165 регион: 65 регион (165) — это какая область России

Содержание

Rija VEF Hotel 3* (Латвия/Рижский регион/Рига). Отзывы отеля. Рейтинг отелей и гостиниц мира

Всего упоминаний	28 Положительных	3 Отрицательных
Сервис и обслуживание	10 Положительных	1 Отрицательных
Еда и напитки	9 Положительных	1 Отрицательных
Номера	4 Положительных	1 Отрицательных
Инфраструктура отеля	2 Положительных	0 Отрицательных
Подходит для отдыха	1 Положительных	0 Отрицательных
Размещение в отеле	1 Положительных	0 Отрицательных
Расположение отеля	1 Положительных	0 Отрицательных

Код 906 – какой оператор связи, регион

* Внимание! Любой номер может быть перенесен к другому оператору. Для точного определения принадлежности номера используйте функцию определения оператора

Номера	Оператор	Регион
906-0xxxxxx	Билайн	Москва
906-10xxxxx	Билайн	Республика Башкортостан
906-11xxxxx 120xxxx 121xxxx 122xxxx 123xxxx 124xxxx	Билайн	Республика Татарстан
906-125xxxx 126xxxx 127xxxx 128xxxx 129xxxx	Билайн	Самарская область
906-130xxxx 131xxxx 132xxxx 133xxxx 134xxxx 135xxxx 136xxxx	Билайн	Чувашская Республика
906-137xxxx 138xxxx 139xxxx	Билайн	Республика Марий Эл
906-140xxxx 141xxxx 142xxxx 143xxxx 144xxxx 145xxxx 146xxxx 147xxxx	Билайн	Ульяновская область
906-148xxxx 149xxxx 150xxxx 151xxxx 152xxxx 153xxxx 154xxxx 155xxxx	Билайн	Саратовская область
906-156xxxx 157xxxx 158xxxx 159xxxx	Билайн	Пензенская область
906-160xxxx 161xxxx 162xxxx 163xxxx 164xxxx	Билайн	Республика Мордовия
906-165xxxx 166xxxx 167xxxx 168xxxx 169xxxx 170xxxx 171xxxx 172xxxx 173xxxx 174xxxx 175xxxx	Билайн	Волгоградская область
906-176xxxx	Билайн	Республика Калмыкия
906-177xxxx 178xxxx 179xxxx	Билайн	Астраханская область
906-180xxxx 181xxxx 182xxxx 183xxxx 184xxxx 185xxxx 186xxxx	Билайн	Ростовская область
906-187xxxx	Билайн	Краснодарский край
906-188xxxx	Билайн	Республика Северная Осетия
906-189xxxx	Билайн	Кабардино-Балкарская Республика
906-190xxxx 191xxxx 192xxxx	Билайн	Республика Хакасия
906-193xxxx 194xxxx 195xxxx	Билайн	Новосибирская область
906-196xxxx	Билайн	Алтайский край
906-197xxxx	Билайн	Омская область
906-198xxxx 199xxxx	Билайн	Томская область
906-200xxxx 201xxxx 202xxxx 203xxxx 204xxxx 205xxxx	Билайн	Новгородская область
906-206xxxx 207xxxx 208xxxx 209xxxx	Билайн	Республика Карелия
906-21xxxxx	Билайн	Калининградская область
906-220xxxx 221xxxx 222xxxx 223xxxx 224xxxx	Билайн	Псковская область
906-225xxxx 226xxxx 227xxxx 228xxxx 229xxxx	Билайн	Санкт-Петербург
906-23xxxxx	Билайн	Калининградская область
906-24xxxxx 25xxxxx 26xxxxx 27xxxxx	Билайн	Санкт-Петербург
906-280xxxx 281xxxx 282xxxx 283xxxx 284xxxx 285xxxx	Билайн	Архангельская область
906-286xxxx 287xxxx 288xxxx 289xxxx 290xxxx 291xxxx	Билайн	Мурманская область
906-292xxxx 293xxxx 294xxxx 295xxxx 296xxxx 297xxxx 298xxxx 299xxxx	Билайн	Вологодская область
906-30xxxxx 31xxxxx	Билайн	Саратовская область
906-32xxxxx 330xxxx 331xxxx 332xxxx 333xxxx	Билайн	Республика Татарстан
906-334xxxx 335xxxx 336xxxx	Билайн	Республика Марий Эл
906-337xxxx 338xxxx 339xxxx 340xxxx 341xxxx 342xxxx 343xxxx 344xxxx 345xxxx 346xxxx 347xxxx	Билайн	Самарская область
906-348xxxx 349xxxx 35xxxxx 36xxxxx	Билайн	Нижегородская область
906-370xxxx 371xxxx 372xxxx 373xxxx 374xxxx 375xxxx 376xxxx 377xxxx	Билайн	Республика Башкортостан
906-378xxxx 379xxxx	Билайн	Республика Мордовия
906-38xxxxx	Билайн	Чувашская Республика
906-390xxxx 391xxxx 392xxxx 393xxxx 394xxxx	Билайн	Ульяновская область
906-395xxxx 396xxxx 397xxxx 398xxxx 399xxxx	Билайн	Пензенская область
906-400xxxx 401xxxx 402xxxx 403xxxx 404xxxx 405xxxx 406xxxx 407xxxx 408xxxx 409xxxx 410xxxx	Билайн	Волгоградская область
906-411xxxx 412xxxx 413xxxx	Билайн	Ставропольский край
906-414xxxx 415xxxx 416xxxx 417xxxx 418xxxx 419xxxx 42xxxxx 430xxxx	Билайн	Ростовская область
906-431xxxx 432xxxx 433xxxx 434xxxx 435xxxx 436xxxx	Билайн	Краснодарский край
906-437xxxx	Билайн	Республика Калмыкия
906-438xxxx	Билайн	Республика Адыгея
906-439xxxx	Билайн	Ростовская область
906-440xxxx 441xxxx 442xxxx	Билайн	Ставропольский край
906-443xxxx 444xxxx 445xxxx	Билайн	Карачаево-Черкесская Республика
906-446xxxx 447xxxx 448xxxx 449xxxx 450xxxx	Билайн	Республика Дагестан
906-451xxxx	Билайн	Волгоградская область
906-452xxxx 453xxxx 454xxxx	Билайн	Ростовская область
906-455xxxx 456xxxx 457xxxx 458xxxx 459xxxx	Билайн	Астраханская область
906-46xxxxx 47xxxxx	Билайн	Ставропольский край
906-480xxxx 481xxxx 482xxxx	Билайн	Республика Дагестан
906-483xxxx 484xxxx 485xxxx	Билайн	Кабардино-Балкарская Республика
906-486xxxx 487xxxx 488xxxx	Билайн	Республика Ингушетия
906-489xxxx 490xxxx 491xxxx 492xxxx 493xxxx	Билайн	Ставропольский край
906-494xxxx 495xxxx	Билайн	Республика Северная Осетия
906-496xxxx 497xxxx 498xxxx 499xxxx	Билайн	Ставропольский край
906-500xxxx 501xxxx 502xxxx 503xxxx 504xxxx 505xxxx	Билайн	Брянская область
906-506xxxx 507xxxx 508xxxx 509xxxx	Билайн	Калужская область
906-510xxxx 511xxxx 512xxxx 513xxxx 514xxxx 515xxxx	Билайн	Ивановская область
906-516xxxx 517xxxx 518xxxx 519xxxx	Билайн	Смоленская область
906-520xxxx 521xxxx 522xxxx 523xxxx 524xxxx	Билайн	Костромская область
906-525xxxx 526xxxx 527xxxx 528xxxx 529xxxx	Билайн	Ярославская область
906-53xxxxx	Билайн	Тульская область
906-540xxxx 541xxxx 542xxxx 543xxxx 544xxxx 545xxxx 546xxxx 547xxxx 548xxxx	Билайн	Рязанская область
906-549xxxx 550xxxx 551xxxx 552xxxx 553xxxx 554xxxx 555xxxx	Билайн	Тверская область
906-556xxxx 557xxxx	Билайн	Нижегородская область
906-558xxxx 559xxxx 560xxxx 561xxxx 562xxxx 563xxxx 564xxxx	Билайн	Владимирская область
906-565xxxx 566xxxx 567xxxx	Билайн	Белгородская область
906-568xxxx 569xxxx 570xxxx 571xxxx	Билайн	Орловская область
906-572xxxx 573xxxx 574xxxx 575xxxx 576xxxx 577xxxx	Билайн	Курская область
906-578xxxx 579xxxx	Билайн	Нижегородская область
906-580xxxx 581xxxx 582xxxx 583xxxx 584xxxx 585xxxx 586xxxx 587xxxx 588xxxx 589xxxx 590xxxx	Билайн	Воронежская область
906-591xxxx 592xxxx 593xxxx 594xxxx 595xxxx	Билайн	Липецкая область
906-596xxxx 597xxxx 598xxxx 599xxxx	Билайн	Тамбовская область
906-600xxxx 601xxxx 602xxxx 603xxxx 604xxxx 605xxxx 606xxxx 607xxxx 608xxxx	Билайн	Белгородская область
906-609xxxx	Билайн	Костромская область
906-610xxxx 611xxxx 612xxxx 613xxxx 614xxxx 615xxxx 616xxxx	Билайн	Владимирская область
906-617xxxx 618xxxx 619xxxx	Билайн	Ивановская область
906-620xxxx 621xxxx 622xxxx 623xxxx 624xxxx 625xxxx 626xxxx 627xxxx 628xxxx 629xxxx 630xxxx	Билайн	Тульская область
906-631xxxx 632xxxx 633xxxx 634xxxx 635xxxx 636xxxx 637xxxx 638xxxx 639xxxx	Билайн	Ярославская область
906-640xxxx 641xxxx 642xxxx 643xxxx 644xxxx 645xxxx	Билайн	Калужская область
906-646xxxx 647xxxx 648xxxx 649xxxx	Билайн	Рязанская область
906-650xxxx 651xxxx 652xxxx 653xxxx 654xxxx 655xxxx 656xxxx	Билайн	Тверская область
906-657xxxx 658xxxx 659xxxx	Билайн	Тамбовская область
906-660xxxx 661xxxx 662xxxx 663xxxx 664xxxx 665xxxx	Билайн	Орловская область
906-666xxxx	Билайн	Костромская область
906-667xxxx 668xxxx 669xxxx	Билайн	Смоленская область
906-670xxxx 671xxxx 672xxxx 673xxxx 674xxxx 675xxxx 676xxxx 677xxxx 678xxxx 679xxxx 680xxxx	Билайн	Воронежская область
906-681xxxx 682xxxx 683xxxx 684xxxx 685xxxx 686xxxx 687xxxx 688xxxx	Билайн	Липецкая область
906-689xxxx 690xxxx 691xxxx 692xxxx 693xxxx 694xxxx	Билайн	Курская область
906-695xxxx 696xxxx 697xxxx 698xxxx 699xxxx	Билайн	Брянская область
906-7xxxxxx	Билайн	Москва
906-80xxxxx 810xxxx 811xxxx 812xxxx 813xxxx 814xxxx 815xxxx	Билайн	Свердловская область
906-816xxxx 817xxxx 818xxxx 819xxxx	Билайн	Республика Удмуртия
906-820xxxx 821xxxx 822xxxx 823xxxx 824xxxx 825xxxx 826xxxx 827xxxx	Билайн	Тюменская область
906-828xxxx	Билайн	Курганская область
906-829xxxx	Билайн	Кировская область
906-83xxxxx 84xxxxx	Билайн	Оренбургская область
906-850xxxx 851xxxx 852xxxx 853xxxx 854xxxx	Билайн	Челябинская область
906-855xxxx 856xxxx 857xxxx 858xxxx 859xxxx	Билайн	Свердловская область
906-86xxxxx 870xxxx 871xxxx 872xxxx	Билайн	Челябинская область
906-873xxxx 874xxxx 875xxxx	Билайн	Тюменская область
906-876xxxx 877xxxx 878xxxx	Билайн	Пермский край
906-879xxxx 880xxxx 881xxxx 882xxxx	Билайн	Республика Коми
906-883xxxx 884xxxx	Билайн	Курганская область
906-885xxxx 886xxxx	Билайн	Ямало-Ненецкий АО
906-887xxxx 888xxxx 889xxxx	Билайн	Пермский край
906-890xxxx 891xxxx 892xxxx 893xxxx 894xxxx	Билайн	Челябинская область
906-895xxxx 896xxxx	Билайн	Ханты-Мансийский АО
906-897xxxx	Билайн	Республика Удмуртия
906-898xxxx 899xxxx	Билайн	Челябинская область
906-900xxxx 901xxxx 902xxxx 903xxxx 904xxxx 905xxxx	Билайн	Красноярский край
906-906xxxx 907xxxx 908xxxx 909xxxx	Билайн	Новосибирская область
906-910xxxx 911xxxx 912xxxx 913xxxx 914xxxx 915xxxx 916xxxx 917xxxx	Билайн	Красноярский край
906-918xxxx 919xxxx	Билайн	Омская область
906-92xxxxx 930xxxx 931xxxx 932xxxx 933xxxx 934xxxx 935xxxx 936xxxx 937xxxx 938xxxx	Билайн	Кемеровская область
906-939xxxx	Билайн	Республика Алтай
906-940xxxx 941xxxx 942xxxx 943xxxx 944xxxx 945xxxx 946xxxx	Билайн	Алтайский край
906-947xxxx 948xxxx 949xxxx 950xxxx 951xxxx	Билайн	Томская область
906-952xxxx 953xxxx	Билайн	Республика Хакасия
906-954xxxx 955xxxx 956xxxx 957xxxx 958xxxx 959xxxx	Билайн	Томская область
906-96xxxxx	Билайн	Алтайский край
906-970xxxx	Билайн	Республика Алтай
906-971xxxx 972xxxx 973xxxx 974xxxx	Билайн	Красноярский край
906-975xxxx 976xxxx 977xxxx 978xxxx 979xxxx 98xxxxx	Билайн	Кемеровская область
906-990xxxx 991xxxx 992xxxx 993xxxx	Билайн	Омская область
906-994xxxx 995xxxx 996xxxx	Билайн	Новосибирская область
906-997xxxx 998xxxx 999xxxx	Билайн	Республика Тыва

8966165 (+7966165) регион и оператор связи

8 (966) 165 0x xx	ОАО «Вымпел-Коммуникации», г. Москва и Московская область

8 (966) 165 1x xx	ОАО «Вымпел-Коммуникации», г. Москва и Московская область
8 (966) 165 2x xx	ОАО «Вымпел-Коммуникации», г. Москва и Московская область
8 (966) 165 3x xx	ОАО «Вымпел-Коммуникации», г. Москва и Московская область
8 (966) 165 4x xx	ОАО «Вымпел-Коммуникации», г. Москва и Московская область
8 (966) 165 5x xx	ОАО «Вымпел-Коммуникации», г. Москва и Московская область

8 (966) 165 6x xx	ОАО «Вымпел-Коммуникации», г. Москва и Московская область
8 (966) 165 7x xx	ОАО «Вымпел-Коммуникации», г. Москва и Московская область
8 (966) 165 8x xx	ОАО «Вымпел-Коммуникации», г. Москва и Московская область
8 (966) 165 9x xx	ОАО «Вымпел-Коммуникации», г. Москва и Московская область

Азиатско-Тихоокеанский регион: экономика, политика, право

Для цитирования: Евсеенко Е. Д. Некоторые особенности реализации права законодательной инициативы в Российской Федерации и государствах Азиатско-Тихоокеанского региона // Азиатско-Тихоокеанский регион : экономика, политика, право. – 2014. – № 3-4. – С. 158-165.

Евсеенко Екатерина Дмитриевна, Дальневосточный федеральный университет, г. Владивосток, Россия, e-mail: [email protected]

НЕКОТОРЫЕ ОСОБЕННОСТИ РЕАЛИЗАЦИИ ПРАВА ЗАКОНОДАТЕЛЬНОЙ ИНИЦИАТИВЫ В РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ И ГОСУДАРСТВАХ АЗИАТСКО-ТИХООКЕАНСКОГО РЕГИОНА

Аннотация:

Настоящая статья посвящена некоторым особенностям реализации права законодательной инициативы в Российской Федерации и государствах Азиатско-Тихоокеанского региона. В статье автор указывает, что в Конституции РФ 1993 года отсутствует упоминание народной законодательной инициативы как формы непосредственной демократии. К сожалению, до настоящего времени она не получила закрепления и в иных законодательных актах федерального уровня. В этой связи, как указывает автор, остро ощущается необходимость законодательного урегулирования отношений, связанных с реализацией права законодательной инициативы. Опыт стран АТР может стать отправной точкой в развитии данного института с учетом специфики нашего государства. Говоря об особенностях реализации права законодательной инициативы, автор указывает на ее специфическую форму: консолидированную законодательную инициативу. Особенность таких законодательных инициатив состоит в том, что они носят межрегиональный характер. Консолидированная законодательная инициатива является одним из механизмов взаимодействия субъектов законодательного процесса, направленных на улучшение качества принимаемых законов. Анализ опыта федераций Азиатско-Тихоокеанского региона (Австралия, Канада, США, Индия) показывает, что консолидированная законодательная инициатива является уникальной специфической формой, получившей свое распространение только в Российской Федерации. В заключение автор отмечает необходимость учета российским законодателем положительного опыта государств Азиатско-Тихоокеанского региона по вопросам совершенствования механизма реализации законодательной инициативы, принимая во внимание при этом особенности национальной правовой системы.

Ключевые слова:

законодательная инициатива, законотворчество, законодательство стран АТР, консолидированная законодательная инициатива

Школьники Поморья достойно представили регион на всероссийском фестивале ГТО в Крыму · Новости Архангельска и Архангельской области. Сетевое издание DVINANEWS

В Крыму в международном детском центре «Артек» состоялся V Фестиваль всероссийского физкультурно-спортивного комплекса «Готов к труду и обороне» среди обучающихся образовательных организаций.

В финале фестиваля приняли участие 654 школьника из 83 регионов страны. Все ребята – обладатели золотых знаков отличия комплекса ГТО.

Спортивная программа фестиваля была очень насыщенной. За несколько недель школьники успели пройти испытания комплекса «Готов к труду и обороне», пообщаться с известными спортсменами, олимпийскими чемпионами и послами ГТО.

Сборную команду Архангельской области на всероссийском фестивале представляли восемь школьников из Котласа, Северодвинска и Коряжмы.

В общекомандном зачете наши ребята заняли 33-е место, в командном зачете по третьей ступени – 37-е место, по четвертой ступени – 27-е место.

Среди команд Северо-Запада России школьники Архангельской области заняли четвертое место.

В личном первенстве лучший результат показала Екатерина Стрекаловская из Котласа. Из 165 участников четвертой ступени она заняла 19-е место. Достойно среди девушек третьей ступени выступила котлашанка Арина Кораблёва, попав в тридцатку сильнейших участников фестиваля.

— Это лучшее выступление сборной команды Архангельской области за все годы участия в финальном этапе всероссийского фестиваля ГТО. Также в рамках фестиваля состоялся всероссийский семинар-совещание по вопросам реализации комплекса «Готов к труду и обороне» на территории России. Участие в подобных мероприятиях помогает не только получить новые знания и опыт, но и узнать, каким образом поставлена работа у наших коллег в других регионах, обменяться с ними опытом, – сказал инструктор-методист регионального центра спортивной подготовки «Водник» Сергей Владыкин.

Напомним, что организация тестирования выполнения нормативов комплекса ГТО в Архангельской области проходит в рамках регионального проекта «Спорт – норма жизни» национального проекта «Демография».

Агентство по спорту Архангельской области

РАСПП назвал самый перспективный для российского бизнеса регион Китая

https://ria.ru/20210209/region-1596660568.html

РАСПП назвал самый перспективный для российского бизнеса регион Китая

РАСПП назвал самый перспективный для российского бизнеса регион Китая — РИА Новости, 09.02.2021

РАСПП назвал самый перспективный для российского бизнеса регион Китая

Согласно результатам исследования Русско-Азиатского Союза промышленников и предпринимателей (РАСПП), наиболее перспективным для инвестиций российского бизнеса… РИА Новости, 09.02.2021

2021-02-09T13:07

россия-китай: главное

экономика

гуанчжоу

москва

гуандун

/html/head/meta[@name=’og:title’]/@content

/html/head/meta[@name=’og:description’]/@content

https://cdn22.img.ria.ru/images/111675/45/1116754588_0:165:3053:1882_1920x0_80_0_0_1a865230ca9271356da94aaa0c9b5f6c.jpg

МОСКВА, 9 фев — Проект «Россия-Китай: Главное». Согласно результатам исследования Русско-Азиатского Союза промышленников и предпринимателей (РАСПП), наиболее перспективным для инвестиций российского бизнеса регионом КНР является специальный административный район Сянган (Гонконг), сообщает информационное агентство Regnum.Рейтинг был составлен на основе анализа 39 показателей, в числе которых уровень и динамика экономического развития, интенсивность текущего уровня взаимодействия регионов с Россией, а также показатели финансовой инфраструктуры, налогообложение и общий уровень социально-экономического развития.В результате первое место занял Сянган. Следом за ним идёт провинция Гуандун и её административный центр Гуанчжоу. Замыкает тройку лидеров город центрального подчинения Шанхай. Аутсайдерами рейтинга стали Тибетский автономный район, Цзянси, Нянся-Хуэйский автономный район, Цинхай, Юннань и Хайнань.

https://ria.ru/20210202/chuntsin-1595630147.html

гуанчжоу

москва

гуандун

РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

2021

РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

Новости

ru-RU

https://ria.ru/docs/about/copyright.html

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/

РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

https://cdn24.img.ria.ru/images/111675/45/1116754588_162:0:2893:2048_1920x0_80_0_0_c2f4b31ae05621e1d679b7fba0467d39.jpg

РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

экономика, гуанчжоу, москва, гуандун

Губернаторы — июль 2021 | Медиалогия

1. СОБЯНИН Сергей Семенович	Москва	56 070	449 610,0

2. ВОРОБЬЕВ Андрей Юрьевич	Московская обл.	33 330	159 064,0+1

3. БЕГЛОВ Александр Дмитриевич	Санкт-Петербург	12 226	135 918,2-1

4. КУЙВАШЕВ Евгений Владимирович	Свердловская обл.	13 443	95 996,7+4

5. АКСЕНОВ Сергей Валерьевич	Крым	13 404	95 640,4-1

6. КОНДРАТЬЕВ Вениамин Иванович	Краснодарский край	16 597	86 486,8

7. ТЕКСЛЕР Алексей Леонидович	Челябинская обл.	9 774	74 911,1+7

8. ХАБИРОВ Радий Фаритович	Башкортостан	10 009	74 762,5-3

9. НИКИТИН Глеб Сергеевич	Нижегородская обл.	14 084	64 267,3-2

10. МИННИХАНОВ Рустам Нургалиевич	Татарстан	10 117	62 459,7+3

11. РУДЕНЯ Игорь Михайлович	Тверская обл.	14 632	59 567,4-1

12. АЗАРОВ Дмитрий Игоревич	Самарская обл.	7 693	56 020,0

13. ДЕГТЯРЕВ Михаил Владимирович	Хабаровский край	6 222	52 947,8+3

14. ВЛАДИМИРОВ Владимир Владимирович	Ставропольский край	12 534	51 249,2+1

15. НИКОЛАЕВ Айсен Сергеевич	Республика Саха	7 434	50 418,2+8

16. КОБЗЕВ Игорь Иванович	Иркутская обл.	10 574	47 096,8+2

17. ДРОЗДЕНКО Александр Юрьевич	Ленинградская обл.	5 277	45 680,2-6

18. КАДЫРОВ Рамзан Ахматович	Чечня	5 616	44 080,2-9

19. СОЛОДОВ Владимир Викторович	Камчатский край	4 877	43 571,0+34

20. КОЖЕМЯКО Олег Николаевич	Приморский край	5 357	38 408,4+11

21. КОМАРОВА Наталья Владимировна	Ханты-Мансийский АО	5 567	34 378,7+3

22. ПАРФЕНЧИКОВ Артур Олегович	Карелия	4 792	33 120,4+15

23. ОРЛОВ Василий Александрович	Амурская область	4 591	32 962,4+6

24. ГЛАДКОВ Вячеслав Владимирович	Белгородская обл.	5 801	32 674,6+18

25. ГОЛУБЕВ Василий Юрьевич	Ростовская обл.	6 849	31 896,5+15

26. ЦИВИЛЕВ Сергей Евгеньевич	Кемеровская обл.	5 581	31 021,6-4

27. ТРАВНИКОВ Андрей Александрович	Новосибирская обл.	4 472	30 796,3-6

28. ВЕДЕРНИКОВ Михаил Юрьевич	Псковская обл.	5 363	29 854,7+4

29. ШАПША Владислав Валерьевич	Калужская обл.	5 661	29 361,3+5

30. ЧИБИС Андрей Владимирович	Мурманская обл.	5 630	28 531,2-10

31. ДЮМИН Алексей Геннадьевич	Тульская обл.	8 750	28 354,4-14

32. АРТАМОНОВ Игорь Георгиевич	Липецкая обл.	7 331	27 716,4-13

33. УСС Александр Викторович	Красноярский край	5 494	26 899,4-3

34. МООР Александр Викторович	Тюменская обл.	3 212	26 609,6+1

35. МЕЛЬНИЧЕНКО Олег Владимирович	Пензенская обл.	4 878	25 400,4-2

36. ЛИМАРЕНКО Валерий Игоревич	Сахалинская обл.	3 721	25 125,2+5

37. АЛИХАНОВ Антон Андреевич	Калиниградская обл.	4 195	24 985,3-12

38. ПАСЛЕР Денис Владимирович	Оренбургская обл.	3 732	22 931,4-12

39. МЕЛИКОВ Сергей Алимович	Дагестан	6 160	21 596,0+5

40. ОСИПОВ Александр Михайлович	Забайкальский край	3 655	21 138,3+19

41. БУРКОВ Александр Леонидович	Омская обл.	3 624	20 741,3-13

42. МАХОНИН Дмитрий Николаевич	Пермский край	5 412	20 113,0-3

43. ЦЫДЕНОВ Алексей Самбуевич	Бурятия	4 110	20 100,2+14

44. УЙБА Владимир Викторович	Коми	3 665	20 098,1-8

45. БОГОМАЗ Александр Васильевич	Брянская обл.	5 834	19 798,0

46. ЛЮБИМОВ Николай Викторович	Рязанская обл.	3 871	19 008,0-19

47. ЗДУНОВ Артем Алексеевич	Мордовия	2 660	17 936,1-4

48. ТОМЕНКО Виктор Петрович	Алтайский край	4 309	17 907,4+1

49. РАДАЕВ Валерий Васильевич	Саратовская обл.	4 102	17 749,6+11

50. БОЧАРОВ Андрей Иванович	Волгоградская обл.	6 407	17 025,6-4

51. БАБУШКИН Игорь Юрьевич	Астраханская область	3 497	15 865,7+7

52. БРЕЧАЛОВ Александр Владимирович	Удмуртия	2 417	15 865,6+2

53. РАЗВОЖАЕВ Михаил Владимирович	Севастополь	3 058	15 689,0-6

54. РУССКИХ Алексей Юрьевич	Ульяновская обл.	1 903	15 572,9-2

55. КЛЫЧКОВ Андрей Евгеньевич	Орловская обл.	3 845	15 120,5+8

56. КУВШИННИКОВ Олег Александрович	Вологодская обл.	3 891	15 111,8-8

57. ВАСИЛЬЕВ Игорь Владимирович	Кировская обл.	3 544	14 980,0+14

58. СИПЯГИН Владимир Владимирович	Владимирская обл.	4 861	14 816,3-3

59. ГУСЕВ Александр Викторович	Воронежская обл.	4 192	14 527,6-3

60. СТАРОВОЙТ Роман Владимирович	Курская обл.	4 199	14 388,7+1

61. ЦЫБУЛЬСКИЙ Александр Витальевич	Архангельская обл.	5 942	14 203,7+6

62. АРТЮХОВ Дмитрий Андреевич	Ямало-Ненецкий АО	2 705	14 165,0-24

63. ОСТРОВСКИЙ Алексей Владимирович	Смоленская обл.	4 226	13 142,8+5

64. КОНОВАЛОВ Валентин Олегович	Хакасия	3 805	12 888,1+5

65. НИКИТИН Александр Валерьевич	Тамбовская обл.	2 740	12 148,3+9

66. НИКОЛАЕВ Олег Алексеевич	Чувашия	4 841	12 081,1-16

67. ЕВСТИФЕЕВ Александр Александрович	Марий Эл	2 230	11 254,6-5

68. МИРОНОВ Дмитрий Юрьевич	Ярославская обл.	1 943	10 588,4-17

69. МЕНЯЙЛО Сергей Иванович	Северная Осетия — Алания	2 595	9 740,0-3

70. ШУМКОВ Вадим Михайлович	Курганская обл.	1 490	9 662,0-5

71. ЖВАЧКИН Сергей Анатольевич	Томская обл.	1 842	9 375,0+2

72. КУМПИЛОВ Мурат Каральбиевич	Адыгея	1 962	8 676,4-2

73. НОСОВ Сергей Константинович	Магаданская обл.	1 709	8 525,4+2

74. ВОСКРЕСЕНСКИЙ Станислав Сергеевич	Ивановская обл.	2 276	7 791,0+6

75. НИКИТИН Андрей Сергеевич	Новгородская обл.	1 665	7 371,0-11

76. СИТНИКОВ Сергей Константинович	Костромская обл.	2 849	7 326,0-4

77. ТЕМРЕЗОВ Рашид Бориспиевич	Карачаево-Черкесия	1 294	6 683,5+1

78. ГОЛЬДШТЕЙН Ростислав Эрнстович	Еврейская автономная обл.	1 807	6 447,0+4

79. КОКОВ Казбек Валерьевич	Кабардино-Балкария	1 456	4 930,0-2

80. ХАСИКОВ Бату Сергеевич	Калмыкия	1 142	4 756,0+3

81. КОПИН Роман Валентинович	Чукотский АО	719	4 075,0+4

82. КАЛИМАТОВ Махмуд-Али Макшарипович	Ингушетия	835	3 580,0-6

83. ХОВАЛЫГ Владислав Товарищтайович	Тыва	430	3 123,1-4

84. ХОРОХОРДИН Олег Леонидович	Республика Алтай	693	2 228,3-3

85. БЕЗДУДНЫЙ Юрий Васильевич	Ненецкий АО	493	2 085,0-1

расшифровка карты недавно определенной критической области для синдрома Вольфа-Хиршхорна размером 165 kb | Молекулярная генетика человека

Аннотация

Синдром Вольфа-Хиршхорна (WHS) — синдром множественных пороков развития, характеризующийся психическими дефектами и дефектами развития, возникающими из-за отсутствия сегмента одного короткого плеча хромосомы 4 (4p16.3). Из-за сложной и изменчивой экспрессии этого расстройства считается, что WHS представляет собой синдром смежных генов с неопределенным количеством генов, вносящих вклад в фенотип.В попытке идентифицировать гены, которые вносят вклад в развитие человека и отсутствие которых приводит к этому синдрому, мы использовали серию знаковых космид, чтобы охарактеризовать коллекцию клеточных линий, полученных от пациентов с WHS. Флуоресценция in situ. Гибридизация с этими космидами была использована для уточнения критической области WHS (WHSCR) до 260 т.п.н. Геномная последовательность этой области доступна, и анализ этой последовательности с помощью BLAST обнаружил несколько клонов кДНК в базе данных dbEST. Всего девять независимых кДНК и их предсказанные продукты трансляции из этого анализа не показывают значительного сходства с членами баз данных ДНК или белков.Более того, эти гены были локализованы в критической области WHS и обнаруживают интересный паттерн транскрипционной организации. Ранее опубликованный отчет о пациенте с проксимальным 4p-синдромом дополнительно уточняет WHSCR до 165 т.п.н., определяемых локусами D4S166 и D4S3327 . Эта работа обеспечивает отправную точку для понимания того, как множественные гены или другие механизмы могут вносить вклад в сложный фенотип, связанный с синдромом Вольфа-Хиршхорна.

Введение

Синдром Вольфа-Хиршхорна (WHS) — синдром множественных пороков развития, характеризующийся психическими дефектами и дефектами развития, возникающими в результате частичной делеции короткого плеча одной хромосомы 4 (4p16.3). У пациентов с WHS проявляется совокупность симптомов, включая тяжелую недостаточность роста, от тяжелой до глубокой умственной отсталости с началом судорог на втором году жизни, микроцефалию, крестцовые ямочки и характерные черты лица, в том числе выраженную глабеллу, гипертелоризм («внешний вид греческого шлема»). микрогнатия, сильно изогнутые брови, загнутый вниз «карповый» рот и простые уши без лепестков. Другие аномалии могут включать различные дефекты закрытия средней линии (расщелина губы или неба, гипоспадия, крипторхизм), деформации сгибания / контрактуры рук и ног, дефекты скелета (сколиоз, кифоз), пороки сердца, гемангиомы, гипоплазия сосков и дефекты глаз (микрофтальмия). , дефекты радужной оболочки, катаракта, косоглазие (1–3).

Фенотип WHS первоначально был связан с цито-генетически наблюдаемыми изменениями кариотипа, возникающими в результате терминальной делеции одного 4p (4–5). Впоследствии для подтверждения диагноза WHS были использованы молекулярные методы, при которых стандартный анализ кариотипа не смог выявить скрытую транслокацию (6) и небольшие терминальные или интерстициальные делеции (7-8). Эти молекулярные анализы были облегчены обширными физическими картами и клонированными ресурсами, доступными для 4p16.3 (9–11). Эти ресурсы послужили основой для создания молекулярной основы для этого синдрома.

Рисунок 1.

( A ) Физическая карта 4p16. Локусы, использованные в этом и предыдущих исследованиях, показаны над линией, а зонды, использованные в этом исследовании, показаны под линией. Расстояние от D4S81 до теломер ∼4.5 Мб. Генетическое расстояние между MSX1 и D4S10 составляет 3 сМ (44). Ранее опубликованная критическая область изображена сплошными прямоугольниками, примыкающими к критической области, определенной пациентами WHS, описанными в этом исследовании, и изображена открытым прямоугольником.Заштрихованная часть открытого прямоугольника — это область, которую можно исключить при рассмотрении пациента с 4p-синдромом (20). ( B ) Космиды второго уровня, используемые в FISH-анализе, определяют контрольные точки у пациентов, определяющих критическую область. Космиды обозначены пластинкой и строкой с координатами столбца в библиотечном массиве Лос-Аламосской хромосомы 4. Непрерывные горизонтальные линии указывают степень делеции у указанного пациента, стрелки указывают, что делеция продолжается либо теломерным (CM), либо центромерным (LGL7447).

Рисунок 1.

Предыдущие исследования исключили D4S43 и D4S168 из критической области (12–13). Из-за обильных ресурсов клонирования из этой области генома было идентифицировано большое количество потенциальных кодирующих последовательностей (14-17). Кроме того, в этом регионе был локализован один охарактеризованный ген, FGFR3 . В целом, область кажется генной. Следовательно, в этом геномном сегменте присутствует несколько потенциальных кодирующих последовательностей, которые могут вносить вклад в фенотип WHS.

По мере того, как критическая область для этого синдрома уменьшается, количество пациентов, которые способствуют очищению области, значительно уменьшается. Чтобы ускорить этот процесс, мы ранее выбрали серию космид-«ориентир» для анализа клеточных линий пациентов с помощью флуоресценции in situ гибридизации (FISH), которые простираются через конечный сегмент 4,5 Mb 4p (13). Используя этот подход, мы охарактеризовали одного нового пациента и дополнительно охарактеризовали трех других пациентов.Эти анализы уточняют как проксимальную, так и дистальную границы критической области WHS (WHSCR).

Вновь определенный WHSCR находится в области, которая была секвенирована. Эта геномная последовательность была использована для идентификации потенциальных кодирующих последовательностей и для построения карты транскрипции этого синдрома смежных генов.

Результаты

Анализ пациента

Чтобы ускорить локализацию точек останова при делеции у пациентов с WHS, была использована серия космид-ориентиров для сканирования геномной области от MSX1 до субтеломерного локуса D4F26 (13; рис.1а). Были выбраны космиды, которые охватывали эту область со средним расстоянием между локусами 560 т.п.н. После этого предварительного анализа был проведен второй раунд FISH с использованием серии перекрывающихся космид, нанесенных на карту между ориентирами (11; рис. 1b). Это позволило локализовать точки останова на конкретном космиде в регионе.

В клеточной линии сигналы флуоресценции CM, соответствующие космиде, были обнаружены на обоих гомологах хромосомы 4 с использованием космид, проксимальных к 10d12, включительно (рис.1а и б). Сигналы флуоресценции, соответствующие космидам, включая 193f8 и удаленные от них, были обнаружены на одной хромосоме 4. Следовательно, CM содержит терминальную делецию, точка разрыва которой лежит в пределах 108f12 (Fig. 1b; определяется с помощью B4P19). Этот результат определяет центромерную проксимальную границу WHS и коррелирует с ранее опубликованными данными, которые помещают точку останова менее чем на 80 kb дистальнее D4S43 (12). Степень терминальной делеции у этого пациента составляет ~ 2,5 Мб. В клеточной линии HHW1839 сигналы флуоресценции, соответствующие космиде, были обнаружены на обоих гомологах хромосомы 4 с использованием космид, проксимальных к 139h8, включительно.Сигналы флуоресценции, соответствующие космидам, включая 65c1, были обнаружены на одной хромосоме 4. Следовательно, HHW1839 содержит терминальную делецию, точка разрыва которой находится между космидами 139h8 и 65c1 (обе космиды расположены между D4S183 и D4S181 ; 11) . Степень делеции у этого пациента составляет ~ 3 мб. FISH-анализ клеточной линии MS2505 показал, что космиды, удаленные от 33C6 включительно ( D4S43 ), присутствовали только на одном из гомологов.Сигналы флуоресценции, соответствующие космидам, включая 247f6 и проксимально к ним, были обнаружены на обоих гомологах хромосомы 4. Следовательно, MS2505 содержит окончательное удаление с точками останова между D4S182 и D4S43 .

Дистальная точка разрыва WHSCR была определена с использованием производной от WHS линии клеток LGL7447. Сигналы флуоресценции, соответствующие космиде, были обнаружены на обоих гомологах хромосомы 4 с использованием космид, включая 190b4 и удаленные от него (рис. 1a и b).Сигналы флуоресценции, соответствующие космиде, были обнаружены на одной хромосоме 4 с использованием космид, включая 19h2 и проксимально к ней. Это помещает дистальную точку разрыва у этого пациента ближе к концу космид 190b4 и 19h2 (Рис. 1b; определяется B4P20). Проксимальная точка разрыва в LGL7447 является центромерной по отношению к MSX1 . Следовательно, степень интерстициальной делеции у этого пациента, вероятно, будет не менее 4,5 МБ. Сравнение наименьшей области перекрытия у этих пациентов снижает WHSCR с 750 т.п.н. до ∼260 т.п.н., который находится между локусами D4S132 (определяется космидами 10d12 и 108f12) и D4S3327 (определяется космидой 190b4).

Рисунок 2.

Карта транскрипции WHSCR. Показан космидный контиг WHSCR и области, непосредственно фланкирующей. Горизонтальная линия указывает положение WHSCR. Положение и направление транскрипции кДНК, если они известны, показаны под WHSCR. Пунктирная линия представляет собой область, которую можно исключить при рассмотрении пациента с 4р-синдромом (20).

Рисунок 2.

Карта транскрипции WHSCR. Показан космидный контиг WHSCR и области, непосредственно фланкирующей.Горизонтальная линия указывает положение WHSCR. Положение и направление транскрипции кДНК, если они известны, показаны под WHSCR. Пунктирная линия представляет собой область, которую можно исключить при рассмотрении пациента с 4р-синдромом (20).

Выраженная идентификация последовательности

Недавно определенный WHSCR размером 260 kb полностью попадает в космидный контиг размером 2 Mb (11), который был секвенирован Центром Сэнгера, Великобритания. Последовательности космид в пределах WHSCR и фланкирующей области были выровнены, чтобы сформировать непрерывную последовательность области.В свете продолжающегося обсуждения требований к качеству данных последовательностей сообществом Genome, стоит отметить, что мы выявили два несоответствия в этом наборе данных. Во-первых, в последовательности контига есть задокументированные пробелы, которые делают его неполным. Во-вторых, и это, вероятно, наиболее важно для нашего анализа, пять ошибок indel (неоднозначность вставки или делеции оснований) были идентифицированы в перекрытии в 7 т.п.н., связывающем два клона (номера доступа Z67997 и Z68226). Несмотря на эти незначительные проблемы, эта последовательность предоставляет большой объем информации для анализа.Геномную последовательность этого WHSCR анализировали посредством BLAST, Fasta и GRAIL с использованием программы Sequence Comparison ANalysis (SCAN; 18). Всего с помощью dbEST было идентифицировано 42 клона кДНК. Выравнивание как 5′-, так и 3′-последовательности в сочетании с анализом положения 3′-последовательности и направления транскрипции позволило идентифицировать в общей сложности девять независимых последовательностей. Для дальнейшего анализа был выбран один клон кДНК, представляющий каждый набор последовательностей. Эти кДНК и их предсказанные продукты трансляции не обнаруживают значительного сходства с членами других баз данных ДНК или белков.Эти клоны были локализованы обратно в конкретную космиду двумя разными методами. Индивидуальные кДНК гибридизовали с расщепленными EccRI космидами в критической области. Кроме того, последовательность из dbEST анализировали относительно геномной последовательности области с помощью BLAST. Клоны из TIGR (Институт геномных исследований) секвенировали с одним праймером, и эта последовательность была локализована в геномной последовательности (таблица 1). Клоны из консорциума IMAGE были секвенированы как с 5 ‘, так и с 3’ направления (таблица 1).Таким образом было получено окончательное положение для 3 ‘и 5’ концов клонов IMAGE (таблица 1). Это позволило определить транскрипционную ориентацию этих клонов кДНК (рис. 2). Результаты двух методов сравнивались, чтобы убедиться в отсутствии расхождений. Локализация этих кДНК обратно к космидам обеспечивает карту транскриптов для WHSCR (рис. 2).

Картирование и характеристика кДНК

Клоны кДНК 53283, 267784 и 194164, картированные на космиду 96a2; клоны кДНК HHCJ43 и 153048, картированные на космиду 174g8; клон кДНК 174766, картированный на космиду 19h2; клон кДНК 44997, картированный на космиду 19h2; последовательность из клона кДНК 27812, картированная на космиды 27h9 и 19h2.Клон кДНК HFBEP10 охватывает космиды 19h2 и 190b4 (таблица 1; данные не показаны). Анализ последовательности HFBEP10 локализовал один конец внутри космиды 190b4. Однако гибридизация с клоном кДНК космид обнаружила сигнал в обеих космидах 190b4 и 19h2. Следовательно, клон охватывает эти космиды и, возможно, охватывает дистальную точку разрыва WHSCR. Все клоны кДНК картируются в WHSCR размером 165 т.п.н. (фиг. 2).

Клоны кДНК 27812, 53283 и 267784 транскрибируются от центромерного к теломерному направлению.Клоны кДНК 194164, 153048, 44997 и 174766 транскрибируются в противоположном направлении (рис. 2). Направление транскрипции клонов кДНК HFBEP10 и HHCJ43 не могло быть определено, поскольку информация о последовательности была получена только с одного конца. Помимо ориентации клонов кДНК, выравнивание последовательности кДНК с геномной последовательностью выявило структуры интрон-экзон в клонах кДНК 53283 и 267784. Информация о последовательности из клона кДНК 53283 показала, что он содержит по крайней мере четыре экзона, которые находятся над 26.Геномная область размером 2 т.п.н. Положение этих экзонов в космиде 96a2: 3048–3250 п.н., 20 270–20 442 п.н., 22 117–22 213 п.н. и 28 860–29 277 п.н. (Таблица 1). Три из четырех экзонов были обнаружены в 5′-последовательности; это 202, 173 и> 96 п.н. 3′-экзон имеет длину> 417 п.н. Информация о последовательностях клона кДНК 267784 показала, что он содержит по меньшей мере три экзона, которые простираются на область генома размером 10,6 т.п.н. Положение этих экзонов внутри космиды 96a2: 18 616–19 112 пар оснований, 19 470–19 722 пар оснований и 29 101–29 277 пар оснований (таблица 1).Два из трех экзонов обнаруживаются в 3′-последовательности; это 176 и> 252 п.н., а 5′-экзон -> 496 п.н. Клон кДНК 174766 полностью секвенирован (таблица 1). Клон кДНК 174766 имеет размер ~ 600 п.н. и не имеет интрон-экзонной структуры.

Анализ GRAIL

Анализ

GRAIL этой области предсказал всего 109 экзонов. Тридцать четыре экзона GRAIL 2 были предсказаны в проксимальной геномной области WHSCR (112 340 п.н.) и 75 экзонов GRAIL 2 в космидах, охватывающих дистальную геномную область WHSCR (180 430 п.н.).Поскольку организация эукариотических генов обычно включает несколько экзонов, мы обнаружили, что предсказания гена GRAIL наиболее надежны, когда кластеры экзонов наблюдаются вдоль сегмента последовательности геномной ДНК. Шесть кластеров предсказанных GRAIL экзонов наблюдались в дистальной области генома WHSCR (рис. 3b). Однако только один кластер наблюдался в проксимальной области генома (рис. 3а). Из всех предсказаний экзонов GRAIL только три частично перекрываются с областями гомологии EST, все в кластере B2 (F) GRAIL (рис.3б). Основываясь на предсказаниях экзонов GRAIL, дистальная область WHSCR имеет по крайней мере в три раза более высокую плотность человеческих генов, чем соседняя проксимальная геномная область.

Обсуждение

В этом исследовании мы использовали серию ранее определенных знаковых космид (13) для дальнейшего анализа четырех пациентов с WHS. Результаты этого анализа уточнили WHSCR с 750 т.п.н. (13) до области 260 т.п.н. между локусами D4S132 (определяется космидой 108f12, рис.2b) и D4S3327 (определяется космидой 190b4, рис. 2b). Это означает, что набор генов, ответственных за симптомы WHS, находится в этой сильно сокращенной области. Это важное достижение делает возможным идентификацию и анализ генов, вызывающих этот синдром.

Это дальнейшее уменьшение WHSCR (с 750 до 260 т.п.н.) исключило единственный охарактеризованный ген, FGFR3 , из области. Поэтому очень важно изолировать кодирующие последовательности из этой области и выяснить их роль как в нормальном развитии человека, так и в синдроме смежных генов.Область размером 260 т.п.н. полностью отображается внутри космидного контига размером 2 МБ, последовательность которого известна (неопубликованные данные, Центр Сэнгера, Великобритания). Несмотря на то, что некоторые незначительные несоответствия остаются нерешенными, этот набор данных предоставляет огромное количество информации. Анализ последовательности с помощью BLAST обнаружил 42 совпадения с клонами кДНК в dbEST, которые, по-видимому, сливаются в девять различных кДНК. Они и их предсказанные продукты трансляции не обнаруживают значительного сходства с членами баз данных ДНК или белков, за исключением dbEST.Следовательно, помимо частоты этих последовательностей в тканеспецифических библиотеках клонов, нет никаких указаний на биологическую функцию этих клонов. Каждый из этих клонов кДНК был локализован в конкретной космиде в WHSCR, и положение 3 ‘и 5’ последовательностей в этих космидах было определено. Эта карта транскриптов обеспечивает отправную точку для дальнейшей характеристики и выяснения роли этих клонов как в синдроме Вольфа-Хиршхорна, так и в нормальном развитии человека.

Таблица 1. Анализ

кДНК из WHSCR

Таблица 1.

Анализ кДНК из WHSCR

Рисунок 3.

Компьютер предсказал гены в критической области синдрома Вольфа-Хиршхорна. ( A ) Предсказания экзонов GRAIL 2 для космид от 108f12 до 206d7. Кластер экзонов GRAIL обозначен A1 и (R) для обратной цепи. ( B ) Предсказания экзонов GRAIL 2 для космид с 174g8 по 190b4. Предсказания экзонов и помеченные гомологии EST идентифицируют гены-кандидаты с WHSCR.Кластеры экзонов GRAIL на каждой цепи помечены B1 – B6 с (F) для прямой цепи и (R) для обратной цепи. Области идентичности EST помечены закрашенными треугольниками (t для прямого и s для обратного) или закрашенным ромбом (ориентация нити неизвестна) и типичным именем клона EST.

Рисунок 3.

Компьютер предсказал гены в критической области синдрома Вольфа-Хиршхорна. ( A ) Предсказания экзонов GRAIL 2 для космид от 108f12 до 206d7. Кластер экзонов GRAIL обозначен A1 и (R) для обратной цепи.( B ) Предсказания экзонов GRAIL 2 для космид с 174g8 по 190b4. Предсказания экзонов и помеченные гомологии EST идентифицируют гены-кандидаты с WHSCR. Кластеры экзонов GRAIL на каждой цепи помечены B1 – B6 с (F) для прямой цепи и (R) для обратной цепи. Области идентичности EST помечены закрашенными треугольниками (t для прямого и s для обратного) или закрашенным ромбом (ориентация нити неизвестна) и типичным именем клона EST.

Анализ последовательности этих клонов показал, что клон кДНК 53283 охватывает 26.Геномная область 2 т.п.н. в космиде 96a2 (как указано в таблице 1). Используя последовательность, найденную в dbEST для этого клона, можно идентифицировать интрон размером 17 т.п.н., обнаруженный в 5′-последовательности. 5′-экзон составляет 202 п.н., а оставшаяся часть 5′-последовательности попадает в два экзона (таблица 1). Клон кДНК 267784 имеет общую 3′-последовательность 175 п.н. с клоном кДНК 53283. Остальные эти последовательности расходятся друг от друга на уровне 29 101 п.о. в космиде 96a2. 3′-последовательность в клоне кДНК 53283 примыкает к геномной последовательности, а оставшаяся часть 3′-последовательности в клоне кДНК 267784 обнаружена на расстоянии 10 т.п.н. проксимальнее на 19 725 п.о. в космиде 96a2.5′-последовательность клона кДНК 267784 начинается с 18 696 пар оснований в космиде 96a2. Это отображается в интроне 17 т.п.н. клона кДНК 53283. Следовательно, весьма вероятно, что оба этих клона представляют разные гены.

Предсказания GRAIL экзонов-кандидатов дополняют экзоны-кандидаты, идентифицированные поиском сходства последовательностей. Только три из 19 областей гомологии EST частично перекрываются с предсказаниями экзона GRAIL 2. КДНК, представленные EST, секвенировали с одного или обоих концов.Внутренние области большинства этих EST еще предстоит секвенировать. Для кластера B2 (F) экзонов GRAIL (рис. 3b) следует ожидать дополнительных перекрытий между экзонами GRAIL и кДНК. Остальные кластеры экзонов GRAIL вполне могут представлять реальные гены, которые не были бы обнаружены EST или другими подобиями баз данных. Напротив, восемь клонов кДНК не тесно связаны с предсказаниями экзонов GRAIL (рис. 3b). Эти наблюдения подтверждают ценность как анализа GRAIL, так и анализа идентичности последовательностей.Кроме того, интересно отметить, что кДНК в WHSCR обнаруживают неравномерное распределение. Все идентифицированные клоны попадают в WHSCR размером 165 т.п.н. (фиг. 2b).

WHSCR можно дополнительно уменьшить, учитывая анализ пациента, у которого диагностирован проксимальный 4p– синдром (19–20). Эта клинически отчетливая аномалия вызвана интерстициальной делецией проксимального короткого плеча хромосомы 4. Цитогенетический анализ этого пациента выявил интерстициальную делецию с участием полосы 4p14–4p16.1 (20). Молекулярная характеристика клеточной линии, полученной от этого пациента, определила, что дистальная точка разрыва находится в пределах D4S166 (21). Поскольку у этого пациента нет «типичных» аномалий, связанных с WHS (20), можно исключить область от D4S132 до D4S166 из WHSCR. Следовательно, в то время как критическая область, основанная только на пациентах WHS, составляет 260 т.п.н., включение этого пациента с 4p-синдромом уменьшает критическую область до 165 т.п.н. Интересно отметить, что не было идентифицировано клонов кДНК в этой области, ограниченной D4S132 и D4S166 (рис.2). Кроме того, только один из кластеров потенциальных экзонов GRAIL отображается в область (рис. 3a).

В настоящее время три различных клинически определенных состояния связаны с потерей части короткого плеча хромосомы 4. В то время как 4p-синдром (20–22) отличается от WHS, синдром Питта-Роджерса-Дэнкса (PRD) ) отображает ряд функций, аналогичных WHS, но, как правило, менее серьезен (23). Недавно было продемонстрировано, что PRD связана с потерей материала из дистального 4p (24).Интересно, что, по-видимому, существует значительное перекрытие в геномных сегментах, отсутствующих при этих нарушениях, что делает вероятным то, что ряд одних и тех же генов вносят вклад в эти фенотипы. Попытки идентифицировать гены, связанные с синдромом смежных генов, во многом зависят от нашей способности определить минимальную критическую область для поиска. Этим усилиям часто мешает вариабельная экспрессия фенотипа. В этой статье мы сообщаем о молекулярной характеристике одного пациента с относительно небольшой терминальной делецией, который имеет характерные черты WHS.Кроме того, мы расширили молекулярный анализ трех пациентов, у которых ранее было установлено, что у них есть WHS. У всех этих пациентов имеется частично удаленная хромосома 4, характерно дисморфическое лицо и некоторая задержка в развитии. У этих пациентов небольшая область генома перекрывается с ранее описанным 4p-синдромом.

Недавняя попытка создать фенотипическую карту 4p16 на основе характеристики пациентов с делециями 4p (25), безусловно, поможет нашему поиску функции генов, идентифицированных в этом исследовании.Хотя характеристика наших пациентов не полностью согласуется с наблюдениями Эстабрукса (например, пациент, представленный клеточной линией MS2505, имеет гипоспадию, но не удален для сегмента от D4S10 до D4S127 ), возникает соблазн связать клоны кДНК с фенотипическими компонентами этого заболевания. В этом отношении интересным кандидатом на врожденный порок сердца, ассоциированный с WHS, является клон 44997 кДНК. Этот клон идентифицировал шесть независимых клонов в базе данных dbEST, которые могут представлять собой единое сообщение, созданное из библиотеки кДНК, специфичной для аорты.Аналогичные фенотипические ассоциации могут быть сделаны для ряда других кДНК, но более целесообразным будет поиск гистологического распределения РНК, соответствующей этим кДНК, в тканях человека и мыши в качестве начала для понимания их биологической функции.

Как гены, идентифицированные в этом исследовании, вносят вклад в фенотип WHS и его вариабельность, еще предстоит определить. Фенотип и плейотропия, связанные с этим синдромом, могут быть результатом снижения дозы гена, выявления вредоносных аллелей, аллельной вариации в оставшейся копии гена или комбинации этих механизмов.Кроме того, может быть задействован единственный ген, который служит «главным» регулятором и влияет на экспрессию ряда других генов как в 4p, так и / или в других местах генома. Также возможно, что делеция определенного сегмента генома или изменение положения теломеры изменяет локальную структуру хромосомы таким образом, что влияет на экспрессию генов в непосредственной близости от хромосомной аберрации. Исследования по решению этих проблем продолжаются.

Таким образом, в этой статье представлены данные, указывающие на то, что WHSCR содержится в геномном сегменте размером 165 т.п.н.Всего девять независимых клонов кДНК были идентифицированы из 42 совпадений, полученных во время анализа последовательности WHSCR. Кроме того, с помощью анализа геномных последовательностей GRAIL было предсказано несколько других потенциальных кодирующих последовательностей. Все эти кодирующие последовательности являются кандидатами на аномалии, связанные с WHS, потому что они попадают в WHSCR и удалены у всех пациентов с этим синдромом, которые до сих пор изучены. Эта карта транскрипции обеспечивает отправную точку для анализа биологических функций, которые вносят вклад в фенотип WHS.

Материалы и методы

Клеточные линии

Клеточная линия

CM была получена от пациента WHS, подробно описанного ранее (12). У нее была микроцефалия, широкий лоб с выступающей глабелью, широкий нос с выступающей переносицей и короткий желобок. Развитие было отложено, и через 1 год у нее развились судорожные припадки. Предыдущий анализ показал, что у нее была терминальная делеция 4p16.3 с точкой останова между D4S43 и D4S166 .

Клеточная линия HHW1839 была получена от ранее описанного пациента WHS (26). Он был описан как имеющий «вид греческого шлема» с гипертелоризмом, наклонным вниз к глазным щелям, микрогнатией и высоким сводчатым нёбом. Развитие было отложено, и через 18 месяцев он был госпитализирован для снятия приступов.

Клеточная линия LGL7447 была получена от ранее описанного пациента WHS (27). У нее было треугольное лицо, широкий и выступающий лоб, гипертелоризм, антимонголоидный раскос глаз, высокая переносица с широким носом и короткий желобок.У нее была задержка роста и умеренная задержка развития. Исследования прометафазы показали делецию между 4p15.32 и 4p16.3. FISH-анализ показал, что у этого пациента локусы D4F26 и D4S96 были интактными.

Клеточная линия MS2505 была получена от 3-летнего мужчины с WHS. У него был низкий рост, микроцефалия, легкая форма «греческого шлема», приступы, начинавшиеся в возрасте 1 года, гипоспадия и общая задержка.

ДНК-зонды

Серия ранее выбранных знаковых космидов из 4p16.3 были использованы для FISH (13). Космиды L228a7 ( D4S81 ), L21f12 ( D4S180 ), L247f6 ( D4S182 ) и 33c6 ( D4S43 ), охватывающие опубликованный контиг, были получены из исходной библиотеки с сортировкой по потоку, распределенной по хромосоме 4 (11,28). Кроме того, были получены пять других космид, которые обеспечивают ориентиры для остатка 4pter: pC385.12 (содержащий ген FGFR3 ; 13), pC678 ( D4S96 ; 2), CD2 ( D4S90 ; 21) и pC847. .351 ( D4F26 ; 29).Космида, содержащая ген MSX1 , pWEHx712, была наиболее проксимальным использованным маркером (30). После анализа FISH с космидами-ориентирами был проведен дополнительный раунд анализа с использованием серии перекрывающихся картирований клонов между космидами-ориентирами (11).

Когда были доступны STS для определенного локуса, космидные ДНК были проверены с помощью ПЦР-амплификации (31).

Флуоресцентный

in situ гибридизация (FISH)

FISH выполняли, как описано (32).Биотинилированную клоновую ДНК (0,2 мкг) смешивали с ДНК фракции Cot-1 человека для подавления повторяющихся последовательностей или блокирования неспецифической гибридизации. Гибридизацию выявляли с использованием последовательных циклов флуоресцеина (FITC) авидина D и биотинилированного козьего антиавидина D (Vector Laboratories, Burlingame, CA).

Анализ последовательности WHSCR

Космиды из 2-мегабайтного контига 4p16.3 (11) секвенированы Центром Сэнгера, Великобритания. WHSCR теперь полностью попадает в эту секвенированную область.Последовательности космид сравнивали с базами данных GenBank (33), GenPept, PIR (34), SWISS-PROT (35), dbEST (база данных для «экспрессируемых тегов последовательностей») (36) и REPEAT с BLAST (37–38) и Fasta (39) на локальных серверах анализа последовательностей. Эти результаты поиска были интегрированы вместе с программой LANL Sequence Comparison ANalysis (SCAN) (18). Программа SCAN свела результаты анализа BLAST к сводному отчету. Сходство последовательностей с повторяющимися последовательностями было указано по наилучшей идентичности для запрашиваемой последовательности.Чтобы улучшить обнаружение кодирующих и повторяющихся последовательностей, SCAN проанализировал доступную аннотацию для последовательностей GenBank и SWISS-PROT. Результаты сканирования были проанализированы на основе сводного текстового отчета и сводного отчета в формате WWW HTML.

GRAIL анализ WHSCR

WHSCR анализировали с помощью XGRAIL (40) версии 1.3c для выявления потенциальных экзонов. Последовательности выравнивали с помощью программы GCG LineUp (41). Два разрыва в последовательности внутри космиды 174g8 были представлены предсказанными размерами разрыва в выравнивании.Эти промежутки были преобразованы в области поли (C) с помощью XGRAIL, чтобы исключить предсказания экзонов внутри промежутков.

Анализ кДНК

кДНК, идентифицированных с помощью SCAN, были получены либо из IMAGE (42), либо из TIGR (43). Клоны выращивали в селективных условиях, и ДНК экстрагировали с использованием набора для подготовки миди Qiagen. Размер клонов кДНК определяли путем двойного переваривания клона для выделения вставки. Клоны были локализованы путем мечения линеаризованных кДНК с использованием ECL (Amersham) и гибридизации с расщеплением Eco RI этих космид из WHSCR.

кДНК из IMAGE секвенировали как с 3 ‘, так и с 5’ концов клона. кДНК из TIGR были секвенированы с одного конца. Последовательность этих клонов была локализована в WHSCR с помощью BLAST (37–38).

Благодарности

Финансирование этого проекта было предоставлено Министерством энергетики США по контракту № W-7405-ENG-36 (DR, MRA), Фондом научных исследований и разработок Национальной лаборатории Лос-Аламоса (TW, KD, SA, MRA) и грант от The Lehman Brothers Foundation (KH).Мы благодарим доктора Нормана Доггетта за его ценные комментарии во время подготовки рукописи. Мы хотим поблагодарить доктора Джона Дж. Васмута за его поддержку, критические комментарии и энтузиазм на начальных этапах этого проекта. Авторы благодарны Ирине Гершин, Лизе Гибсон и Нэнси Оуэнс за выдающуюся техническую помощь.

Список литературы

Лурье

И. З.

Лазюк

Г. И.

Усова

Ю.И.

Пресман

Е. Б.

Гуревич

Д. Б.

Синдром Вольфа-Хиршхорна

Clin. Genet

1980

, т.

(стр.

375

—

384

) 2

Smith

Skarecky

Bengtsson

Magenis

Carpenter

Wasmuth

Выделение ДНК-маркеров в направлении гена болезни Гентингтона из локуса G8

Am. J. Hum. Genet.

1988

, т.

(стр.

335

—

344

) 3

Wilson

Towner

Гроб

Ebbin

Siris

Brager

Генетические и клинические исследования у 13 пациентов с синдромом Вольфа-Хиршхорна [del (4p)]

Hum.Genet.

1981

, т.

(стр.

297

—

307

) 4

Hirschhorn

Cooper

H. L.

Firschein

I. L.

Делеция коротких плеч хромосомы 4–5 у ребенка с дефектами слияния средней линии

Humangenetik

1965

, vol.

(стр.

479

—

482

) 5

Wolf

Reinwein

Porsch

Schroter

Baitsch

Defizienz an den kurzen Armen eines Chromosoms nr. 4

Humangenetik

1965

, т.

(стр.

397

—

413

) 6

Altherr

M. R.

Bengtssson

Elder

F. F. B.

Ledbetter

D. Was H. 900muth

04 D. Was H. 900muth,

D. Was H.J.

McDonald

M. E.

Gusella

J. F.

Greenberg

Молекулярное подтверждение синдрома Вольфа-Хиршхорна с тонкой транслокацией хромосомы 4

Am. J. Hum. Genet.

1991

, т.

(стр.

1235

—

1242

) 7

Johnson

W. P.

Altherr

M. R.

Blake

J. M.

Keppen

L.Д.

FISH-обнаружение синдрома Вольфа-Хиршхорна: исключение D4F26 как критического участка

Am. J. Med. Genet.

1994

, т.

(стр.

—

) 8

Рулстон

Altherr

Wasmuth

Christian

Graham

Schreck

Подтверждение предполагаемой делеции 4p16 флуоресцентной гибридизацией in situ (FISH) с космидным зондом

Am.J. Hum. Genet.

1991

, т.

стр.

274

Zuo

Robbins

Baharloo

Cox

D. R.

Myers

R. M.

Конструирование космидных контигов и рестрикционное картирование с высоким разрешением области болезни Хантингтона на хромосоме 4

Hum. Мол. Genet.

1993

, т.

(стр.

889

—

899

) 10

Бейтс

G.P.

MacDonald

Baxendale

Youngman

Lin

Whaley

Wasmuth

004 JJ

Wasmuth

004 JJ

Gusella

Lehrach

Определенные физические пределы области кандидата гена болезни Хантингтона

Am. J. Hum. Genet.

1991

, т.

(стр.

—

) 11

Baxendale

MacDonald

Mott

Francis

Lin

Kirby

James

Zehetner

Hummerich

Valdes

Collins

Deaven

L.J.

Gusella

J. F.

Lehrach

Bates

G. P.

Космидный контиг и рестрикционная карта с высоким разрешением области 2 мегабазы, содержащей ген болезни Хантингтона

Nature Genet.

1993

, т.

(стр.

181

—

186

) 12

Гандельман

К.-Ю.

Gibson

Meyn

M. S.

Yang-Feng

T.Л.

Молекулярное определение наименьшего участка перекрытия делеций при синдроме Вольфа-Хиршхорна

Am. J. Hum. Genet.

1992

, т.

(стр.

571

—

578

) 13

Altherr

Wright

Denison

Perez-Castro

Johnson

Ограничение критической области синдрома Вольфа-Хиршхорна до 750 пар оснований.

Am. J. Med. Genet

1997

Gilliam

Bucan

MacDonald

Zimmer

Haines

Cheng

Pohl

Meyers

Whaley

Allitto

Farynlarz

Wasmuth

J. J.

Frischauf

A.-M.

Conneally

P. M.

Lehrach

Gusella

J. F.

Сегмент ДНК, кодирующий два гена, очень тесно связанных с болезнью Хантингтона

Science

1987

, vol.

238

(стр.

950

—

952

) 15

Джон

Р. М.

Роббинс

К. А.

Майерс

Р.М.

Идентификация генов внутри CpG-обогащенной ДНК из хромосомы 4p16.3 человека

Hum. Мол. Genet.

1994

, т.

(стр.

1611

—

1616

) 16

Rommens

Lin

Hutchinson

Andrew

Goldberg

YP ,

Glaves

Graham

Lai

McArthur

Nasir

Theilman

McDonald

Kalchman

Clarke

Schappert

Hayden

Карта транскрипции области, содержащей ген болезни Хантингтона

Hum. Мол. Genet.

1993

, т.

(стр.

910

–

907

) 17

Snell

Doucette-Stamm

Gillespie

Taylor

14 SAM Liba

Bates

Altherr

MacDonald

Gusella

Wasmuth

Lehrach

Dousman

D. E.

Harper

P. S.

Shaw

D. J.

Выделение кДНК в области болезни Хантингтона путем гибридизации искусственных хромосом дрожжей с библиотекой кДНК

Hum. Мол. Genet.

1993

, т.

(стр.

305

—

309

) 18

Ricke

D. O.

Mundt

M.O.

Букингем

Дж.M.

Deaven

L. L.

Moyzis

R. K.

Отбор образцов последовательности всего генома и анализ генов и аннотация мегабаз низко избыточной хромосомы человека 16p13 SAmple Сравнительный анализ секвенирования (SCAN)

Microb. Сравните. Геномика

1996

, т.

стр.

264

Magenis

R. E.

Gusella

Weliky

Olson

Haight

Toth-Fejel

S. E.

Sheehy

Полиморфизм длины рестрикционного фрагмента, связанный с болезнью Хантингтона, локализованный внутри полосы p16.1 хромосомы 4 посредством in situ гибридизации

Am. J. Hum. Genet.

1986

, т.

(стр.

383

—

391

) 20

Белый

D. M.

Pillers

D.-A. M.

Reiss

J.A.

Коричневый

M. G.

Magenis

R. E.

Интерстициальные делеции короткого плеча хромосомы 4 у пациентов с аналогичным сочетанием множественных незначительных аномалий и умственной отсталости

Am. J. Med. Genet.

1995

, т.

(стр.

588

—

597

) 21

Whaley

W. L.

Bates

G. P.

Novelletto

Sedlacek

Cheng

Romano

Ormondroyd

Allitto

Lin

Youngman

Baxendale

Bucan

Altherr

Wasmuth

Wexler

Frontali

,14 Frischauf

А.-M.

Lehrach

MacDonald

M. E.

Gusella

J. F.

Картирование космидных клонов в области болезни Хантингтона на хромосоме 4

сом. Cell Mol. Genet.

1991

, т.

(стр.

—

) 22

Francke

Arias

D. E.

Nyhan

W. L.

Проксимальная 4p-делеция: фенотип отличается от классического 4p-синдрома

J.Педиат.

1977

, т.

(стр.

250

—

252

) 23

Питт

Д.

Роджерс

Дж. Г.

Дэнкс

Умственная отсталость, необычное лицо и задержка внутриутробного развития

Am. J. Med. Genet.

1984

, т.

(стр.

307

—

313

) 24

Clemens

M.E.

Surt

Микроделеция 4p у ребенка с синдромом Питта-Роджерса-Дэнкса

Am. J. Hum. Genet.

1995

, т.

стр.

A85

Estabrooks

Rao

кВт

Driscoll

Crandall

Dean

JCS

Ikonen

Б.

Эйлсворт

А.С.

Предварительная фенотипическая карта хромосомы 4p16 на основе делеций 4p

Am. J. Med. Genet.

1995

, т.

(стр.

581

—

586

) 26

Zackai

McDonald-McGinn

Spinner

Altherr

Bengt U.

Wasmuth

Классический синдром Вольфа-Хиршхорна подтвержден молекулярно, несмотря на нормальные результаты с использованием коммерчески доступных зондов: новое определение критической области

Am.J. Hum. Genet.

1994

, т.

стр.

A11

Somer

Peippo

Keinanen

Спорные результаты у двух пациентов с коммерчески доступным датчиком D4S96 для синдрома Вольфа-Хиршхорна

Am. J. Hum. Genet.

1995

, т.

стр.

A127

Riess

Siedlaczck

Kredtke

Melmer

Epplen

J. T.

Deaven

L. L.

Характеристика библиотеки космид с сортировкой по хромосоме 4 человека

Cytogenet. Cell Genet.

1994

, т.

(стр.

238

—

242

) 29

Altherr

M. R.

Smith

MacDonald

M. E.

Hall

Васмут

Дж. Дж.

Выделение новой слегка повторяющейся последовательности ДНК, которая преимущественно расположена на конце короткого плеча хромосомы 4 рядом с геном болезни Хантингтона.

Genomics

1989

, vol.

(стр.

581

—

588

) 30

Hewitt

J. E.

Clark

L. N.

Ivens

Williamson

Структура и последовательность гена гомеобокса человека HOX-7

Genomics

1991

, vol.

(стр.

670

—

678

) 31

Gusella

Altherr

McClatchey

Doucette-Stamm

Plummer

Groot

Barnes

Hummerich

Collins

Housman

Lehrach

MacDonald

Bates

,14 Wasm

Сайты, меченные последовательностями (STS), охватывающие 4p16.3 и область-кандидат болезни Хантингтона

Genomics

1992

, vol.

(стр.

—

) 32

Lichter

Чанг

C.-J.

Звоните

Hermanson

Evans

G. A.

Housman

Ward

D. C.

Картирование с высоким разрешением хромосомы человека 11 с помощью in situ гибридизация с космидными клонами

Science

1990

, vol.

247

(стр.

—

) 33

Бенсон

D.A.

Boguski

Lipman

D. J.

Ostell

GenBank

Nucleic Acids Res

1996

, т.

(стр.

—

) 34

Джордж

Баркер

Mewes

Pfeiffer

Цугита

Международная база данных белковых последовательностей PIR

Nucleic Acids Res.

1996

, т.

(стр.

—

) 35

Байрох

Apweiler

Банк данных о последовательности белков SWISS-PROT и его новая добавка TREMBL

Nucleic Acids Res.

1996

, т.

(стр.

—

) 36

Богуски

М. С.

Лоу

Т. М.

Толстошев

К. М.

dbEST — база данных «тегов выраженной последовательности» [буква]

Nature Genet.

1993

, т.

(стр.

332

—

) 37

Altschul

Gish

Miller

Myers

Lipman

Базовый инструмент локального поиска совмещения

J. Mol. Биол.

1990

, т.

215

(стр.

403

—

410

) 38

Gish

States

D. J.

Идентификация кодирующих областей белков с помощью поиска сходства в базе данных

Nature Genet.

1993

, т.

(стр.

266

—

272

) 39

Lipman

D. J.

Pearson

W. R.

Быстрый и точный поиск сходства белков

Science

1985

, vol.

227

(стр.

1435

—

1441

) 40

Uberbacher

E.C.

Mural

R.J.

Обнаружение кодирующих белок участков в последовательностях ДНК человека с помощью подхода с множеством сенсорно-нейронных сетей

Proc. Natl. Акад. Sci. США

1991

, т.

(стр.

11261

—

11265

) 41

Devereux

Haeberli

Smithies

Полный набор программ анализа последовательностей для VAX

Nucleic Acids Res.

1984

, т.

(стр.

387

—

395

) 42

Auffray

Behar

Bois

Bouchier

Dasilva

Devignes

Duprat

Houlgatte

Jumeau

Lamy

Lorenzo

Mitchell

Mariagesamson

Pietu

Pouliot

Sebastianikabaktchis

Tessier

IMAGE: Комплексный молекулярный анализ генома человека и его экспрессии

C.R. Acad. Sci. III

1995

, т.

318

(стр.

263

—

272

) 43

Адамс

Дубник

М.

Kerlavage

Морено

Р.

Келли

Utterback

Nagle

Fields

Venter

Идентификация последовательностей 2375 генов головного мозга человека

Nature

1992

, т.

355

(стр.

632

—

634

) 44

Миллс

Buetow

Ritty

, 14 Mathews ,

Bodrug

Wijmenga

Balazs

Murray

Генетическое и физическое картирование хромосомы 4 сужает локализацию гена фасциоскапуломеральной мышечной дистрофии (FSHD)

Am.J. Hum. Genet.

1992

, т.

(стр.

432

—

439

)

(PDF) Карта стенограммы недавно определенной критической области для синдрома Вольфа-Хиршхорна размером 165 kb

323

Nucleic Acids Research, 1994, Vol. 22, No. 1

Human Molecular Genetics, 1997, Vol. 6, No. 2 323

Программа GCG LineUp (41). Два разрыва в последовательности в космиде

174g8 были представлены предсказанными размерами разрыва в выравнивании

.Эти промежутки были преобразованы в области поли (C) с помощью

XGRAIL, чтобы исключить предсказания экзонов в промежутках.

кДНК анализ

кДНК, идентифицированных с помощью SCAN, были получены либо из

IMAGE (42), либо из TIGR (43). Клоны выращивали в селективных условиях

, и ДНК экстрагировали с использованием набора Qiagen midi prepare

. Размер клонов кДНК определяли путем двойного переваривания клона до

, чтобы выделить вставку. Клоны были локализованы путем мечения линеаризованных кДНК

с использованием ECL (Amersham) и гибридизации с расщеплением EcoRI

этих космид из WHSCR.КДНК

из IMAGE секвенировали как с 3 ‘,

, так и с 5′-концов клона. кДНК из TIGR были секвенированы

с одного конца. Последовательность этих клонов была локализована в пределах

WHSCR с помощью BLAST (37–38).

БЛАГОДАРНОСТИ

Финансирование этого проекта было предоставлено Министерством энергетики США

по контракту № W-7405-ENG-36 (DR, MRA), Лос

Аламосская национальная лаборатория направила исследования и разработки —

. Fund (TW, KD, SA, MRA) и грант от Lehman

Brothers Foundation (KH).Мы благодарим доктора Нормана Доггетта за его ценные комментарии

во время подготовки рукописи. Мы,

, хотим поблагодарить доктора Джона Дж. Васмута за его поддержку, критические комментарии

и энтузиазм на начальных этапах этого проекта.

Авторы благодарны Ирине Гершин, Лизе Гибсон и Нэнси

Оуэнс за выдающуюся техническую помощь.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Лурье, И.В., Лазюк, Г.И., Усова, Ю.И., Пресман, Э.и Гуревич Д. Б.

(1980) Синдром Вольфа – Хиршхорна. Clin. Genet., 17, 375–384.

2. Smith, B., Skarecky, D., Bengtsson, U., Magenis, RE, Carpenter, N. и

Wasmuth, JJ (1988) Выделение ДНК-маркеров в направлении гена болезни Гентингтона

из локуса G8. Являюсь. J. Hum. Genet., 42,

335–344.

3. Wilson, MG, Towner, JW, Coffin, GS, Ebbin, AJ, Siris, E. and Brager,

P. (1981) Генетические и клинические исследования у 13 пациентов с синдромом Вольфа – Хиршхорна

[ del (4p)].Гм. Genet., 59, 297–307.

4. Хиршхорн, К., Купер, Х. Л. и Фиршейн, И. Л. (1965) Делеция коротких

плеч хромосомы 4–5 у ребенка с дефектами слияния средней линии.

Humangenetik, 1, 479–482.

5. Вольф, У., Рейнвейн, Х., Порш, Р., Шротер, Р. и Байтч, Х. (1965)

Defizienz an den kurzen Armen eines Chromosoms nr. 4. Humangenetik, 1,

397–413.

6. Altherr, M. R., Bengtssson, U., Elder, F. F. B., Ledbetter, D.H., Wasmuth, J. J.,

McDonald, M. E., Gusella, J. F. и Greenberg, F. (1991) Молекулярное

подтверждение синдрома Вольфа – Хиршхорна с тонкой транслокацией хромосомы

4. Am. J. Hum. Genet., 49, 1235–1242.

7. Джонсон, У. П., Алтерр, М. Р., Блейк, Дж. М. и Кеппен, Л. Д. (1994) FISH

Выявление синдрома Вольфа – Хиршхорна: исключение D4F26 как критического участка.

Am. J. Med. Genet., 52, 70–74.

8. Рулстон, Д., Алтерр, М., Wasmuth, J. J., Christian, C., Graham, J. и

Schreck, R. R. (1991) Подтверждение предполагаемой делеции 4p16 с помощью

флуоресцентной гибридизации in situ (FISH) с космидным зондом. Являюсь. J. Hum.

Genet., 49, 274.

9. Zuo, J., Robbins, C., Baharloo, S., Cox, DR and Myers, RM (1993)

Построение космидных контигов и рестрикционное картирование с высоким разрешением из

область болезни Хантингтона хромосомы 4. Hum. Мол. Genet., 2,

889–899.

10. Бейтс, Г.П., Макдональд, Мэн, Баксендейл, С., Янгман, С., Лин, К.,

Уэйли, У.Л., Васмут, Дж. Дж., Гуселла, Дж. Ф. и Лехрах, Х. (1991) Определение

физических пределов области-кандидата гена болезни Хантингтона. Являюсь. J. Hum.

Genet., 49, 7–16.

11. Baxendale, S., MacDonald, ME, Mott, R., Francis, F., Lin, C., Kirby, SF,

, James, M., Zehetner, G., Hummerich, H., Valdes , J., Collins, FS, Deaven, L.

J., Gusella, J. F., Lehrach, H. и Bates, G. P. (1993) Космидный контиг и рестрикционная карта с высоким разрешением

области 2 мегабаз, содержащей ген болезни Гентингтона

. Nature Genet., 4, 181–186.

12. Гандельман, К.-Й., Гибсон, Л., Мейн, М. С. и Янг-Фенг, Т. Л. (1992)

Молекулярное определение наименьшей области перекрытия делеций в синдроме Вольфа – Хиршхорна

. Являюсь. J. Hum. Genet., 51, 571–578.

13. Алтерр, М. Р., Райт, Т.Дж., Денисон, К., Перес-Кастро, А. В. и Джонсон, В.

P. (1997) Ограничение критической области синдрома Вольфа – Хиршхорна до 750

пар килобаз. Являюсь. J. Med. Genet., В печати.

14. Гиллиам, Т.С., Букан, М., Макдональд, М.Э., Циммер, М., Хейнс, Д.Л.,

Ченг, С.В., Пол, Т.М., Мейерс, Р.Х., Уэйли, В.Л., Аллитто, Б.А.,

Farynlarz, A., Wasmuth, JJ, Frischauf, A.-M., Conneally, PM, Lehrach, H.

и Gusella, JF (1987) Сегмент ДНК, кодирующий два гена, очень тесно связанных с болезнью Хантингтона

.Science, 238, 950–952.

15. Джон Р. М., Роббинс К. А. и Майерс Р. М. (1994) Идентификация генов

внутри CpG-обогащенной ДНК из хромосомы 4p16.3 человека. Гм. Мол.

Genet., 3, 1611–1616.

16. Ромменс, Дж. М., Лин, Б., Хатчинсон, Дж. Б., Эндрю, С. Е., Голдберг, Ю. П.,

Глэйвс, М. Л., Грэм, Р., Лай, В., МакАртур, Дж., Насир, Дж. , Theilman, J.,

McDonald, H., Kalchman, M., Clarke, LA, Schappert, K. and Hayden, M.,

R.(1993) Карта транскрипции области, содержащей ген болезни Хантингтона

. Гм. Мол. Genet., 2, 910–907.

17. Snell, RG, Doucette-Stamm, KA, Gillespie, KM, Taylor, SAM, Riba,

L., Bates, GP, Altherr, MR, MacDonald, ME, Gusella, JF, Wasmuth, J.

J., Lehrach, H., Dousman, DE, Harper, PS и Shaw, DJ (1993) Выделение

кДНК в области болезни Хантингтона путем гибридизации

искусственных хромосом дрожжей с библиотекой кДНК.Гм. Мол. Genet., 2,

305–309.

18. Ricke, DO, Mundt, MO, Buckingham, JM, Deaven, LL и Moyzis, R.

K. (1996) Выборка последовательности всего генома и анализ генов и аннотация

мегабаз хромосомы 16p13 человека с низкой избыточностью

Сравнительный анализ секвенирования SAmple (SCAN). Microb. Сравните.

Genomics, 1, 264.

19. Магенис, Р. Э., Гуселла, Дж., Велики, К., Олсон, С., Хейт, Г., Тот-Фейел, С. Е.

и Шихи, Р.(1986) Связанный с болезнью Хантингтона рестрикционный фрагмент длиной

, полиморфизм локализован в полосе p16.1 хромосомы 4 путем гибридизации in situ

. Являюсь. J. Hum. Genet., 39, 383–391.

20. Уайт Д. М., Пиллерс Д.-А. М., Рейсс, Дж. А., Браун, М. Г. и Магенис, Р. Е.

(1995) Интерстициальные делеции короткого плеча хромосомы 4 у пациентов с

, аналогичным сочетанием множественных незначительных аномалий и умственной отсталости.

Am. J. Med.Genet., 57, 588–597.

21. Whaley, WL, Bates, GP, Novelletto, A., Sedlacek, Z., Cheng, S., Romano,

D., Ormondroyd, E., Allitto, B., Lin, C., Youngman , S., Baxendale, S., Bucan,

M., Altherr, M., Wasmuth, J., Wexler, NS, Frontali, M., Frischauf, A.-M.,

Lehrach, H., MacDonald, ME и Gusella, JF (1991) Картирование клонов космиды

в области болезни Хантингтона на хромосоме 4. Сом. Cell Mol.

Genet., 17, 83–91.

22.Francke, U., Arias, D. E. и Nyhan, W. L. (1977) Проксимальная делеция 4p:

Фенотип отличается от классического 4p-синдрома. J. Pediat., 90, 250–252.

23. Питт Д., Роджерс Дж. Г. и Дэнкс (1984) Умственная отсталость, необычное лицо и

задержка внутриутробного развития. Являюсь. J. Med. Genet., 19, 307–313.

24. Клеменс М., У., М. Э. и Сурт, У. (1995) 4p микроделеция у ребенка с синдромом Питта – Роджерса – Дэнкса

. Являюсь. J. Hum. Genet., 57, А85.

25.Estabrooks, LL, Rao, KW, Driscoll, DA, Crandall, BF, Dean, JCS,

Ikonen, E., Korf, B. и Aylsworth, AS (1995) Предварительная фенотипическая карта

хромосомы 4p16 на основе делеций 4p . Являюсь. J. Med. Genet., 57, 581–586.

26. Zackai, EH, McDonald-McGinn, DM, Spinner, N., Altherr, MR,

Bengtsson, U. и Wasmuth, JJ (1994) Классический синдром Вольфа – Хиршхорна

подтвержден молекулярно, несмотря на нормальные результаты при коммерческом использовании

доступных зонда: новое определение критической области.Являюсь. J. Hum. Genet., 55, А11.

27. Somer, M., Peippo, M. и Keinanen, M. (1995) Противоречивые результаты исследования

двух пациентов с коммерчески доступным датчиком D4S96 для синдрома Рога Вольфа – Хирша-

. Являюсь. J. Hum. Genet., 57, А127.

28. Рисс, О., Зидлачк, И., Кредтке, С., Мелмер, Г., Эпплен, Дж. Т. и Дивен, Л.

L. (1994) Характеристика космиды

с сортировкой по хромосоме 4 человека Библиотека

. Cytogenet. Cell Genet., 65, 238–242.

Беррихилл крупно выигрывает в региональном финале

Столкнувшись с хозяином Моргантауна, Западная Вирджиния, в игре чемпионата региона Великих озер в воскресенье, Беррихилл быстро вырвался вперед в шесть раундов, а затем постепенно оторвался на 10 очков. -1 победа, чтобы пробить свой билет на девятую путевку в Мировую серию и первую с момента выхода на национальный турнир подряд в 2017 и 2018 годах.

Пост 165 (30-3) начнет игру Мировой серии в Шелби, Северная Каролина, в четверг в 16:00.м. против чемпиона Северо-Западного региона.

«Это фантастика. Тренеры были там (на Мировой серии) раньше, но только один из наших игроков (Дерек Беугер) был в команде, которая уехала в 2018», — сказал менеджер Berryhill Дэн Кронкрайт. «У нас много новых парней и много новых семей, которые будут брать отпуск, чтобы добраться туда. Это будет особенный опыт, действительно будет.

«Это то, над чем они работали все лето.Летом они становились все лучше и лучше, и они этого заслуживают », — добавил он.

В воскресенье, в игре, которая была отложена более чем на четыре часа из-за дождя в первом иннинге, Беррихилл вырвался вперед со счетом 3: 0 и стал лидером первого тайма. После того, как Логан Маккой и Эвайн Ривера сыграли вничью, Эл Уорнер удвоился и вышел на левый фланг, а за ним Маккой, а Трент Джонсон последовал за ним, сделав двойной дубль в центр поля.

Подача позже, Брейлен Лаверти был поражен подачей, Нолан Сандерс достиг сингла с головкой, а Эл Мани поехал в Лаверти с синглом RBI для лидерства 4-0.Затем Маккой удвоился до левого поля, вернув домой еще двух бегунов и сделав счет 6: 0.

Кронкрайт сказал, что длительная задержка не повлияла отрицательно на его команду.

«Я думаю, что большая разница в том, что у нас было преимущество 3-0 (до задержки), поэтому было намного легче сидеть и ждать с преимуществом в три раунда, чем если бы мы проигрывали 3-0», — сказал он. отметил. «Мы вернулись в отель на некоторое время, затем вернулись и еще немного попрактиковались в ударе, и мы были готовы к работе.«

«Моргантаун» сократил счет до 6-1 в конце второго матча после двух подряд удвоений Аарона Форбса и Энтони Марша и жертвоприношения Джейкоба Спирена, но это все, что он мог получить против подачи Беррихилла.

Джонсон с шага вышел на вершину третьей, Броуди Кшисяк вышел из строя, а двумя аутами позже Мани выбрал Джонсона и вышел вперед со счетом 7: 1. Джонсон добавил сингл RBI в четвертом, Warner имел дубль RBI в шестом, а Натан Масар увеличил результативность в седьмом по счету попаданием, парой пропущенных мячей и вылетом.

«У нас была очень хорошая подача Макс (Кафлин), мы хорошо играли в защите, а в нападении мы бежали, бежали и бежали», — сказал Кронкрайт. «Мы бились и убегали, и мы крали базы. Это был очень агрессивный подход к нам сегодня в нападении».

Кафлин заработал победу, сделав шесть иннингов и позволив одну пробежку с тремя ударами и без прогулок.

Кронкрайт сказал, что его подача, которая была превосходной на протяжении всего постсезона, и его защита, которая превратила невероятные девять двойных игр в региональный, были большими ключами к чемпионату.

«У нас не так много силовых рук. У нас есть ловкость, питчеры, работающие с подачей в контакт, и мы собираемся избавиться от множества двойных игр, потому что мы не бросаем мяч. «Это не минус, это просто другой стиль подачи», — отметил он.

«… Я сказал очень рано (в сезоне), что защита будет сильной стороной этой команды, и это определенно было во время государственных и региональных турниров», — добавил он.«У нас действительно талантливая защитная команда».

Стартер Моргантауна Калеб Коттл принял поражение, отказавшись от девяти пробежек, восьми заработанных, на 13 попаданиях и четырех прогулках за 5 2/3 подач.

У Warner была огромная игра для Беррихилла: 3-к-4 с тремя дублями, два рана с битой и два забитых рана, в то время как Джонсон пошел 2-к-3 с ходьбой и тремя ИКР и забил один раз, у Денег было два. попаданий и два ИКР и забил один раз, и у Гриффина Кларка также было два попадания.

На вопрос, чего он больше всего ждет в поездке в Шелби на Мировую серию, Кронкрайт ответил: «Чтобы дети испытали, какая прекрасная, почти фестивальная атмосфера на стадионе. Для меня, эгоистично, я» мы бывали там много раз, и мы всегда останавливаемся в одной принимающей семье, так что я с нетерпением жду встречи с ними снова.

«Но что касается детей, я с нетерпением жду, когда они насладятся атмосферой», — добавил он. «У них есть концерты, красивая церемония открытия и турнир для игроков с денежными призами победителям и множество различных мероприятий.Будет очень весело ».

Произошла ошибка при настройке вашего пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

В вашем браузере отключены файлы cookie.Вам необходимо сбросить настройки вашего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, используйте кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie.Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу.Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файле cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта.Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Демографический статистический атлас Соединенных Штатов

Демографический статистический атлас Соединенных Штатов — Статистический атлас

Штаты:

Алабама, Аляска, Аризона, Арканзас, Калифорния, Колорадо, Коннектикут, Делавэр, Флорида, Джорджия, Гавайи, Айдахо, Иллинойс, Индиана, Айова, Канзас, Кентукки, Луизиана, Мэн, Мэриленд, Массачусетс, Мичиган, Миннесота, Миссисипи, Миссури, Монтана, Небраска, Невада, Нью-Гэмпшир, Нью-Джерси, Нью-Мексико, Нью-Йорк, Северная Каролина, Северная Дакота, Огайо, Оклахома, Орегон, Пенсильвания, Род-Айленд, Южная Каролина, Южная Дакота, Теннесси, Техас, Юта, Вермонт, Вирджиния , Вашингтон, Западная Вирджиния, Висконсин, Вайоминг

Основные округа:

Аламеда, Аллегейни, Бексар, Бронкс, Бровард, Кларк, Контра Коста, Кук, Кайахога, Даллас, Фэрфакс, Фэрфилд, Франклин, Фресно, Фултон, Харрис, Хеннепин, Хиллсборо, Гонолулу, Кинг, Кингз, Лос-Анджелес, Марикопа, Мекленбург, Майами-Дейд, Мидлсекс, Милуоки, Монтгомери, Нассау, Нью-Йорк, Окленд, Оранжевый, Апельсин, Палм-Бич, Филадельфия, Пима, Куинс, Риверсайд, Сакраменто, Солт-Лейк, Сан-Бернардино, Сан-Диего, Санта-Клара, Св.Луис, Саффолк, Таррант, Трэвис, Уэйк, Уэйн, Вестчестер

Основные города:

Альбукерке, Арлингтон, Атланта, Остин, Балтимор, Бостон, Шарлотта, Чикаго, Кливленд, Колорадо-Спрингс, Колумбус, Даллас, Денвер, Детройт, Эль-Пасо, Форт-Уэрт, Фресно, Хьюстон, Джексонвилл, Канзас-Сити, Лас-Вегас, Лонг-Бич, Лос-Анджелес, Мемфис, Меса, Майами, Милуоки, Миннеаполис, Нью-Йорк, Окленд, Оклахома-Сити, Омаха, Филадельфия, Финикс, Портленд, Роли, Сакраменто, Сан-Антонио, Сан-Диего, Сан-Франциско, Сан-Хосе, Сиэтл, Тусон, Талса , Вирджиния-Бич, Вашингтон, Уичито

Основные районы метро:

Район Атланты, Район Остина, Район Балтимора, Район Бирмингема, Район Бостона, Район Буффало, Район Шарлотт, Район Чикаго, Район Цинциннати, Район Кливленда, Район Колумбуса, Район Далласа, Район Денвера, Район Детройта, Район Хартфорда, Район Хьюстона, Район Индианаполиса , Район Джексонвилл, район Канзас-Сити, район Лас-Вегас, район Лос-Анджелеса, район Луисвилля, район Мемфис, район Майами, район Милуоки, район Миннеаполис, район Нэшвилл, район Нового Орлеана, район Нью-Йорка, район Оклахома-Сити, район Орландо, Филадельфия Район, район Феникс, район Питтсбург, район Портленд, район Провиденс, район Роли, район Ричмонд, район Риверсайд, район Сакраменто, район Солт-Лейк-Сити, район Сан-Антонио, район Сан-Диего, район Сан-Франциско, район Сан-Хосе, район Сиэтла, Санкт-ПетербургРайон Луи, Район Тампа, Район Вирджиния-Бич, Район Вашингтона

Демографический статистический атлас Соединенных Штатов

Демографический статистический атлас Соединенных Штатов — Статистический атлас

Штаты:

Основные округа:

Основные города:

Основные районы метро:

Международные отношения США, 1958–1960, Восточно-Азиатско-Тихоокеанский регион; Камбоджа; Лаос, Том XVI

165. Письмо заместителя заместителя государственного секретаря по экономике Дела (Диллон) в Директор Центральной разведки (Даллес) 1

Вашингтон, 15 февраля г., 1958 г.

Уважаемый г-н Даллес! Как вам известно, 4 мая 1958 г. выборы в Лаосе имеют жизненно важное значение для Соединенных Штатов, поскольку впервые подконтрольный коммунистам Патет Лао будет оспаривать эти выборы в качестве законной политической партии с явным и общенациональным скрытый аппарат. Если Патет Лао выиграет значительное количество из 21 Под вопросом места в Национальном собрании, коммунисты были бы хорошо на путь к достижению их цели по захвату всей страны; если, с другой стороны, правительство преуспеет в подавляющем большинстве районов, коммунисты потерпят серьезную неудачу, от которой они потребуется много времени на восстановление.

Чтобы помочь консерваторам в этих выборах, мы полагаем [1 строка исходного текста не рассекречена], что мы следует предпринять чрезвычайную программу политического воздействия на уровне села проекты по повышению осведомленности жителей села о 1) Королевском Озабоченность правительства своими проблемами и 2) реальность американского помогать. Такая программа могла бы во многом противодействовать ожидаемому энергичному Коммунистическая кампания в деревнях и растущая критика того, что Американская помощь приносит пользу немногим в городах и не достигает сельских жителей. Население.

Примеры предусмотренных проектов: бурение скважин в засуху. территорий, снос простых дорог, соединяющих села, строительство школьные здания, ремонт пагод и добавление двух Операций Братские команды. Каждый проект будет рассматриваться с точки зрения его немедленные и ощутимые политические преимущества в конкретной ситуации, будет максимально использовать местные ресурсы и рабочую силу, и будет относительно недорогой.Хотя основной упор будет сделан на повышение шансов консерваторов на майских выборах, программа будет продолжаться в течение достаточного периода времени после выборов, чтобы обеспечить длительное благоприятное воздействие на общественное мнение.

[3 абзаца (29 строк исходного текста) и сноска (3 строк текста) не рассекречено]

С уважением,

Rija VEF Hotel 3* (Латвия/Рижский регион/Рига). Отзывы отеля. Рейтинг отелей и гостиниц мира

Код 906 – какой оператор связи, регион

8966165 (+7966165) регион и оператор связи

Азиатско-Тихоокеанский регион: экономика, политика, право

Школьники Поморья достойно представили регион на всероссийском фестивале ГТО в Крыму · Новости Архангельска и Архангельской области. Сетевое издание DVINANEWS

РАСПП назвал самый перспективный для российского бизнеса регион Китая

Губернаторы — июль 2021 | Медиалогия

расшифровка карты недавно определенной критической области для синдрома Вольфа-Хиршхорна размером 165 kb | Молекулярная генетика человека

Аннотация

Введение

Результаты

Анализ пациента

Выраженная идентификация последовательности

Картирование и характеристика кДНК

Анализ GRAIL

Обсуждение

Материалы и методы

Клеточные линии

ДНК-зонды

Флуоресцентный

Анализ последовательности WHSCR

GRAIL анализ WHSCR

Анализ кДНК

Благодарности

Список литературы

04 D. Was H. 900muth,

004 JJ

004 JJ

(PDF) Карта стенограммы недавно определенной критической области для синдрома Вольфа-Хиршхорна размером 165 kb

Беррихилл крупно выигрывает в региональном финале

Произошла ошибка при настройке вашего пользовательского файла cookie

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Что сохраняется в файле cookie?

Демографический статистический атлас Соединенных Штатов

Демографический статистический атлас Соединенных Штатов

Международные отношения США, 1958–1960, Восточно-Азиатско-Тихоокеанский регион; Камбоджа; Лаос, Том XVI

165. Письмо заместителя заместителя государственного секретаря по экономике Дела (Диллон) в Директор Центральной разведки (Даллес) 1

Добавить комментарий Отменить ответ