.1966

Уставной капитал:–

ИНН:5321050186

ОГРН:1025300795300

Действует САДОВОДЧЕСКОЕ НЕКОММЕРЧЕСКОЕ ТОВАРИЩЕСТВО ОГНЕУПОРЩИК

Сельское хозяйство

Овощеводство

Председатель:Белков Михаил Васильевич

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ НОВГОРОДСКАЯ РАЙОН БОРОВИЧСКИЙ ГОРОД БОРОВИЧИ УЛИЦА ПАРКОВАЯ

Дата регистрации:06.10.1966

Уставной капитал:–

ИНН:5320004959

ОГРН:1025300991011

Действует ЖСК — 7

Недвижимость

Управление недвижимым имуществом

Управление жилым недвижимым имуществом

Председатель:Серов Александр Алексеевич

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ НОВГОРОДСКАЯ РАЙОН БОРОВИЧСКИЙ ГОРОД БОРОВИЧИ УЛИЦА БОТАНИЧЕСКАЯ 4

Дата регистрации:20.10.1966

Уставной капитал:–

ИНН:5320007082

ОГРН:1025300989119

Действует ЖСК №8

Недвижимость

Управление недвижимым имуществом

Управление жилым недвижимым имуществом

Председатель:Захарова Светлана Васильевна

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ НОВГОРОДСКАЯ РАЙОН БОРОВИЧСКИЙ ГОРОД БОРОВИЧИ УЛИЦА БОТАНИЧЕСКАЯ 6

Дата регистрации:31.10.1967

Уставной капитал:–

ИНН:5320007090

ОГРН:1025300994828

Действует ЖСК №18

Недвижимость

Управление недвижимым имуществом

Управление жилым недвижимым имуществом

Председатель:Вдовиченко Игорь Михайлович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ НОВГОРОДСКАЯ ГОРОД ВЕЛИКИЙ НОВГОРОД УЛИЦА ЗЕЛИНСКОГО 24

Дата регистрации:28.11.1968

Уставной капитал:–

ИНН:5321050250

ОГРН:1025300806882

Действует ГСК ПК КООПЕРАТИВНАЯ ЛОДОЧНАЯ СТАНЦИЯ №2

Услуги для бизнеса

Склады и логистика

Транспортная инфраструктура

Председатель Правления:Филиппов Евгений Иванович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ НОВГОРОДСКАЯ ГОРОД ВЕЛИКИЙ НОВГОРОД УЛИЦА ПОСОЛЬСКАЯ 2А

Дата регистрации:20.07.1972

Уставной капитал:–

ИНН:5321046550

ОГРН:1025300801668

Действует ЖСК №21

Недвижимость

Управление недвижимым имуществом

Управление жилым недвижимым имуществом

Управляющий:Вдовиченко Игорь Михайлович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ НОВГОРОДСКАЯ ГОРОД ВЕЛИКИЙ НОВГОРОД УЛИЦА ЗЕЛИНСКОГО 22 2

Дата регистрации:09.08.1972

Уставной капитал:–

ИНН:5321050281

ОГРН:1025300799710

Действует ЖСК ЖСК №10

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ НОВГОРОДСКАЯ ГОРОД ВЕЛИКИЙ НОВГОРОД УЛИЦА РОГАТИЦА 33

Дата регистрации:17.05.1973

Уставной капитал:–

ИНН:5321050203

ОГРН:1025300799336

Действует ЖСК № 24 ЗАРЯ

Председатель:Семенова Ирина Евгеньевна

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ НОВГОРОДСКАЯ ГОРОД ВЕЛИКИЙ НОВГОРОД УЛИЦА ПСКОВСКАЯ 30

Дата регистрации:11.02.1974

Уставной капитал:–

ИНН:5321049649

ОГРН:1025300792758

Действует ЖСК № 14

Недвижимость

Управление недвижимым имуществом

Управление жилым недвижимым имуществом

Председатель:Грицай Татьяна Антоновна

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ НОВГОРОДСКАЯ РАЙОН БОРОВИЧСКИЙ ГОРОД БОРОВИЧИ УЛИЦА ЛЕНИНГРАДСКАЯ 29

Дата регистрации:09.03.1978

Уставной капитал:–

ИНН:5320007156

ОГРН:1025300995170

Действует ЖСК №35

Недвижимость

Управление недвижимым имуществом

Управление жилым недвижимым имуществом

Председатель Правления:Зимовая Людмила Евгеньевна

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ НОВГОРОДСКАЯ ГОРОД ВЕЛИКИЙ НОВГОРОД ПРОСПЕКТ МИРА 14/12

Дата регистрации:19.05.1983

Уставной капитал:–

ИНН:5321042121

ОГРН:1025300812657

Действует САДОВОДЧЕСКОЕ НЕКОММЕРЧЕСКОЕ ТОВАРИЩЕСТВО ЛЕСНОЕ

Недвижимость

Управление недвижимым имуществом

Управление нежилым недвижимым имуществом

Председатель Правления:Гангур Валерий Иванович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ НОВГОРОДСКАЯ ГОРОД БОРОВИЧИ

Дата регистрации:20.05.1983

Уставной капитал:–

ИНН:5320006924

ОГРН:1025300993520

Действует ТСН ТОВАРИЩЕСТВО ДОМОВЛАДЕЛЬЦЕВ ОБЩИЙ ДОМ

Недвижимость

Управление недвижимым имуществом

Председатель Правления:Семенистая Лидия Андреевна

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ НОВГОРОДСКАЯ ГОРОД ВЕЛИКИЙ НОВГОРОД УЛИЦА ЗЕЛИНСКОГО 52 1

Дата регистрации:03.08.1985

Уставной капитал:–

ИНН:5321053765

ОГРН:1035300262062

Действует ТСН НЕКОММЕРЧЕСКОЕ ТОВАРИЩЕСТВО ЖЕЛЕЗНОДОРОЖНИК

Общественные организации

Председатель Правления:Соколов Михаил Николаевич

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ НОВГОРОДСКАЯ РАЙОН МАЛОВИШЕРСКИЙ ДЕРЕВНЯ СЮЙСЬКА УЛИЦА ПРОИЗВОДСТВЕННАЯ ДОМ 10

Дата регистрации:10.07.1987

Уставной капитал:–

ИНН:5307001959

ОГРН:1025301990120

Действует СОДНТ САДОВОДЧЕСКОЕ ТОВАРИЩЕСТВО ОВИНЧИЩЕ

Сельское хозяйство

Овощеводство

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ НОВГОРОДСКАЯ РАЙОН ВАЛДАЙСКИЙ ГОРОД ВАЛДАЙ ПРОСПЕКТ КОМСОМОЛЬСКИЙ 19/21

Дата регистрации:13.05.1988

Уставной капитал:–

ИНН:5302006760

ОГРН:1035300000504

Действует ЖСК 38

Недвижимость

Управление недвижимым имуществом

Управление жилым недвижимым имуществом

Председатель Правления:Кондратьева Ольга Николаевна

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ НОВГОРОДСКАЯ ГОРОД ВЕЛИКИЙ НОВГОРОД ПРОСПЕКТ МИРА ДОМ 6

Дата регистрации:24.07.1989

Уставной капитал:–

ИНН:5321050362

ОГРН:1025300783958

Действует ПК ПРОИЗВОДСТВЕННЫЙ ТОРГОВО-ЗАКУПОЧНЫЙ КООПЕРАТИВ ЦВЕТЫ

Недвижимость

Операции с недвижимостью

Аренда недвижимости

Председатель:Мхитарян Стелла Мхитаровна

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ НОВГОРОДСКАЯ ГОРОД ВЕЛИКИЙ НОВГОРОД УЛИЦА НЕХИНСКАЯ ДОМ 57 ПОМЕЩЕНИЕ 77

Дата регистрации:23.01.1990

Уставной капитал:5 000 ₽

ИНН:5321016153

ОГРН:1025300809764

Действует ПК ПРК АНСАМБЛЬ НАРОДНОЙ МУЗЫКИ НОВГОРОДСКАЯ МОЗАИКА

Творческая деятельность

Председатель:Яковлев Сергей Иванович

Юридический адрес:ОБЛ. НОВГОРОДСКАЯ Г. Великий Новгород УЛ. ЛОМОНОСОВА Д. 16/13 КВ. 68

Дата регистрации:11.03.1990

Уставной капитал:1 000 ₽

ИНН:5321015015

ОГРН:1025300804528

Действует ПК ПРК ДЕКОР

Типография и печать

Полиграфическая деятельность

Председатель:Рыбянченко Елена Вячеславовна

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ НОВГОРОДСКАЯ ГОРОД ВЕЛИКИЙ НОВГОРОД НАБЕРЕЖНАЯ СОФИЙСКАЯ 2

Дата регистрации:06.08.1990

Уставной капитал:32 200 ₽

ИНН:5321014036

ОГРН:1035300261248

Действует ООО ТВС-НОВГОРОД

Телерадиовещание

Телевизионное вещание

Директор:Никольская Мария Владиславна

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ НОВГОРОДСКАЯ ГОРОД ВЕЛИКИЙ НОВГОРОД УЛИЦА РОГАТИЦА 44

Дата регистрации:13.09.1990

Уставной капитал:328 572 ₽

ИНН:5321000918

ОГРН:1025300802845

Действует КРЕСТЬЯНСКОЕ ХОЗЯЙСТВО СТЕПАНОВА СЕРГЕЯ ИВАНОВИЧА

Сельское хозяйство

Смешанное сельское хозяйство

Глава Крестьянского Хозяйства:Степанова Надежда Николаевна

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ НОВГОРОДСКАЯ РАЙОН ЛЮБЫТИНСКИЙ ДЕРЕВНЯ КЛЕЩИНО

Дата регистрации:02.10.1990

Уставной капитал:–

ИНН:5306001402

ОГРН:1025301989514

Действует АО НОВГОРОДСКИЙ УНИВЕРСАЛЬНЫЙ КОММЕРЧЕСКИЙ БАНК НОВОБАНК

Финансовые услуги

Банки

Председатель Банка:Салагина Галина Николаевна

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ НОВГОРОДСКАЯ ГОРОД ВЕЛИКИЙ НОВГОРОД НАБЕРЕЖНАЯ Р. ГЗЕНЬ 11

Дата регистрации:24.01.1991

Уставной капитал:230 000 000 ₽

ИНН:5321029402

ОГРН:1025300002925

Действует ГСК КООПЕРАТИВ ВЛАДЕЛЬЦЕВ МАЛОМЕРНЫХ СУДОВ ЧАЙКА

Председатель:Акентьев Сергей Алексеевич

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ НОВГОРОДСКАЯ ГОРОД ВЕЛИКИЙ НОВГОРОД НАБЕРЕЖНАЯ АЛЕКСАНДРА НЕВСКОГО

Дата регистрации:21.03.1991

Уставной капитал:–

ИНН:5321032130

ОГРН:1025300814857

Действует КРЕСТЬЯНСКОЕ ХОЗЯЙСТВО МАРКОВА ВИКТОРА ИВАНОВИЧА

Лесное хозяйство

Лесозаготовки

Глава Крестьянского Хозяйства:Марков Алексей Викторович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ НОВГОРОДСКАЯ РАЙОН НОВГОРОДСКИЙ ДЕРЕВНЯ СОПКИ

Дата регистрации:28.03.1991

Уставной капитал:–

ИНН:5310003963

ОГРН:1025301390245

Действует ГСК ГАРАЖНО — СТРОИТЕЛЬНЫЙ КООПЕРАТИВ ПУТЕЕЦ

Услуги для бизнеса

Склады и логистика

Транспортная инфраструктура

Председатель:Яковлев Владимир Александрович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ НОВГОРОДСКАЯ ГОРОД ВЕЛИКИЙ НОВГОРОД ПРОСПЕКТ АЛЕКСАНДРА КОРСУНОВА ДОМ 12В

Дата регистрации:25.04.1991

Уставной капитал:–

ИНН:5321059774

ОГРН:1035300262359

Действует ООО ФИРМА БОРСТРОЙМАТЕРИАЛЫ

Строительство

Строительство зданий

Строительство зданий

Генеральный Директор:Зыков Михаил Витальевич

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ НОВГОРОДСКАЯ РАЙОН БОРОВИЧСКИЙ ГОРОД БОРОВИЧИ УЛИЦА ОКУЛОВСКАЯ 10

Дата регистрации:16.05.1991

Уставной капитал:75 750 ₽

ИНН:5320001362

ОГРН:1025300988283

Действует АДМИНИСТРАЦИЯ ВЕЛИКОГО НОВГОРОДА

Органы государственного управления

Местное самоуправление

Мэр Великого Новгорода:Бусурин Сергей Владимирович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ НОВГОРОДСКАЯ ГОРОД ВЕЛИКИЙ НОВГОРОД УЛИЦА БОЛЬШАЯ ВЛАСЬЕВСКАЯ 4

Дата регистрации:06.07.1991

Уставной капитал:–

ИНН:5321035692

ОГРН:1035300275372

Действует АДМИНИСТРАЦИЯ НОВГОРОДСКОГО МУНИЦИПАЛЬНОГО РАЙОНА

Органы государственного управления

Местное самоуправление

Глава Новгородского Муниципального Района:Шахов Олег Игоревич

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ НОВГОРОДСКАЯ ГОРОД ВЕЛИКИЙ НОВГОРОД УЛИЦА БОЛЬШАЯ МОСКОВСКАЯ 78

Дата регистрации:06.07.1991

Уставной капитал:–

ИНН:5310001444

ОГРН:1025300794078

Действует ООО ИНСТИТУТ АГРООРГТЕХПРОЕКТ

Архитектура и проектирование

Архитектурное проектирование зданий и сооружений

Директор:Буяновский Константин Витальевич

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ НОВГОРОДСКАЯ ГОРОД ВЕЛИКИЙ НОВГОРОД УЛИЦА КОЗЬМОДЕМЬЯНСКАЯ 16А

Дата регистрации:11.07.1991

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:5321031546

ОГРН:1025300786543

Действует ООО ГРИЛЬ

Недвижимость

Операции с недвижимостью

Аренда недвижимости

Директор:Тишкова Светлана Викторовна

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ НОВГОРОДСКАЯ РАЙОН СТАРОРУССКИЙ ГОРОД СТАРАЯ РУССА УЛИЦА КРАСНЫХ ПАРТИЗАН 8

Дата регистрации:25.07.1991

Уставной капитал:19 667 ₽

ИНН:5322000170

ОГРН:1025301189891

Действует АО НОВГОРОДГАЗАВТОСЕРВИС

Торговля автомобилями и автосервис

Торговля автотранспортными средствами

Генеральный Директор:Павловский Станислав Юрьевич

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ НОВГОРОДСКАЯ ГОРОД ВЕЛИКИЙ НОВГОРОД УЛИЦА БОЛЬШАЯ САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКАЯ 41 7

Дата регистрации:08.08.1991

Уставной капитал:37 360 ₽

ИНН:5321032740

ОГРН:1025300802339

Действует ООО НАУЧНО-ПРОИЗВОДСТВЕННАЯ ФИРМА ВЕНТА

Оптовая торговля

Оптовая торговля топливом и сырьём

Оптовая торговля рудой и металлами

Генеральный Директор:Тараненко Сергей Николаевич

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ НОВГОРОДСКАЯ ГОРОД ВЕЛИКИЙ НОВГОРОД УЛИЦА СТРАТИЛАТОВСКАЯ 5 КАБИНЕТ 311

Дата регистрации:08.08.1991

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:5321027420

ОГРН:1025300805232

Действует КРЕСТЬЯНСКОЕ ХОЗЯЙСТВО БАЗАЕВА МАХМУДА НУРДИЕВИЧА

Сельское хозяйство

Растениеводство

Глава Крестьянского Хозяйства:Базаев Махмуд Нурдиевич

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ НОВГОРОДСКАЯ РАЙОН МОШЕНСКОЙ ДЕРЕВНЯ ЧУВАШЕВА ГОРА 48

Дата регистрации:12.08.1991

Уставной капитал:–

ИНН:5309001048

ОГРН:1065331014430

Действует ООО РОССТ

Оптовая торговля

Оптовая торговля техникой и оборудованием

Оптовая торговля компьютерами и периферией

Директор:Никитенко Сергей Ильич

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ НОВГОРОДСКАЯ ГОРОД ВЕЛИКИЙ НОВГОРОД БУЛЬВАР ВОСКРЕСЕНСКИЙ 10 1

Дата регистрации:22.08.1991

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:5321004599

ОГРН:1025300805386

Действует МУП ВЕЛИКОГО НОВГОРОДА РИТУС

Бытовые услуги

Директор:Козырев Сергей Адольфович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ НОВГОРОДСКАЯ ГОРОД ВЕЛИКИЙ НОВГОРОД ПРОСПЕКТ АЛЕКСАНДРА КОРСУНОВА ДОМ 30

Дата регистрации:05.09.1991

Уставной капитал:100 205 ₽

ИНН:5321026708

ОГРН:1025300815132

Действует ООО РУСЬ

Лесное хозяйство

Лесозаготовки

Директор:Бурдаков Виктор Алексеевич

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ НОВГОРОДСКАЯ РАЙОН ПЕСТОВСКИЙ ГОРОД ПЕСТОВО УЛИЦА ПЕРВОМАЙСКАЯ 15

Дата регистрации:03.10.1991

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:5313002284

ОГРН:1025302387263

Действует УПРАВЛЕНИЕ ФЕДЕРАЛЬНОЙ АНТИМОНОПОЛЬНОЙ СЛУЖБЫ ПО НОВГОРОДСКОЙ ОБЛАСТИ

Органы государственного управления

Федеральные органы государственной власти

Руководитель Управления:Виниченко Ольга Сергеевна

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ НОВГОРОДСКАЯ ГОРОД ВЕЛИКИЙ НОВГОРОД БУЛЬВАР ВОСКРЕСЕНСКИЙ 3

Дата регистрации:17.10.1991

Уставной капитал:–

ИНН:5321047553

ОГРН:1025300795552

Действует АО АДЕПТ

Розничная торговля

Розничная торговля продовольственными товарами

Розничная торговля пищевыми продуктами

Генеральный Директор:Нисанов Геннадий Борисович

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ НОВГОРОДСКАЯ ГОРОД ВЕЛИКИЙ НОВГОРОД УЛИЦА БОЛЬШАЯ САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКАЯ 104

Дата регистрации:24.10.1991

Уставной капитал:18 499 980 ₽

ИНН:5321032733

ОГРН:1025300786213

Действует ООО МОЗА

Строительство

Строительство сооружений

Строительство дорог

Генеральный Директор:Блышко Евгений Александрович

Юридический адрес:ОБЛ. НОВГОРОДСКАЯ Р-Н Новгородский Д. Подберезье УЛ. ПОЛЕВАЯ Д. 44

Дата регистрации:24.10.1991

Уставной капитал:201 000 ₽

ИНН:5321038164

ОГРН:1025300801305

Действует ООО ВЕСТ

Строительство

Организация строительных работ

Монтажные работы

Директор:Волков Вадим Анатольевич

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ НОВГОРОДСКАЯ ГОРОД ВЕЛИКИЙ НОВГОРОД ПРОСПЕКТ АЛЕКСАНДРА КОРСУНОВА ДОМ 14 А ОФИС 427

Дата регистрации:24.10.1991

Уставной капитал:62 500 ₽

ИНН:5321002376

ОГРН:1025300785102

Действует ООО ПРОЕКТНО-СТРОИТЕЛЬНАЯ ФИРМА НОВИНСТРОЙ

Архитектура и проектирование

Архитектурное проектирование зданий и сооружений

Генеральный Директор:Кузнецова Ольга Львовна

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ НОВГОРОДСКАЯ ГОРОД ВЕЛИКИЙ НОВГОРОД УЛИЦА СТРОИТЕЛЕЙ 4

Дата регистрации:31.10.1991

Уставной капитал:10 000 ₽

ИНН:5321057223

ОГРН:1025300797367

Действует ООО СТАТУС

Недвижимость

Операции с недвижимостью

Аренда недвижимости

Генеральный Директор:Мунтян Наталья Николаевна

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ НОВГОРОДСКАЯ ГОРОД ВЕЛИКИЙ НОВГОРОД УЛИЦА ОРЛОВСКАЯ 4 В

Дата регистрации:14.11.1991

Уставной капитал:928 375 ₽

ИНН:5321000851

ОГРН:1025300816034

Действует ООО ФИРМА ИР

Недвижимость

Операции с недвижимостью

Аренда недвижимости

Генеральный Директор:Непомнящих Виктория Викторовна

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ НОВГОРОДСКАЯ ГОРОД ВЕЛИКИЙ НОВГОРОД УЛИЦА ЧЕРЕМНОВА-КОНЮХОВА 12

Дата регистрации:20.11.1991

Уставной капитал:46 758 ₽

ИНН:5321003997

ОГРН:1025300792990

Действует КРЕСТЬЯНСКОЕ ХОЗЯЙСТВО ГЕЛЕТЕЙ ИВАН ИВАНОВИЧ

Сельское хозяйство

Овощеводство

ГЛАВА КРЕСТЬЯНСКОГО ХОЗЯЙСТВА:ГЕЛЕТЕЙ ИВАН ИВАНОВИЧ

Юридический адрес:ОБЛАСТЬ НОВГОРОДСКАЯ РАЙОН БОРОВИЧСКИЙ ДЕРЕВНЯ БЕРЕЗИЦЫ 2

Дата регистрации:21.11.1991

Уставной капитал:–

ИНН:5320004010

ОГРН:1025300991760

СТО Регион 53 в Великом Новгороде

Замена тормозной жидкости

Замена тормозных колодок и дисков

Заправка автокондиционеров

Капитальный ремонт двигателей

Полировка автомобилей

Регулировка рулевой рейки

Регулировка сцепления

Ремонт генераторов

Ремонт ГУР

Ремонт двигателей

Ремонт, замена и диагностика АКПП

Ремонт, замена и диагностика коробки передач

Ремонт и замена глушителей

Ремонт инжектора

Ремонт и продажа автомобильных радиаторов

Ремонт рулевой рейки

Ремонт стартеров

Ремонт тормозной системы

Ремонт ходовой части

Тонирование стекол

Установка парктроника

Установка, ремонт и продажа автосигнализаций

Чистка дроссельной заслонки

Автосервис СТО Регион 53 Великий Новгород: отзывы, контакты, перечень услуг

На этой страниц мы собрали самую полную информацию об автосервисе СТО Регион 53: точный адрес и контактный телефон, перечень услуг и режим работы, а также отзывы других посетителей

Название:	СТО Регион 53
Адрес:	Великий Новгород, ул. Бредова-Звериная, 24
Режим работы:	пн-сб 9:00–19:00; вс 11:00–19:00
Услуги:	мойка; марка автомобиля; нормочас; кузовной ремонт; виды работ; хранение шин; оплата картой; предварительная запись; Wi-Fi; грузовой шиномонтаж; шиномонтаж; выездной шиномонтаж; развал-схождение; базовое сервисное обслуживание;
Телефон:	+7 (8162) 33-53-53
Координаты:	58.5374510 31.2738040
Сайт:	http://www.region53.ru/

Автосервис СТО Регион 53 располагается недалеко от крупных транспортных развязок в городе Великий Новгород. Всегда уточняйте стоимость услуг и возможность отремонтировать ваш автомобиль по контактному телефону автосервиса.

Отзывы об Автосервис СТО Регион 53 Великий Новгород

Часто автомобилисты сталкиваются с недобросовестной работой автосревисов – от некачественно выполненных работ по ремонту с использованием неновых запчастей до повреждения автомобиля. Если вы пострадали от этого на данном автосервисе, обязательно оставьте свой отзыв. Этим вы поможете многим пользователям.

Отзывы об автосервисе СТО Регион 53

53 — код какого региона? Узнай здесь!

В нашей огромной стране существуют 86 регионов, и у каждого из них есть своё цифровое обозначение на автомобильном номере. Конечно же, довольно трудно запомнить их все, и при встрече с очередным значением, не представляется возможным узнать, из какого же субъекта РФ приехал этот автомобиль. Подробный ответ вы найдёте на этой странице.

Большинство регистрационных знаков — стандартные знаки образца 1993 года, вид которых определён ГОСТ Р 50577-93 (приказ от 30 июля 1993 года № 362 о новых государственных регистрационных знаках транспортных средств).

Изначально в качестве кодов регионов применялись только числа от 01 до 89, по количеству регионов РФ на 1 января 1993 года. Однако количество регистрируемых автомобилей с каждым годом увеличивается, и номерных знаков с допустимыми комбинациями начинает не хватать. По этой причине в ряде субъектов России введены дополнительные кодовые обозначения, которые можно использовать на знаках; сначала началась выдача кодов регионов от 90 до 99 (кроме кода 92, который впоследствии был задействован в Севастополе), а затем перешли к трёхзначным кодам регионов. Для трёхзначных кодов в качестве первой цифры сначала разрешалось использовать только единицу, с 2013 года — 1 и 7, а с лета 2020 года — любую цифру, кроме нуля.

53 — код на номерах Новгородской области

Административный центр: Великий Новгород

Федеральный округ: Северо-западный

Экономический район: Северо-западный

Часовой пояс: МСК

Дата образования: 5 июля 1944 года

Площадь: 54 501 км² (49 место в РФ)

Население: 596 508 чел (2020) (70 место в РФ)

Кликни на ручку и попробуй получить красивый номер =)

Коды регионов на автомобильных номерах с изменениями 2021 года (список)

Цифровые коды регионов от «01» до «89» изначально присвоили по списку субъектов федерации, перечисленных в Конституции. Уже в 1999 году для Москвы пришлось вводить новый код «99», позднее дополнительные коды получили многие другие регионы, а в 2004 году на номерах появились трёхзначные коды.

В прошлом году новые коды получили Москва (797), Московская область (790), Челябинская область (774) и Оренбургская область (156). Теперь таблица с кодами регионов России выглядит так.

01	Республика Адыгея
02	Республика Башкортостан
03	Республика Бурятия
04	Республика Алтай
05	Республика Дагестан
06	Республика Ингушетия
07	Кабардино-Балкарская Республика
08	Республика Калмыкия
09	Карачаево-Черкесская Республика
10	Республика Карелия
11	Республика Коми
12	Республика Марий-Эл
13	Республика Мордовия
14	Республика Саха-Якутия
15	Республика Северная Осетия-Алания
16	Республика Татарстан
17	Республика Тува
18	Удмуртская Республика
19	Республика Хакасия
20	Чеченская Республика	В 2000 году все номера заменили на новые с кодом 95
21	Чувашская Республика
22	Алтайский край
23	Краснодарский край
24	Красноярский край
25	Приморский край
26	Ставропольский край
27	Хабаровский край
28	Амурская область
29	Архангельская область
30	Астраханская область
31	Белгородская область
32	Брянская область
33	Владимирская область
34	Волгоградская область
35	Вологодская область
36	Воронежская область
37	Ивановская область
38	Иркутская область
39	Калининградская область
40	Калужская область
41	Камчатский край	до 2007 года — Камчатская область
42	Кемеровская область
43	Кировская область
44	Костромская область
45	Курганская область
46	Курская область
47	Ленинградская область
48	Липецкая область
49	Магаданская область
50	Московская область
51	Мурманская область
52	Нижегородская область
53	Новгородская область
54	Новосибирская область
55	Омская область
56	Оренбургская область
57	Орловская область
58	Пензенская область
59	Пермский край	до 2005 года — Пермская область
60	Псковская область
61	Ростовская область
62	Рязанская область
63	Самарская область
64	Саратовская область
65	Сахалинская область
66	Свердловская область
67	Смоленская область
68	Тамбовская область
69	Тверская область
70	Томская область
71	Тульская область
72	Тюменская область
73	Ульяновская область
74	Челябинская область
75	Забайкальский край	до 2008 года — Читинская область
76	Ярославская область
77	Москва
78	Санкт-Петербург
79	Еврейская автономная область
80	бывший Агинский Бурятский автономный округ	с 2008 года в составе Забайкальского края
81	бывший Коми-Пермяцкий автономный округ	с 2005 года в составе Пермского края
82	Республика Крым	с 2014 года. (До 2007 года номера выдавались в Корякском автономном округе)
83	Ненецкий автономный округ
84	бывший Таймырский автономный округ	с 2007 года в составе Красноярского края
85	бывший Усть-Ордынский Бурятский автономный округ	с 2008 года в составе Иркутской области
86	Ханты-Мансийский автономный округ
87	Чукотский автономный округ
88	бывший Эвенкийский автономный округ	с 2007 года в составе Красноярского края
89	Ямало-Ненецкий автономный округ
90	Московская область	с 2001 года
91	Калининградская область	код используется только на экспортных транзитных номерах
92	Севастополь	с 2014 года
93	Краснодарский край	с 2005 года
94	Байконур	территории, находящиеся за пределами РФ
95	Чеченская республика	с 2000 года
96	Свердловская область	с 2006 года
97	Москва	с 2002 года
98	Санкт-Петербург	с 2004 года
99	Москва	с 1998 года
102	Республика Башкортостан	с 2006 года
113	Республика Мордовия	с 2009 года
116	Республика Татарстан	с 2006 года
121	Чувашская Республика	с 2008 года
122	Алтайский край	с 2019 года
123	Краснодарский край	с 2011 года
124	Красноярский край	с 2009 года
125	Приморский край	с 2005 года
126	Ставропольский край	с 2013 года
134	Волгоградская область	с 2012 года
136	Воронежская область	с 2010 года
138	Иркутская область	с 2013 года
142	Кемеровская область	с 2011 года
147	Ленинградская область	с 2019 года
150	Московская область	с 2006 года
152	Нижегородская область	с 2009 года
154	Новосибирская область	с 2010 года
156	Оренбургская область	с 2020 года
159	Пермский край	с 2007 года
161	Ростовская область	с 2007 года
163	Самарская область	с 2006 года
164	Саратовская область	с 2005 года
173	Ульяновская область	с 2007 года
174	Челябинская область	с 2007 года
177	Москва	с 2005 года
178	Санкт-Петербург	с 2010 года
186	Ханты-Мансийский автономный округ	с 2012 года
190	Московская область	с 2009 года
193	Краснодарский край	с 2019 года
196	Свердловская область	с 2013 года
197	Москва	с 2010 года
198	Санкт-Петербург	с 2018 года
199	Москва	с 2007 года
702	Республика Башкортостан	с 2019 года
750	Московская область	с 2013 года
716	Республика Татарстан	с 2017 года
761	Ростовская область	с 2019 года
763	Самарская область	с 2017 года
774	Челябинская область	с 2020 года
777	Москва	с 2013 года
790	Московская область	с 2020 года
797	Москва	с 2020 года
799	Москва	с 2017 года

Синяя книга Келли раскрывает самые и наименее популярные автомобильные бренды, сегменты по регионам США

Синяя книга Келли раскрывают самые и наименее популярные автомобильные бренды, сегменты по регионам США

Западные покупатели новых автомобилей с большей вероятностью будут покупать Tesla, южане — меньше Под влиянием бренда Согласно KBB.com

IRVINE, Калифорния, 6 января 2014 г. / PRNewswire / — Исследование KBB.com выявляет самые и наименее популярные автомобильные бренды и сегменты по регионам США, сообщает Kelley Blue Book www.kbb.com, ведущего поставщика информации о новых и подержанных автомобилях. Исследование Kelley Blue Book Market Intelligence, основанное на посещаемости KBB.com более 10 миллионов взрослых американцев, показывает, что покупатели новых автомобилей из западного региона США на 85 процентов чаще выбирают Tesla, чем покупатели из других регионов. . Из всех регионов южане наименее подвержены влиянию бренда при покупке автомобиля, о чем свидетельствует относительно небольшое 17-процентное предпочтение Infiniti по сравнению с другими брендами.Возможно, у производителей есть возможность завоевать долю рынка на Юге, поскольку эти покупатели не столь лояльны к какому-либо конкретному автопроизводителю. С другой стороны, покупатели на Среднем Западе на 64% чаще рассматривают Chrysler, а покупатели на Северо-Востоке на 56% чаще выбирают Subaru. Исследование KBB.com Market Intelligence показало, что ведущие бренды, наиболее покупаемые в определенных регионах США, часто имеют штаб-квартиры или сборочные предприятия в этом районе, что свидетельствует о сильной лояльности покупателей к бренду и их влиянию на изучение производителей, имеющих местные связи с их регионом.

(Логотип: http://photos.prnewswire.com/prnh/20121108/LA08161LOGO)

Самые популярные автомобильные бренды по региону США

Регион США *	Марка	Более высокая вероятность покупки бренда по сравнению с другими регионами США **
Запад	тесла	85%
Запад	отпрыск	68%
Средний Запад	Крайслер	64%
Средний Запад	Бьюик	53%
Юг	Инфинити	17%
Юг	RAM	14%
Северо-восток	Субару	56%
Северо-восток	Volvo	45%

Наименее популярные автомобильные бренды по U.S регион

Регион США *	Марка	Более низкая вероятность покупки бренда по сравнению с другими регионами США **
Запад	Бьюик	36%
Запад	Крайслер	30%
Средний Запад	Мерседес-Бенц	37%
Средний Запад	BMW	33%
Юг	Субару	42%
Юг	тесла	22%
Северо-восток	RAM	27%
Северо-восток	отпрыск	26%

«Кажется, что то, что популярно в одном регионе, игнорируется в другом», — сказал Артур Генри, аналитик Kelley Blue Book.«Жители Запада предпочитают стильные экономичные бренды, такие как Tesla и Scion, но те же бренды избегаются на Юге и Северо-Востоке. Жители Юга тяготеют к брендам, произведенным в том же регионе. Покупатели со Среднего Запада также предпочитают близость к брендам со штаб-квартирой или производством на собственном заднем дворе «.

Хотя отечественные автопроизводители имеют очень низкое проникновение на западный рынок, и Chrysler, и Buick находят отклик у покупателей на Среднем Западе больше, чем в любом другом регионе, благодаря лояльности к бренду и их общей поддержке американских брендов.Покупатели новых автомобилей на Среднем Западе на 64% и 53% чаще выбирают Chrysler и Buick соответственно. В то время как жители Среднего Запада с большей вероятностью будут делать покупки для отечественных, не роскошных брендов, они с меньшей вероятностью будут покупать импортные люксовые бренды, такие как Mercedes-Benz и BMW, а также все компактные роскошные автомобили.

«Известный как пояс для грузовиков в Америке, данные KBB.com показывают, что покупатели из Юга более склонны рассматривать модели RAM, чем покупатели из любого другого региона США», — сказал Карл Брауэр, старший аналитик Kelley Blue Book.«В то время как южан привлекает прочность и долговечность, которые предлагает бренд грузовиков RAM, они также с большей вероятностью будут покупать традиционные люксовые бренды, такие как Infiniti, чем покупатели из других частей страны из-за его штаб-квартиры в Теннесси».

Самый популярный сегмент по региону США

Регион США *	Сегмент	Более высокая вероятность открытия магазина по сравнению с другим U.С. Регионы **
Запад	Гибридный автомобиль	66%
Средний Запад	Полноразмерный кроссовер	42%
Юг	Полноразмерная Утилита	41%
Северо-восток	Компактный кроссовер	20%

Наименее популярный сегмент по У.S регион

Регион США *	Сегмент	Более низкая вероятность открытия магазина по сравнению с другими регионами США **
Запад	Полноразмерный кроссовер	24%
Средний Запад	Компактный люкс	34%
Юг	Гибридный автомобиль	19%
Северо-восток	Полноразмерная Утилита	33%

КББ.com также показало, что покупатели новых автомобилей из Запада на 66% чаще выбирают гибридный автомобиль, покупатели автомобилей Среднего Запада на 42% чаще выбирают полноразмерный кроссовер, покупатели из Юга на 41% чаще выбирают полноразмерный спорткар. Утилита, за ней следует Северо-Восток, который на 20 процентов чаще покупает компактный кроссовер.

«Западные покупатели новых автомобилей с большей вероятностью купят гибридный автомобиль и с меньшей вероятностью купят полноразмерный кроссовер из-за более высоких цен на бензин в таких штатах, как Калифорния», — сказал Брауэр.«Сегодня жители Запада не только экономят деньги на бензоколонках, они кажутся более заботливыми об окружающей среде, чем когда-либо прежде, и мы видим, как это отражается на автомобилях, которые они покупают».

Кроме того, данные KBB.com выявили существенные различия в популярных и непопулярных сегментах для каждого региона США, что аналогично результатам данных по автомобильным брендам.

«Судя по фактическим данным о покупках на KBB.com, гибриды являются синонимом Запада, а внедорожники — Югом», — сказал Генри.«Учитывая, что основными факторами, мотивирующими покупателей, являются топография, плотность населения мегаполисов и правительственные постановления, неудивительно, что на Северо-Востоке компактные кроссоверы предпочитают полноразмерным внедорожникам. на вершину с его вариантами полного привода, наряду с Volvo и его высокими рейтингами безопасности, которые помогают обоим брендам повысить интерес к этому региону ».

Чтобы увидеть, как KBB.com освещает самые и наименее популярные автомобильные бренды и сегменты, предоставленные U.Южный регион, включая инфографику, посетите http://www.kbb.com/car-news/all-the-latest/car-tastes-compared/2000010180/.

Для получения дополнительной информации и новостей с сайта KBB.com Kelley Blue Book посетите www.kbb.com/media/, подпишитесь на нас в Twitter по адресу www.twitter.com/kelleybluebook (или @kelleybluebook), как и на нашу страницу в Facebook по адресу www. facebook.com/kbb и узнавайте новости в Google+ по адресу https://plus.google.com/+kbb.

* Западные штаты: Аляска, Аризона, Калифорния, Колорадо, Гавайи, Айдахо, Монтана, Невада, Нью-Мексико, Орегон, Юта, Вашингтон и Вайоминг; Средние западные штаты: Иллинойс, Индиана, Айова, Канзас, Мичиган, Миннесота, Миссури, Небраска, Северная Дакота, Огайо, Южная Дакота и Висконсин; Южные штаты: Алабама, Арканзас, Делавэр, Округ Колумбия, Флорида, Джорджия, Кентукки, Луизиана, Мэриленд, Миссисипи, Северная Каролина, Оклахома, Южная Каролина, Теннесси, Техас, Вирджиния, Западная Вирджиния; Северо-восточные штаты: Коннектикут, Мэн, Массачусетс, Нью-Гэмпшир, Нью-Джерси, Нью-Йорк, Пенсильвания, Род-Айленд и Вермонт
** Источник данных — KBB.com октябрь 2012 г. — сентябрь 2013 г.

О Синей книге Келли (www.kbb.com)
Компания Kelley Blue Book, The Trusted Resource®, основанная в 1926 году, является единственным источником информации и оценки транспортных средств, которому доверяют и которым доверяют как потребители, так и автомобильная промышленность. Каждую неделю компания публикует на своем веб-сайте KBB.com с самым высоким рейтингом рыночные показатели в отрасли, в том числе в своей знаменитой Blue Book® Trade-In и рекомендованных розничных ценах, а также справедливой закупочной цене, в которой указывается, за что платят другие. новые авто на этой неделе.Компания также предоставляет цены на автомобили и их стоимость с помощью различных продуктов и услуг, доступных автосалонам, производителям автомобилей, финансовым и страховым компаниям, а также государственным учреждениям. Два года подряд сайт KBB.com компании Kelley Blue Book занимал наивысшее место в своей категории по капиталу бренда и был назван брендом года для онлайн-покупок автомобилей в Интернете по результатам исследования Harris Poll EquiTrend ^® в 2012 и 2013 годах. Kelley Blue Book Co., Inc. является дочерней компанией AutoTrader Group, в которую входит AutoTrader.com, vAuto, VinSolutions и HomeNet Automotive. AutoTrader Group является дочерней компанией Cox Enterprises с контрольным пакетом акций.

ИСТОЧНИК Kelley Blue Book

Для получения дополнительной информации: Чинтан Талати, 949-267-4855, [email protected], Бренна Робинсон, 949-267-4781 [email protected], или Натали Кумаратне, 949-267-4770, [email protected]

Водитель Chevy Silverado получил билет на буксировку прицепа длиной 53 фута

Полиция провинции Онтарио через Facebook

• Водителю в Канаде был выписан билет за буксировку 53-футового прицепа тяжелым пикапом.
• Прицеп был прикреплен к грузовику с помощью системы штифтов, которая каким-то образом сработала.
• Каким бы опасным это ни было, мы не могли не быть впечатлены очевидной способностью Chevy Silverado делать это в первую очередь.

То, что вы можете что-то сделать, не означает, что вы должны это делать. Это особенно верно, когда речь идет о буксировке прицепа длиной 53 фута с использованием стандартного пикапа в три четверти тонны.

Водитель из Онтарио, Канада, подключил 53-футовый прицеп — да, вроде тех, что буксируют полуприцепы — к Chevrolet Silverado середины 2000-х годов.Мы можем только догадываться, почему, или предполагать, пробовал ли водитель это раньше, но, тем не менее, приключение закончилось тем, что полиция провинции Онтарио остановила машину и выписала водителю билет, потому что, как можно было предположить, это не совсем безопасный практика на дороге общего пользования.

Полиция провинции Онтарио через Facebook

Судя по фотографиям, размещенным на странице полицейского управления в Facebook, водитель соорудил какую-то пневматическую тормозную систему, которая помогла бы буксировать прицеп, но определенно не была достаточной для обеспечения безопасности.

Этот контент импортирован из Facebook. Вы можете найти тот же контент в другом формате или найти дополнительную информацию на их веб-сайте.

Как показано на фотографиях, опубликованных полицией Онтарио в Facebook, водитель прикрепил прицеп с помощью булавки к сцепному устройству, в результате чего один из комментаторов Facebook пожаловался: «Как бы опасно это ни было. [ sic ] Я частично впечатлен с тем, что штифт выдерживал нагрузку при разгоне и торможении.«

Полиция провинции Онтарио

Этот контент импортирован из {embed-name}. Вы можете найти тот же контент в другом формате или найти дополнительную информацию на их веб-сайте.

Этот контент создается и поддерживается третьей стороной и импортируется на эту страницу, чтобы помочь пользователям указать свои адреса электронной почты. Вы можете найти больше информации об этом и подобном контенте на пианино.io

Tesla Маск надеется выпустить первые автомобили на заводе в Берлине в октябре

• Tesla отложила открытие завода, обвиняя немецкую бюрократию
• Маск твит: «Тур по фабрике 9 октября»
• Он добавляет: «Приоритет для жителей Бранденбурга. Berlin

БЕРЛИН, 13 августа (Рейтер) — Tesla (TSLA.O) надеется произвести первые автомобили на своей «Gigafactory» в Грюнхайде, недалеко от Берлина, в октябре или вскоре после этого, заявил в пятницу генеральный директор Илон Маск.

Tesla перенесла ожидаемое открытие гигафабрики на конец 2021 года, обвиняя немецкие бюрократические препятствия. Завод также столкнулся с сопротивлением местного населения из-за проблем, связанных с окружающей средой. подробнее

«Мы надеемся получить одобрение на производство первых автомобилей, может быть, в октябре, если нам повезет», — сказал Маск во время визита на завод с Армином Лашетом, консервативным кандидатом Германии на смену Ангеле Меркель на посту канцлера. .

Тем не менее, агентство по охране окружающей среды в Бранденбурге еще не дало окончательного одобрения, а это означает, что нельзя исключать дальнейшую задержку даже до 2022 года.

Tesla столкнулась с сопротивлением из-за завода, участок которого частично перекрывает охранную зону питьевой воды и граничит с заповедником. читать дальше

«В этом регионе так много воды, посмотрите вокруг», — сказал Маск на заводе, когда его спросили о проблемах с водой. «Здесь везде как вода. Тебе это кажется пустыней?» — спросил он, смеясь. «Идет много дождя».

«Мы получили большую поддержку, и мы очень ценим это», — сказал он. «Мы чувствуем себя желанными гостями и очень счастливы быть здесь, в Германии.«

Позже он написал в Твиттере, что приглашает местных жителей и широкую общественность на экскурсию по заводу.

« Гига Берлин-Бранденбургская ярмарка и экскурсия по фабрике 9 октября! »- написал он в Твиттере.« Приоритет для жителей Бранденбурга и Берлина, но также открыта для широкой публики ».

Генеральный директор Tesla Inc Илон Маск идет рядом с экраном, на котором отображается изображение автомобиля Tesla Model 3 во время церемонии открытия китайской программы Tesla Model Y в Шанхае, Китай, 7 января 2020 года. REUTERS / Али Сонг / Фото из файла / Фото из файла

Подробнее

КРАСНАЯ ЛЕНТА

Лашет, чьи личные рейтинги упали раньше, чем сентябрь.На 26 федеральных выборах после того, как он был замечен смеющимся во время посещения пострадавшего от наводнения города, заявил, что Германии необходимо сократить волокиту.

«Иногда создается впечатление, что изобрести что-то новое технологически проще, чем ликвидировать бюрократию в Германии», — сказал он репортерам, стоя бок о бок с Маском.

На вопрос, есть ли у него какие-либо советы для Лашета, которые помогут активизировать его предвыборную кампанию, Маск ответил: «Мы добавляем энергию прямо сейчас. Это растение — это энергия, экологически чистая энергия, которая является устойчивой.«

« Надеюсь … эта фабрика может послужить источником вдохновения для людей в Германии и по всей Европе », — добавил Маск. на федеральном уровне в Германии и на уровне ЕС, чтобы определить, приносят ли они чистую выгоду.

При постоянно увеличивающемся количестве правил, предупредил он, «в конечном итоге люди вообще не смогут что-либо делать».

«Это не всегда возможно. будьте о проблемах каждый день. Вы хотите просыпаться каждое утро, и все это просто проблема? — спросил Маск.«(Я хочу), чтобы люди вдохновлялись будущим, и не забывали иметь детей — это важно».

Подруга предпринимателя, поп-певица Граймс, в прошлом году родила супругу сына, которого они назвали X AE A-XII.

Написано Полом Каррелом Под редакцией Кэролайн Копли и Дэвида Холмса

Наши стандарты: принципы доверия Thomson Reuters.

Ой! | Мерседес-Бенц Эльмбрук

Дуг

Джулия, мы не можем сказать достаточно положительных отзывов о нашем опыте работы с вами и о дилерском центре в целом.Между Сью и Джоном Германом у вас наверняка были бдительные наблюдатели / клиенты с критическим взглядом. Сверху вниз, выдающаяся информация, большая внимательность / чувствительность и всестороннее великолепное впечатление. Ваше обращение к Сью особенно запомнилось, мистер Сантос проделал очень профессиональную, но личную работу … каждый должен узнать о нашей благодарности. Пожалуйста, передайте наши чувства.
Если не считать довольно заметной вмятины на моем текущем счете, я не мог бы быть более счастливым, чем осчастливить свою супругу… а она счастлива.Я подозреваю, что ее удовлетворение возрастет со временем, пробегом и продолжением контактов с вами и «семьей» Элмбруков.
Большое спасибо и особый отзыв за ваш предстоящий урок со Сью. Это услуга выше и выше!
Дуг

Пол Скарберри

Продавец был настоящим «автомобильным» парнем. Мало того, что он знал свой продукт, но и было очень комфортно говорить обо всех автомобилях в целом ….. ходовые качества, история, шасси, силовые установки и т. Д.В свою очередь, мне было очень комфортно. Никакого давления, хороших слушателей и никакой «позерства». Быстрые и разумные решения от высшего руководства. Приобрел свой первый «МЕРС» ….. это настоящая радость от вождения.

Мохаммед Хаго Мохаммед

Недавно я арендовал 4matic 2014 года у этого дилерского центра. Я работал с Джейми Руисом. Он проделал огромную работу, чтобы найти мне лучшую машину, которая соответствует моим потребностям. Переговоры и торговая сделка прошли гладко и гладко. Что мне больше всего нравится в этом месте, так это то, что они очень серьезно относятся к своему делу и готовы заключать сделки.

Sanket Vyas

В целом мой продавец (Джулия) оставил мне отличные впечатления, хотя я и купил машину, которую не видели в Интернете. Очень полезно с быстрыми обновлениями и электронными письмами. Очень рекомендую!

Mageria Kamau

Это лучшая оценка, которую я когда-либо давал коммерческой организации. Причина в том, что до обращения в этот дилерский центр я попробовал несколько других, и они возили меня туда и обратно, не зная, что им нужно сделать, чтобы помочь решить проблему.По телефону я смог получить определенный или очень близкий к определенному ответ о решении, я назначил встречу через несколько часов, когда я въехал, и все произошло лучше, чем я ожидал изначально. Я всегда уклоняюсь от посещения автосалонов классных автомобилей из-за стоимости, этот удивил меня ценой, так как я пошел к ним только как к месту моей последней надежды, думая, что они будут брать с меня плату, как с владельца Benz. Цена была более разумной, чем я получил бы в небольшой ремонтной мастерской.Я даю этому представительству все звезды. Я надеюсь, что так будет продолжаться еще долгие годы. • • •

Это лучшая оценка, которую я когда-либо давал коммерческой организации. Причина в том, что до обращения в этот дилерский центр я попробовал несколько других, и они возили меня туда и обратно, не зная, что им нужно сделать, чтобы помочь решить проблему. По телефону я смог получить определенный или очень близкий к определенному ответ о решении, я назначил встречу через несколько часов, когда я въехал, и все произошло лучше, чем я ожидал изначально.Я всегда уклоняюсь от посещения автосалонов классных автомобилей из-за стоимости, этот удивил меня ценой, так как я пошел к ним только как к месту моей последней надежды, думая, что они будут брать с меня плату, как с владельца Benz. Цена была более разумной, чем я получил бы в небольшой ремонтной мастерской. Я даю этому представительству все звезды. Я надеюсь, что так будет продолжаться еще долгие годы.

Санни Сингх

Скотт Нельсон и Джей Секхон из сервиса — настоящие профи !! Я впервые сдал свою машину на обслуживание к этому дилеру, и они очень хорошо обо мне заботятся.Однозначно рекомендую всем этого дилера !!

Алексей Т.

Большой опыт. Машина прибыла именно так, как было обещано и описано. Весь опыт был гладким и безупречным. Я бы ничего не хотел отличаться от этого опыта, кроме необходимости тратить деньги. Отличный продукт, отличный сервис и все до конца после продажи. Джейсон Мэйс завершил продажу, и я очень рекомендую его, если вы ищете автомобиль.

Рэндалл Хэммет Д.C.

Когда вам нужно САМОЕ ЛУЧШЕЕ, ищите Ivory Dabney! она преуспевает в обслуживании и контроле за продажами .. После 20 лет покупки у нее автомобилей она будет единственной, кто предложит вам самое выгодное предложение и последует за ним

Пользователь Google

Порекомендуйте этого дилера. Продажа и сервис! У меня было много Mercedes за эти годы, и они всегда заботились обо мне и моих машинах. Доверие является ключевым моментом, и я с гордостью могу сказать, что у меня это есть с этим дилером.

Tom Chapman

Недавно я купил для жены новый внедорожник Mercedes Benz.С продавцом (Джулией Хун) было очень легко работать, и она прямо назвала мне номера по телефону. Она очень помогла во всех аспектах продажи и доставки. В прошлом я купил 3 машины в этом представительстве и остался более чем доволен. Я определенно буду вести дела снова.

Джек Хикс

У меня был самый замечательный опыт покупки автомобиля онлайн в Mercedes Benz в Эльмбруке. Я работал с Джулией Хун, которая ответила на все мои вопросы и сняла все напряжение или беспокойство, которые у меня возникли при покупке автомобиля в Интернете.Она также ответила на все мои вопросы, которых у меня было довольно много. Джулия также попросила меня поговорить с генеральным менеджером Ларри Маковски, который был не менее полезным, но у него была дополнительная информация по некоторым конкретным вопросам, на которые мне нужно было ответить. Я без колебаний куплю в дилерском центре еще одну машину и порекомендую их всем, кто ищет там один из продуктов. Джек Х. • • •

У меня был самый замечательный опыт покупки автомобиля в Интернете в магазине «Мерседес Бенц» в Эльмбруке. Я работал с Джулией Хун, которая ответила на все мои вопросы и сняла все напряжение или беспокойство, которые у меня возникли при покупке автомобиля в Интернете.Она также ответила на все мои вопросы, которых у меня было довольно много. Джулия также попросила меня поговорить с генеральным менеджером Ларри Маковски, который был не менее полезным, но у него была дополнительная информация по некоторым конкретным вопросам, на которые мне нужно было ответить. Я без колебаний куплю в дилерском центре еще одну машину и порекомендую их всем, кто ищет там один из продуктов. Джек Х.

Роберт Илес

Я только что купил у Джулии две машины в MBOE. Обслуживание клиентов было отличным.Не пришлось ждать, и на все мои вопросы были даны ответы. Результатом остался очень доволен.

Пол Фокс

Третий раз — потрясающие впечатления. Я получил свои последние 3 машины от Ivory в Mercedes Benz в Эльмбруке — она ​​потрясающая! С ней было замечательно работать, она очень хорошо разбирается в машинах и помогает на протяжении всего процесса. Ivory продолжает отвечать после продажи с любыми вопросами или проблемами. С менеджером Ларри тоже приятно работать.Их обслуживание и внимание заставили меня вернуться! Я рекомендую их без раздумий!

Брэд Бергрен

Джулия Хун проделала большую работу! Очень рекомендую!

Джеймс Шелброк

На вопросы о характеристиках и цене автомобиля были даны терпеливые ответы. Пока это был очень хороший опыт

Пользователь Google

Как всегда, отличный сервис. Я всегда уверенно везу туда свой автомобиль.Замечательный сервисный отдел!

Пользователь Google

Мы купили несколько автомобилей в MB of Elmbrook и обслужили их здесь. Отличный продавец и обслуживающий персонал. Нам всегда было приятно.

Идентификация CD318, TSPAN8 и CD66c в качестве кандидатов-мишеней для основанной на CAR Т-клеточной иммунотерапии аденокарциномы поджелудочной железы

Скрининг антител на ксенотрансплантатах, полученных от пациентов

Все PDAC PDX были получены от Charles River Discovery Research Services Germany GmbH.Модели PDX были диссоциированы с использованием набора для диссоциации опухоли, человека в сочетании с диссоциатором GenentMACS ™ Octo с нагревателями (оба Miltenyi Biotec). Впоследствии мышиные клетки истощали с использованием набора Mouse Cell Depletion Kit (Miltenyi Biotec). Полученные суспензии клеток анализировали с использованием маркерного экрана MACS ^® , панель моноклональных антител человека (Miltenyi Biotec), содержащую 371 предварительно титрованное антитело с девятью контролями изотипов, или антитела-кандидаты, выбранные из этой панели для последующих этапов скрининга (дополнительный рис.1). Чтобы дифференцировать два образца PDX за одно измерение, один образец окрашивали с помощью набора CellTrace ™ Violet Cell Proliferation Kit (Invitrogen ™). Все образцы были измерены на проточном цитометре.

Анализ и ранжирование биоинформатических данных

После присвоения символов генов 50 лучшим кандидатам-мишеням на основе PDX, соответствующие данные об экспрессии генов и белков были получены из следующих источников:

Атлас белков человека ²⁶ (v15, https : //www.proteinatlas.org /), ProteomicsDB ²⁷ (https://www.proteomicsdb.org/), Human Proteome Map ²⁸ (http://www.humanproteomemap.org/), Genotype-Tissue Expression (GTEx, https: / /gtexportal.org/) и Genevestigator ⁷³ .

Атлас белков человека (HPA): на основе антител

Показатели экспрессии белка в HPA основаны на иммуногистохимических данных, вручную подсчитанных в отношении интенсивности окрашивания и доли окрашенных клеток. Мы определили долю 83 типов клеток и тканей, перечисленных в HPA, с учетом уровней экспрессии белка «не обнаружено», «низкий / средний» и «высокий».50 лучших кандидатов-мишеней были отсортированы в порядке убывания доли «не обнаруженных» типов клеток. В группе кандидатов, демонстрирующих одинаковую долю необнаруживаемых типов клеток, кандидаты были дополнительно отсортированы на основе доли типов клеток «средний / высокий» в порядке возрастания.

Атлас белков человека (HPA): RNAseq

Во время загрузки данных оценки экспрессии генов в HPA были основаны на значениях FPKM. Мы определили долю 32 типов тканей, перечисленных в HPA, с учетом уровней экспрессии генов «не обнаружено» (<1 FPKM), «низкий / средний» (1–50 FPKM) и «высокий» (> 50 FPKM).50 лучших кандидатов-мишеней были отсортированы в порядке убывания доли «не обнаруженных» типов клеток. Когда значение «не выражено» было установлено на пороге 0,5 TPM, рейтинги практически не изменились. В группе кандидатов, демонстрирующих одинаковую долю необнаруживаемых типов клеток, кандидаты были дополнительно отсортированы на основе доли типов клеток «средний / высокий» в порядке возрастания.

ProteomicsDB (PDB): на основе масс-спектрометрии

Данные экспрессии белка были получены как log10 нормализованные значения интенсивности iBAQ.Мы определили долю 66 типов тканей, перечисленных в ProteomicsDB, с отсутствующими значениями экспрессии белка для 50 лучших кандидатов-мишеней и ранжировали их в порядке убывания. Учитывались только пептиды, уникальные для целевого белка.

Карта протеома человека (HPM): на основе масс-спектрометрии

Данные экспрессии белка были получены в виде уровней интенсивности, масштабированных от 1 (самый низкий) до 10 (самый высокий). Мы определили долю 17 типов взрослых тканей и 6 типов клеток, перечисленных в HPM, отнесенных к произвольно определенным уровням экспрессии белка «не обнаружено / низкий» (уровни 0–3), «средний» (уровни 4–7) и « высокий »(уровни 8–10).50 лучших кандидатов-мишеней были отсортированы в порядке убывания доли «не обнаруженных» тканей. В группе кандидатов, демонстрирующих одинаковую долю необнаруживаемых типов клеток, кандидаты были дополнительно отсортированы на основе доли типов клеток «средний / высокий» в порядке возрастания. Учитывались только пептиды, уникальные для целевого белка.

GTEx: RNAseq

Данные, используемые для анализов, описанных в этой рукописи, были получены из GTEx_Analysis_2016-01-15_v7_RNASeQCv1.1.8. Мы определили долю 30 типов тканей, перечисленных в GTEx, отнесенную к медианным уровням экспрессии генов «не обнаружено» (<1 TPM), «низким / средним» (1–50 TPM) и «высоким» (> 50 TPM). . 50 лучших кандидатов-мишеней были отсортированы в порядке убывания доли «не обнаруженных» тканей. Когда значение «не выражено» было установлено на пороге 0,5 TPM, рейтинги практически не изменились. В группе кандидатов, демонстрирующих одинаковую долю необнаруживаемых типов клеток, кандидаты были дополнительно отсортированы на основе доли типов клеток «средний / высокий» в порядке возрастания.

Genevestigator

Данные экспрессии генов (пространство log2) были извлечены из коллекции данных микрочипов Genevestigator (виды: Homo sapiens, платформа: Affymetrix Human Genome U133 Plus 2.0, статус образца: здоровый; корень: тип клеток. Иерархические категории с идентичными значения выражений были сжаты). Двумерную иерархическую кластеризацию выполняли с использованием MeV 4.9.0 (http://mev.tm4.org, метрика расстояния: евклидово расстояние, метод связывания: полная кластеризация по сцеплению; оптимизация порядка листьев: гены и образцы).

Сумма рангов

Окончательный ранг был рассчитан на основе отношения суммы рангов из всех источников данных, деленной на количество источников данных, в которых она была найдена.

TCGA Research Network

Данные секвенирования РНК из PDAC были получены из Исследовательская сеть TCGA (https://www.cancer.gov/tcga). Мы отсортировали кандидатов-мишеней с наивысшим рейтингом (включая CD66c, CLA или SELPLG, соответственно, CD318 и TSPAN8) и выровняли их экспрессию по всем исследованным опухолевым тканям PDAC, включая один метастаз.

Рейтинг согласно Perna et al. (2017)

Perna и его коллеги ²⁹ разработали алгоритм для определения экспрессии целевых кандидатов по всему человеческому телу с использованием HPA, PDB и HPM в качестве входных баз данных. Мы воссоздали их метод, используя общедоступные наборы данных и несколько методологических отличий. Мы также зарегистрировали ₁₀ преобразованных данных из HPM и PDB, но не выполнили временную коррекцию данных HPM для множественных назначений генов. Впоследствии нормальные распределения были подогнаны к данным с использованием метода Левенберга-Марквардта.Для некоторых наборов данных это требовало игнорирования данных, близких к нулю, которые, как мы предполагаем, представляют собой шум, вносимый различными эффектами (например, гены, никогда не экспрессирующиеся в определенных типах тканей), и которые не соответствовали нормальному распределению. Эта аппроксимация кривой позволила получить средние и стандартные значения распределения, которые мы использовали, и для каждой кривой были рассчитаны максимум пика и стандартное отклонение.

Данные затем были разделены следующим образом: значения выражения между максимальным пиком и одним стандартным отклонением, указанным выше, считались «средними» ² ; значения выше этого порога считались «высокими» ³ выражено; значения выражения между пиковым максимумом и приведенным ниже стандартным отклонением считались «низкими» ¹ ; и все значения ниже этого порога были отнесены к категории «не обнаружено» (0).

Поскольку названия тканей в разных базах данных различались, они были согласованы с общепринятым названием ткани, как было предложено Perna et al. (Дополнительная таблица 2). Затем была создана итоговая таблица с отображением наивысшего значения для соответствующей ткани и целевого кандидата из всех баз данных.

Взвешивание жизненно важных и нежизнеспособных органов

Поскольку значительная целевая экспрессия в нежизнеспособных органах может быть приемлемой для терапии CAR Т-лимфоцитами, мы проверили, имеют ли наши целевые кандидаты разные рейтинги при сортировке по экспрессии жизненно важных или нежизнеспособных органов .Для этого мы разделили органы по этим двум группам в соответствии с Perna et al. ²⁹ . Мы провели рейтинг, как описано выше. Для дополнительных данных 3 учитывалась только экспрессия жизненно важных органов, в то время как экспрессия нежизнеспособных органов не принималась во внимание. Для дополнительных данных 4 мы обработали только не жизненно важные выражения, пренебрегая экспрессией жизненно важных органов. Таким образом, оба анализа воспроизводят наш исходный рейтинг. Чтобы количественно оценить разногласия между несколькими рейтингами, мы рассчитали коэффициенты ранговой корреляции Кендалла, используя R (v3.4) и функцию «cor.test», например, «cor.test (S2, S3_1fpkm, method =« kendall »)».

Циклическое иммунофлуоресцентное окрашивание

Первичные образцы PDAC человека и здоровые (нормальные прилегающие) ткани были собраны в Университетском медицинском центре Геттингена у пациентов, перенесших хирургическую резекцию опухолевых масс. PDX был получен из исследований in vivo в рамках этой статьи. Образцы PDAC, здоровые ткани или ткани PDX помещали в среду для замораживания тканей (Leica) и хранили при -70 ° C до дальнейшего использования.После этого на криостате CM3050 S (Leica) вырезали три среза размером 8 мкм, собирали на предметные стекла SuperFrost ^® Plus (Menzel) и хранили не более 2 недель при -70 ° C. В день использования срезы размораживали в ацетоне -20 ° C, а затем обрабатывали для окрашивания гематоксилином и эозином (HE) или иммунофлуоресценцией (IF).

Для окрашивания HE фиксированный ацетоном срез трижды погружали в воду и затем инкубировали в растворе гематоксилина Мейера (Carl Roth) в течение 7 минут. Срез переносили на 5 мин в воду и затем на короткое время погружали в раствор HCl / этанол (1% HCl, 70% этанол).После этого его промывали водой и окрашивали в растворе эозина / этанола (0,5 г эозина Y в 100 мл 70% этанола) в течение 5 мин. Затем срез был поэтапно дегидратирован сначала в 70% этаноле, затем в 96% этаноле и, наконец, в чистом этаноле с 3 погружениями для каждой концентрации. После этого ткань очищали двумя сменами ксилола (Carl Roth) с тремя погружениями в каждой. Окрашенный HE срез покрывали набором Roti ^® -Histo Kit (Carl Roth) и снимали крышку. Впоследствии срез исследовали с помощью светового микроскопа, чтобы определить интересующую область, которая была подтверждена патологом как неопластическая область.

После определения интересующей области еще один срез того же образца размером 8 мкм размораживали в ацетоне с температурой –20 ° C. Фиксированную ткань вскоре хранили в буфере для бега autoMACS ™ (Miltenyi Biotec) и перенесли на платформу обработки изображений MACSima ™ (Miltenyi Biotec). Платформа MACSima ™ Imaging Platform — это платформа циклической обработки изображений IF, обеспечивающая полностью автоматизированную визуализацию IF отдельных биологических образцов. Система работает путем итеративного флуоресцентного окрашивания, получения изображения и стирания сигнала с использованием нескольких меченых флуорохромом антител за цикл.Изображения были созданы в соответствии с инструкциями производителя и проанализированы с помощью ImageJ 1.49v. Список использованных антител можно найти в дополнительных данных 5.

Анализ микроматрицы здоровых тканей и количественная оценка экспрессии

HDR-изображения были проверены вручную с помощью ImageJ 1.49v на наличие каких-либо структур, которые могут помешать последующему автоматическому анализу. Поэтому изображения, содержащие слипшиеся конъюгаты, набухшие ядра, остатки ткани или другие артефакты, были исключены из дальнейшего анализа.Все остальные изображения были загружены в программу CellProfiler v2.2.0 ⁷⁴ . Мы определили ядра клеток с помощью окрашивания DAPI как первичные объекты и исключили ядра, соприкасающиеся с границей изображения. Вторичные объекты были определены как первичные объекты, увеличенные на 5–6 пикселей в зависимости от плотности ядер, что позволило нам приблизиться к форме клетки. Затем мы извлекли среднюю интенсивность флуоресценции соответствующих кандидатов-мишеней для каждой клетки (вторичный объект). Чтобы определить фон, мы использовали неспецифическое контрольное (S) антитело REA в качестве контроля изотипа и вычитали интенсивность контроля из интенсивности целевого кандидата.Для отображения изображения на рисунках мы загрузили соответствующее изображение PDAC каждой цели в ImageJ и автоматически настроили его. Затем мы загрузили все другие изображения тканей с тем же временем возбуждения и настроили отображение на те же параметры, что и для изображения PDAC.

Иммунофлуоресцентное и иммуногистохимическое окрашивание тканей, залитых парафином

Залитые парафином ткани o.t. трансплантированные человеческие клетки AsPC1 и BxPC3, а также ткани и метастазы PDAC человека (полученные от Proteogenx) разрезали на срезы 2–5 мкм и собирали на предметных стеклах.Впоследствии срезы либо депарафинизировали и окрашивали HE, как описано ранее ⁷⁵ , либо депарафинизированные и регидратированные срезы окрашивали с использованием IF или IHC. Вкратце, залитые парафином срезы очищали тремя сменами ксилола в течение 2 мин. Затем срезы регидратировали в трех сменах 100% этанола, одной смене 95%, одной смене 70% и, наконец, водопроводной воде. Каждое изменение занимало 2 мин. Затем образцы окрашивали НЕ, как описано выше.

ИГХ окрашивание

ИГХ окрашивание о.т. CDX и его метастазы были проведены с использованием анти-CLA (клон HECA-452, Miltenyi Biotec, 130-091-634, 1/100), анти-CD66c (поликлональный, Abcam, ab199277, 1/100), анти-CD318 (поликлональный , Invitrogen, PA5-17245, 1/50), антитела против TSPAN8 (поликлональные, Abcam, ab230488, 1/100), антитела против пероксидазы хрена кролика (HRP) (поликлональные, Medac, 414142F) и Avidin-HRP (Invitrogen 18-4100-94). Срезы кипятили в течение 20 минут в растворе для поиска мишени (Agilent) либо с pH 6,0 для CLA, CD66c и TSPAN8, либо с pH 9.0 для CD318 с последующей инкубацией в течение 5 минут в ледяной воде и двукратной промывкой буфером TBS в течение 5 минут каждое. После этого срезы инкубировали в течение 10 минут с 3% перекисью водорода при комнатной температуре с последующими двумя 5-минутными стадиями промывки TBS. Неспецифическое связывание антител предотвращали с помощью 20-минутного блокирования с помощью Fish block (SurModics). Первичное окрашивание антител проводили в течение ночи при 4 ° C. Образцы промывали и добавляли вторичное антитело (анти-кроличий HRP, неразбавленный или авидин-HRP, 1: 500) на 30 мин (анти-кроличий HRP) или 1 час (авидин-HRP) при комнатной температуре.Затем образцы промывали и добавляли к срезам ферментный субстрат (AEC, BD Pharmingen, Cat. 551015) на 20 мин при комнатной температуре. Изображения получали с использованием микроскопа Axioskop II (Zeiss) и цветной камеры Axiocam 105 (Zeiss).

IF-окрашивание

Ткани PDAC человека и их метастазы были окрашены анти-CD66c (поликлональным, Abcam, ab199277, 1/100), анти-TSPAN8 (поликлональным, Abcam, ab230488, 1/100), анти-CD318 (поликлональным , Abcam, ab223743, 1/50), антицитокератин-FITC (клон REA831, Miltenyi Biotec, 130-112-931, 1/10) и анти-кроличий PE (клон 2A9, Southern Biotech, 4090-09, 1/125).Срезы кипятили в течение 20 мин и кратковременно промывали буфером PEB. Затем срезы блокировали с использованием реагента для блокирования FcR, человека (Miltenyi Biotec) в течение 15 мин при комнатной температуре. Срезы промывали трижды, а затем окрашивали первичными антителами в течение ночи при 4 ° C. Снова образцы промывали PEB и ядра клеток окрашивали в течение 15 мин при комнатной температуре, используя раствор для окрашивания DAPI (Miltenyi Biotec). Срезы снова промывали и проводили вторичное окрашивание в течение 1,5 ч при 4 ° C с использованием анти-кроличьего ПЭ. Одновременно образцы инкубировали с антителом против цитокератина-FITC.После этого образцы были промыты и предметные стекла были покрыты, используя среду для фиксации флуоресценции Dako Fluorescence Mounting Medium (Agilent). Изображения были получены с использованием системы визуализации EVOS M5000 (Thermo Fisher).

Проточно-цитометрический анализ первичного образца PDAC

Опухолевые ткани семи пациентов с PDAC, перенесших хирургическую резекцию опухолевой массы, были собраны в Университетском медицинском центре Геттингена. Опухоли диссоциировали с использованием набора для диссоциации опухолей, человека в сочетании с диссоциатором GenentMACS ™ Octo с нагревателями (оба Miltenyi Biotec) и готовили для проточной цитометрии, как описано выше.

Клеточные линии и условия культивирования

Клетки 293T почек эмбриона человека (HEK293T, ACC 635) были получены из DSMZ — Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур. Клетки BxPC3 (CRL-1687) и AsPC1 (CRL-1682) получали из АТСС и культивировали в соответствии с рекомендациями. Для совместного культивирования с Т-клетками их трансдуцировали для экспрессии люциферазы светлячка (Luc) и зеленого флуоресцентного белка (GFP). Клеточная линия PanCa0201 была получена из первичной биопсии PDAC человека, диссоциирована, как описано выше, и опухолевые клетки были выделены перед посевом с использованием набора для выделения опухолевых клеток человека (Miltenyi Biotec).Впоследствии опухолевые клетки культивировали с использованием среды Pancreas TumorMACS (Miltenyi Biotec). Клеточную линию PanCa0201 также трансдуцировали для экспрессии Luc и GFP. Для проверки подлинности используемых клеточных линий мы использовали службу аутентификации человеческих STR-профилей (ATCC).

Выделение Т-клеток и генерация CAR Т-клеток

Мононуклеарные клетки периферической крови (PBMC) были выделены центрифугированием в градиенте плотности из лейкоцитов здоровых анонимных доноров (Немецкий Красный Крест, Дортмунд).Т-клетки были очищены от PBMC с использованием набора Pan T Cell Isolation Kit, человека (Miltenyi Biotec) и активированы в среде TexMACS ™ (Miltenyi Biotec), содержащей T Cell TransAct ™, человека (Miltenyi Biotec) и 100 МЕ / мл рекомбинантного человеческого IL- 2 IS, исследовательский уровень (IL-2) (Miltenyi Biotec) или 12,5 нг / мл рекомбинантного человеческого интерлейкина IL-7 и 12,5 нг / мл рекомбинантного человеческого IL-15 (оба Miltenyi Biotec) для экспериментов по экспрессии CLA. Т-клетки трансдуцировали через 24 часа после активации с использованием псевдотипированных лентивирусных супернатантов гликопротеина G вируса везикулярного стоматита (VSV-G), полученных из трансфицированных клеток HEK293T.Супернатанты концентрировали и хранили при -70 ° C до трансдукции. Через три дня после активации T Cell TransAct ™, человеческий, вымывали из среды и Т-клетки культивировали с 10 МЕ / мл IL-2, содержащим среду TexMACS ™. Т-клетки использовали для анализов in vitro напрямую или замораживали до дальнейшего использования для испытаний in vivo через 12–14 дней после очистки от PBMC. Замороженные Т-клетки, которые использовали для тестирования in vivo, размораживали за 24 часа до инъекции в среде TexMACS ™ без дополнительных добавок. В день использования количество живых CAR Т-клеток определяли с помощью проточной цитометрии и окрашивания Т-клеток с помощью 7-AAD и рецептора низкоаффинного фактора роста нервов против человека (LNGFR) (оба Miltenyi Biotec).

Создание плазмид CAR

Плазмиды, кодирующие конструкции CAR, получали с использованием стандартных методов молекулярной биологии и клонирования. Все они включали одноцепочечные вариабельные фрагменты мыши (scFvs), специфичные для соответствующих кандидатов-мишеней (CLA, CD66c, CD318 или TSPAN8), которым предшествовал лидерный пептид CD8α. Последовательности легкой и тяжелой цепей scFv были такими же, как и для антител, используемых во время обнаружения мишени. scFv использовали в обеих возможных ориентациях и были связаны с линкером глицин-серин.За scFv следовали спейсеры разного размера. Библиотека скелетов включала либо шарнир человеческого IgG4 из доменов Ch3-Ch4 (L; длинный спейсер; 228 аминокислотных остатков), шарнир человеческого IgG4 из домена Ch4 (средний спейсер; 119 аминокислотных остатков), шарнир человеческого IgG4 из последовательности между Домены Ch3 и Ch2 (XS; очень короткий спейсер; 12 аминокислотных остатков) или спейсер CD8α человека (S; короткий спейсер; 45 аминокислотных остатков). Все спейсерные домены IgG4 содержали мутацию 4/2 NQ в домене Ch3, а также замену S → P в шарнирной области для уменьшения связывания FcR.Все CAR имеют один и тот же трансмембранный домен CD8α и содержат внутриклеточные сигнальные домены, происходящие из 4-1BB / CD3ζ. Последовательность CAR была связана с последовательностью P2A для индукции совместной экспрессии усеченного LNGFR.

Анализы совместного культивирования Т-клеток-мишеней

Клетки-мишени инокулировали в двух экземплярах в 96-луночных культуральных планшетах с плотностью 1–5 × 10 ⁴ клеток на лунку в 100 мкл соответствующей культуральной среды. Непосредственно после этого или через 24 часа добавляли Т-клетки CAR ⁺ в соотношении Е: Т 5: 1, 2: 1 или 1: 1.Конечный объем сосуда составлял 200 мкл. Количество Т-клеток в фиктивном контроле доводили до общего количества Т-клеток в группе CAR с наибольшим общим количеством клеток. Цитотоксичность измеряли как уменьшение площади зеленой поверхности с помощью системы анализа живых клеток IncuCyte ^® S3 (Sartorius) и прилагаемого программного обеспечения IncuCyte S3 (v2017A, v2018C и v2019A). Площадь поверхности в начале эксперимента считалась 100%, и последующее уменьшение или увеличение площади поверхности принималось в соответствие.В конце совместного культивирования, либо через 48 часов, либо через 6 дней, CAR Т-клетки анализировали с помощью проточного цитометра на предмет их экспрессии TIM-3 или 4-1BB, LAG-3 и PD-1. Кроме того, через 48 ч 100 мкл среды использовали для анализа высвобождения цитокинов. В случае продолжения совместного культивирования снова добавляли 100 мкл свежей среды для клеток-мишеней. Содержание цитокинов измеряли с помощью набора MACSPlex Cytokine 12 для человека (Miltenyi Biotec).

Нормализация для уничтожения in vitro, высвобождения цитокинов и экспрессии маркеров для перекрестной сопоставимости

Чтобы лучше сравнить эффективность конструкций CAR между клеточными линиями, анализами и донорами, мы нормализовали показания для каждого анализа.Мы нормализовали высвобождение цитокинов GM-CSF, IL-2, TNF-α и INF-γ до наивысшего значения для каждого цитокина и рассчитали по ним среднее значение, в результате чего было получено значение цитокина. Мы нормализовали до максимального количества клеток CAR ⁺ , экспрессирующих соответствующий маркер, при этом маркеры были PD-1, LAG-3, TIM-3, 4-1BB и 4-1BB / LAG-3 дважды положительными. Затем мы вычислили среднее значение нормализованных значений, в результате чего получилось значение маркера. Для умерщвления мы использовали максимальное уменьшение площади зеленой поверхности через 48 часов и 6 дней в качестве значения, к которому нужно нормализовать.Опять же, среднее значение 48 часов и 6 дней привело к убойной ценности. Воздушные диаграммы были созданы с использованием R (v3.4) с пакетами reshape2, ggplot2 и viridis.

Доклинические модели мышей

Все эксперименты были одобрены Государственным комитетом по контролю за животными в СРВ, Германия или Нижняя Саксония, Германия и проводились в соответствии с руководящими принципами и правилами (Landesamt für Natur, Umwelt und Verbraucherschutz NRW, номер разрешения 84-02.04. .2017.A320 и Niedersächsisches Landesamt für Verbraucherschutz und Lebensmittelsicherheit, номера сертификатов 33.9-42502-04-13 / 1085 и 33.9-42502-04-14 / 1511). Мышей содержали в станциях IVC при комнатной температуре с циклом темнота / свет 12/12 ч и влажностью от 45% до 65%. Для окрашивания ИГХ устанавливали ортотопический CDX из клеток AsPC1 и BxPC3, как описано ранее ⁷⁶ . Вкратце, анестезия проводилась внутрибрюшинной инъекцией кетамина (75–100 мг / кг) и ксилазина (15–20 мг / кг). Была проведена лапаротомия длиной около 1 см, после чего была обнажена поджелудочная железа путем легкого натяжения желудка.Затем инъецировали 1 × 10 ⁶ клеток PDAC в 15 мкл PBS. Затем поджелудочную железу переместили в брюшную полость. Брюшину закрыли непрерывным швом из викрила (Metric 1.5, Ethicon, Norderstedt, Германия), а кожу — узловым швом. Для экспериментов с CAR CDX устанавливали путем инъекции 1 × 10 ⁶ клеток BxPC3 или AsPC1 подкожно. в правом боку у мышей NOD SCID gamma (NSG; NOD.Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Wjl / SzJ) (лаборатория Джексона, Бар-Харбор, США, предоставлена ​​Charles River).Как только опухоли достигли 25 мм² при измерении штангенциркулем, 5 × 10 ⁶ или 1 × 10 ⁷ CAR Т-клеток вводили в хвостовую вену. Количество инъецированных фиктивных Т-клеток доводили до общего количества Т-клеток в группе CAR с наибольшим общим количеством клеток. Противоопухолевый ответ измеряли продольно с использованием системы визуализации in vivo (PerkinElmer, Waltham, USA) после внутрибрюшинной инъекции 100 мкл (30 мг / мл) D-люциферина (калиевая соль, LUCK-2G, GoldBio) с использованием прилагаемого программного обеспечения Living Изображение (v4.7.3). Все меры по обеспечению благополучия мышей были выполнены с соблюдением соответствующих руководящих принципов использования животных и этических норм. По возможности опухоли иссекали и разрезали пополам. Одну половину заливали в раствор для замораживания тканей (Leica) и хранили при -70 ° C до дальнейшего использования. Другая половина была диссоциирована, как указано выше, и Т-клетки были проанализированы с помощью проточной цитометрии. Ex vivo анализ селезенки выполняли после диссоциации с использованием диссоциатора GentMACS ™ Octo с нагревателями в соответствии с протоколом производителя (Miltenyi Biotec) и лизиса эритроцитов с использованием раствора для лизиса красных кровяных телец (Miltenyi Biotec) с использованием проточного цитометра.

Проточная цитометрия

Все образцы были измерены на анализаторе 10 MACSQuant ^® и проанализированы с использованием программного обеспечения MACSQuantify ™ v2.13.0, FlowJow v10.7.1 и Microsoft Excel для Windows 2016. Конъюгаты антител, которые использовали для экспрессии поверхностных маркеров на Первичные ткани PDAC, PDX и анализ Т-клеток перечислены в дополнительных данных 5. Выборки были выполнены, как показано на дополнительном рис. 2, и для набора для иммунофенотипирования с 8 цветами, человека (Miltenyi Biotec), как было предложено поставщиком, за исключением что вместо CD3-PE использовался соответствующий антиген-мишень.Окрашивание конъюгатами антител от Miltenyi Biotec проводили в соответствии с рекомендациями поставщика. Поэтому конъюгаты добавляли к суспензиям клеток в конечном соотношении 1:11 или 1:50 и инкубировали 10 мин при 4 ° C. Антитела от Sigma-Aldrich и Thermo Fisher наносили в концентрации 10 мкг / мл и инкубировали в течение 30 мин при 4 ° C. После инкубации выполняли стадию промывки, добавляя PEB в количестве, превышающем 9-кратное количество окрашивающего раствора. Клетки центрифугировали и ресуспендировали в соответствующих объемах PEB и измеряли на проточном цитометре.Мертвые клетки исключались с помощью PI или 7-AAD. Список использованных антител можно найти в дополнительных данных 5.

Статистика

Если не указано иное, все графики показывают среднее значение с полосами ошибок, представляющими стандартную ошибку среднего. Статистические сравнения между более чем двумя группами проводились с помощью двухфакторного дисперсионного анализа со значением P ​​ <0,05 с использованием GraphPad Prism 7. Для всех экспериментов на мышах количество использованных независимых мышей указано в легенде к рисунку.Для экспериментов по уничтожению цитокинов, маркеров и клеток in vitro по меньшей мере n = 2 лунки, и эксперименты повторяли по меньшей мере дважды.

Этические проблемы

Для всех исследований с использованием первичной ткани человека было получено письменное информированное согласие в соответствии с руководящими принципами утвержденного протокола наблюдательного совета Universitätsmedizin Göttingen.

Мононуклеарные клетки периферической крови (PBMC) были выделены из лейкоцитов здоровых анонимных добровольцев, приобретенных в Немецком Красном Кресте Дортмунда.Все образцы крови обрабатывались в соответствии с необходимыми процедурами этики и безопасности.

Все эксперименты на животных были одобрены Государственным комитетом по надзору за животными в СРВ или Нижней Саксонии, Германия, и проводились в соответствии с руководящими принципами и правилами.

Образцы цельной здоровой крови были взяты у добровольных здоровых доноров, ранее давших письменное согласие.

Сводка отчетов

Дополнительная информация о дизайне исследований доступна в Сводке отчетов по исследованиям природы, связанной с этой статьей.

Руководство Quartus II, версия 9.0 (полные 5 томов)

% PDF-1.3 % 1 0 объект > эндобдж 2 0 obj / Фильтр /Adobe.PPKLite / M (D: 200112659-08’00 ‘) / Имя (Продукт Acrobat v8.0 P23 0002337) / Prop_Build > /Фильтр > / PubSec >>> /Ссылка [> / Тип / SigRef >>] / Подфильтр /adbe.pkcs7.detached / Тип / Sig >>>> / Threads 10 0 R / Type / Catalog / ViewerPreferences >>> эндобдж 3 0 obj > / Шрифт >>> / Поля 101501 0 R / SigFlags 2 >> эндобдж 4 0 obj > транслировать FrameMaker 8.02009-03-02T11: 27: 02-08: 002009-02-19T12: 38: 55Z2009-03-02T11: 27: 02-08: 00 (c) 2008, Altera Corporation. Все права защищены. Acrobat Distiller 8.0.0 (Windows) Quartus II Handbook Version 9.0 (Complete 5 volume) application / pdf

1. Quartus II Handbook Version 9.0 (Complete 5 volume)
2. Корпорация Альтера
3. Руководство Quartus II, версия 9.0 (полные 5 томов)
4. Руководство Quartus II, версия 9.0 (полные 5 томов)
uuid: 819262aa-abc1-49cf-b259-8b03a1bfd9e7uuid: 0dc58349-8aa2-4d2b-9076-d67bd6e5e80e (c) 2009, Altera Corporation.Все права защищены. конечный поток эндобдж 5 0 obj > эндобдж 6 0 obj > эндобдж 7 0 объект > эндобдж 8 0 объект > эндобдж 9 0 объект > эндобдж 10 0 obj [11 0 R 12 0 R 13 0 R 14 0 R] эндобдж 11 0 объект

Настройка и использование внешнего DNS с Route53 в кластере EKS

Как работает внешний DNS?

Короче говоря, внешний DNS — это модуль, работающий в вашем кластере EKS , который наблюдает за всеми вашими входящими данными .Когда он обнаруживает вход с указанным хостом, он автоматически выбирает имя хоста, а также конечную точку и создает запись для этого ресурса в Route53. Если хост изменен или удален, внешний DNS немедленно отразит изменение в Route53.

Как настроить внешний DNS в кластере

Настройку можно разделить на две части: настройка разрешений, (чтобы предоставить вашей службе доступ к Route53) и развертывание внешнего DNS .

Настройка разрешений Route53 для внешнего DNS

В этом руководстве мы будем использовать роль IAM с поставщиком идентификаторов , этот подход использовался и задокументирован в других руководствах, например, по балансировщикам нагрузки приложений AWS.

Основная идея здесь — предоставить внешнему модулю DNS разрешение для создания , обновления и удаления записей Route53 в вашей учетной записи AWS. Для этого нам нужно использовать поставщика удостоверений в сервисе AWS IAM. Поставщик удостоверений позволяет внешнему пользователю брать на себя роли в вашей учетной записи AWS, устанавливая доверительные отношения.

Настройка поставщика удостоверений

Чтобы создать поставщика удостоверений, вам понадобятся 3 вещи: поставщик удостоверений типа , , аудитория , и URL-адрес поставщика .В этом руководстве мы будем использовать OpenId Connect для типа провайдера и sts.amazonaws.com для аудитории.

URL-адрес поставщика может быть разным, чтобы получить URL-адрес поставщика , вы можете использовать следующую команду:

aws eks description-cluster --name --query «cluster.identity.oidc.issuer» - выходной текст

Результат должен выглядеть примерно так:

https: //oidc.eks. .amazonaws.com / id / EXAMPLE86F27C29EF05B482628D9790EA7066.

Теперь у вас есть все необходимое для настройки собственного поставщика удостоверений !

Перейдите в раздел провайдеров идентификационной информации IAM в консоли AWS, и создаст нового провайдера .

Теперь, когда у вас есть поставщик удостоверений , все, что осталось сделать, — это создать роль IAM с разрешениями Route53 и доверительными отношениями с вашим новым поставщиком.

Сначала создайте новую роль в IAM и доверяйте своему провайдеру, выбрав Web Identity и введя информацию о своем провайдере.

После завершения нажмите , создайте новую политику и введите в JSON следующее:

Затем присоедините к роли AmazonEKSClusterPolicy.

После создания роли сохранит ARN , он понадобится вам позже.

Установка внешнего DNS

Мы установим внешний DNS с помощью helm, если у вас не установлен helm на машине, вы можете найти инструкции по установке helm.

После установки helm подключитесь к кластеру и выполните следующую команду:

RELEASE_NAME — имя выпуска руля, может быть любым (например, external-dns)

DOMAIN_FILTER — имя вашей зоны, размещенной на Route53, если *.example.com будет example.com. Вы можете найти эту информацию в консоли AWS (Route53)

HOSTED_ZONE_ID — идентификатор вашей зоны хостинга в AWS. Вы можете найти эту информацию в консоли AWS (Route53)

ROLE_ARN - ARN роли, которую вы создали ранее в учебнике

После того, как вы запустите команду, вы можете проверить, что созданная вами служба работает в вашем кластере:

kubectl get po -n kube-system (вы должны увидеть внешний модуль DNS)

Использование внешнего DNS

Чтобы создать новую запись Route53 для ваших служб, все, что вам нужно сделать, это добавить аннотацию: external-dns.alpha.kubernetes.io/hostname

Пример для службы LoadBalancer :

NodePort сервис:

Для входа :

Отладка внешнего DNS

Если записи Route53 не были созданы после 5 минут , вы можете проверить журналы вашего внешнего модуля DNS.