165 регион: 65 регион (165) — это какая область России

Содержание

Rija VEF Hotel 3* (Латвия/Рижский регион/Рига). Отзывы отеля. Рейтинг отелей и гостиниц мира

Всего упоминаний 28 Положительных 3 Отрицательных
Сервис и обслуживание 10 Положительных 1 Отрицательных
Еда и напитки 9 Положительных 1 Отрицательных
Номера 4 Положительных 1 Отрицательных
Инфраструктура отеля 2 Положительных 0 Отрицательных
Подходит для отдыха 1 Положительных 0 Отрицательных
Размещение в отеле 1 Положительных 0 Отрицательных
Расположение отеля 1 Положительных 0 Отрицательных

Код 906 – какой оператор связи, регион

* Внимание! Любой номер может быть перенесен к другому оператору. Для точного определения принадлежности номера используйте функцию определения оператора

НомераОператорРегион
906-0xxxxxxБилайнМосква
906-10xxxxxБилайнРеспублика Башкортостан
906-11xxxxx
120xxxx
121xxxx
122xxxx
123xxxx
124xxxx
БилайнРеспублика Татарстан
906-125xxxx
126xxxx
127xxxx
128xxxx
129xxxx
БилайнСамарская область
906-130xxxx
131xxxx
132xxxx
133xxxx
134xxxx
135xxxx
136xxxx
БилайнЧувашская Республика
906-137xxxx
138xxxx
139xxxx
БилайнРеспублика Марий Эл
906-140xxxx
141xxxx
142xxxx
143xxxx
144xxxx
145xxxx
146xxxx
147xxxx
БилайнУльяновская область
906-148xxxx
149xxxx
150xxxx
151xxxx
152xxxx
153xxxx
154xxxx
155xxxx
БилайнСаратовская область
906-156xxxx
157xxxx
158xxxx
159xxxx
БилайнПензенская область
906-160xxxx
161xxxx
162xxxx
163xxxx
164xxxx
БилайнРеспублика Мордовия
906-165xxxx
166xxxx
167xxxx
168xxxx
169xxxx
170xxxx
171xxxx
172xxxx
173xxxx
174xxxx
175xxxx
БилайнВолгоградская область
906-176xxxxБилайнРеспублика Калмыкия
906-177xxxx
178xxxx
179xxxx
БилайнАстраханская область
906-180xxxx
181xxxx
182xxxx
183xxxx
184xxxx
185xxxx
186xxxx
БилайнРостовская область
906-187xxxxБилайнКраснодарский край
906-188xxxxБилайнРеспублика Северная Осетия
906-189xxxxБилайнКабардино-Балкарская Республика
906-190xxxx
191xxxx
192xxxx
БилайнРеспублика Хакасия
906-193xxxx
194xxxx
195xxxx
БилайнНовосибирская область
906-196xxxxБилайнАлтайский край
906-197xxxxБилайнОмская область
906-198xxxx
199xxxx
БилайнТомская область
906-200xxxx
201xxxx
202xxxx
203xxxx
204xxxx
205xxxx
БилайнНовгородская область
906-206xxxx
207xxxx
208xxxx
209xxxx
БилайнРеспублика Карелия
906-21xxxxxБилайнКалининградская область
906-220xxxx
221xxxx
222xxxx
223xxxx
224xxxx
БилайнПсковская область
906-225xxxx
226xxxx
227xxxx
228xxxx
229xxxx
БилайнСанкт-Петербург
906-23xxxxxБилайнКалининградская область
906-24xxxxx
25xxxxx
26xxxxx
27xxxxx
БилайнСанкт-Петербург
906-280xxxx
281xxxx
282xxxx
283xxxx
284xxxx
285xxxx
БилайнАрхангельская область
906-286xxxx
287xxxx
288xxxx
289xxxx
290xxxx
291xxxx
БилайнМурманская область
906-292xxxx
293xxxx
294xxxx
295xxxx
296xxxx
297xxxx
298xxxx
299xxxx
БилайнВологодская область
906-30xxxxx
31xxxxx
БилайнСаратовская область
906-32xxxxx
330xxxx
331xxxx
332xxxx
333xxxx
БилайнРеспублика Татарстан
906-334xxxx
335xxxx
336xxxx
БилайнРеспублика Марий Эл
906-337xxxx
338xxxx
339xxxx
340xxxx
341xxxx
342xxxx
343xxxx
344xxxx
345xxxx
346xxxx
347xxxx
БилайнСамарская область
906-348xxxx
349xxxx
35xxxxx
36xxxxx
БилайнНижегородская область
906-370xxxx
371xxxx
372xxxx
373xxxx
374xxxx
375xxxx
376xxxx
377xxxx
БилайнРеспублика Башкортостан
906-378xxxx
379xxxx
БилайнРеспублика Мордовия
906-38xxxxxБилайнЧувашская Республика
906-390xxxx
391xxxx
392xxxx
393xxxx
394xxxx
БилайнУльяновская область
906-395xxxx
396xxxx
397xxxx
398xxxx
399xxxx
БилайнПензенская область
906-400xxxx
401xxxx
402xxxx
403xxxx
404xxxx
405xxxx
406xxxx
407xxxx
408xxxx
409xxxx
410xxxx
БилайнВолгоградская область
906-411xxxx
412xxxx
413xxxx
БилайнСтавропольский край
906-414xxxx
415xxxx
416xxxx
417xxxx
418xxxx
419xxxx
42xxxxx
430xxxx
БилайнРостовская область
906-431xxxx
432xxxx
433xxxx
434xxxx
435xxxx
436xxxx
БилайнКраснодарский край
906-437xxxxБилайнРеспублика Калмыкия
906-438xxxxБилайнРеспублика Адыгея
906-439xxxxБилайнРостовская область
906-440xxxx
441xxxx
442xxxx
БилайнСтавропольский край
906-443xxxx
444xxxx
445xxxx
БилайнКарачаево-Черкесская Республика
906-446xxxx
447xxxx
448xxxx
449xxxx
450xxxx
БилайнРеспублика Дагестан
906-451xxxxБилайнВолгоградская область
906-452xxxx
453xxxx
454xxxx
БилайнРостовская область
906-455xxxx
456xxxx
457xxxx
458xxxx
459xxxx
БилайнАстраханская область
906-46xxxxx
47xxxxx
БилайнСтавропольский край
906-480xxxx
481xxxx
482xxxx
БилайнРеспублика Дагестан
906-483xxxx
484xxxx
485xxxx
БилайнКабардино-Балкарская Республика
906-486xxxx
487xxxx
488xxxx
БилайнРеспублика Ингушетия
906-489xxxx
490xxxx
491xxxx
492xxxx
493xxxx
БилайнСтавропольский край
906-494xxxx
495xxxx
БилайнРеспублика Северная Осетия
906-496xxxx
497xxxx
498xxxx
499xxxx
БилайнСтавропольский край
906-500xxxx
501xxxx
502xxxx
503xxxx
504xxxx
505xxxx
БилайнБрянская область
906-506xxxx
507xxxx
508xxxx
509xxxx
БилайнКалужская область
906-510xxxx
511xxxx
512xxxx
513xxxx
514xxxx
515xxxx
БилайнИвановская область
906-516xxxx
517xxxx
518xxxx
519xxxx
БилайнСмоленская область
906-520xxxx
521xxxx
522xxxx
523xxxx
524xxxx
БилайнКостромская область
906-525xxxx
526xxxx
527xxxx
528xxxx
529xxxx
БилайнЯрославская область
906-53xxxxxБилайнТульская область
906-540xxxx
541xxxx
542xxxx
543xxxx
544xxxx
545xxxx
546xxxx
547xxxx
548xxxx
БилайнРязанская область
906-549xxxx
550xxxx
551xxxx
552xxxx
553xxxx
554xxxx
555xxxx
БилайнТверская область
906-556xxxx
557xxxx
БилайнНижегородская область
906-558xxxx
559xxxx
560xxxx
561xxxx
562xxxx
563xxxx
564xxxx
БилайнВладимирская область
906-565xxxx
566xxxx
567xxxx
БилайнБелгородская область
906-568xxxx
569xxxx
570xxxx
571xxxx
БилайнОрловская область
906-572xxxx
573xxxx
574xxxx
575xxxx
576xxxx
577xxxx
БилайнКурская область
906-578xxxx
579xxxx
БилайнНижегородская область
906-580xxxx
581xxxx
582xxxx
583xxxx
584xxxx
585xxxx
586xxxx
587xxxx
588xxxx
589xxxx
590xxxx
БилайнВоронежская область
906-591xxxx
592xxxx
593xxxx
594xxxx
595xxxx
БилайнЛипецкая область
906-596xxxx
597xxxx
598xxxx
599xxxx
БилайнТамбовская область
906-600xxxx
601xxxx
602xxxx
603xxxx
604xxxx
605xxxx
606xxxx
607xxxx
608xxxx
БилайнБелгородская область
906-609xxxxБилайнКостромская область
906-610xxxx
611xxxx
612xxxx
613xxxx
614xxxx
615xxxx
616xxxx
БилайнВладимирская область
906-617xxxx
618xxxx
619xxxx
БилайнИвановская область
906-620xxxx
621xxxx
622xxxx
623xxxx
624xxxx
625xxxx
626xxxx
627xxxx
628xxxx
629xxxx
630xxxx
БилайнТульская область
906-631xxxx
632xxxx
633xxxx
634xxxx
635xxxx
636xxxx
637xxxx
638xxxx
639xxxx
БилайнЯрославская область
906-640xxxx
641xxxx
642xxxx
643xxxx
644xxxx
645xxxx
БилайнКалужская область
906-646xxxx
647xxxx
648xxxx
649xxxx
БилайнРязанская область
906-650xxxx
651xxxx
652xxxx
653xxxx
654xxxx
655xxxx
656xxxx
БилайнТверская область
906-657xxxx
658xxxx
659xxxx
БилайнТамбовская область
906-660xxxx
661xxxx
662xxxx
663xxxx
664xxxx
665xxxx
БилайнОрловская область
906-666xxxxБилайнКостромская область
906-667xxxx
668xxxx
669xxxx
БилайнСмоленская область
906-670xxxx
671xxxx
672xxxx
673xxxx
674xxxx
675xxxx
676xxxx
677xxxx
678xxxx
679xxxx
680xxxx
БилайнВоронежская область
906-681xxxx
682xxxx
683xxxx
684xxxx
685xxxx
686xxxx
687xxxx
688xxxx
БилайнЛипецкая область
906-689xxxx
690xxxx
691xxxx
692xxxx
693xxxx
694xxxx
БилайнКурская область
906-695xxxx
696xxxx
697xxxx
698xxxx
699xxxx
БилайнБрянская область
906-7xxxxxxБилайнМосква
906-80xxxxx
810xxxx
811xxxx
812xxxx
813xxxx
814xxxx
815xxxx
БилайнСвердловская область
906-816xxxx
817xxxx
818xxxx
819xxxx
БилайнРеспублика Удмуртия
906-820xxxx
821xxxx
822xxxx
823xxxx
824xxxx
825xxxx
826xxxx
827xxxx
БилайнТюменская область
906-828xxxxБилайнКурганская область
906-829xxxxБилайнКировская область
906-83xxxxx
84xxxxx
БилайнОренбургская область
906-850xxxx
851xxxx
852xxxx
853xxxx
854xxxx
БилайнЧелябинская область
906-855xxxx
856xxxx
857xxxx
858xxxx
859xxxx
БилайнСвердловская область
906-86xxxxx
870xxxx
871xxxx
872xxxx
БилайнЧелябинская область
906-873xxxx
874xxxx
875xxxx
БилайнТюменская область
906-876xxxx
877xxxx
878xxxx
БилайнПермский край
906-879xxxx
880xxxx
881xxxx
882xxxx
БилайнРеспублика Коми
906-883xxxx
884xxxx
БилайнКурганская область
906-885xxxx
886xxxx
БилайнЯмало-Ненецкий АО
906-887xxxx
888xxxx
889xxxx
БилайнПермский край
906-890xxxx
891xxxx
892xxxx
893xxxx
894xxxx
БилайнЧелябинская область
906-895xxxx
896xxxx
БилайнХанты-Мансийский АО
906-897xxxxБилайнРеспублика Удмуртия
906-898xxxx
899xxxx
БилайнЧелябинская область
906-900xxxx
901xxxx
902xxxx
903xxxx
904xxxx
905xxxx
БилайнКрасноярский край
906-906xxxx
907xxxx
908xxxx
909xxxx
БилайнНовосибирская область
906-910xxxx
911xxxx
912xxxx
913xxxx
914xxxx
915xxxx
916xxxx
917xxxx
БилайнКрасноярский край
906-918xxxx
919xxxx
БилайнОмская область
906-92xxxxx
930xxxx
931xxxx
932xxxx
933xxxx
934xxxx
935xxxx
936xxxx
937xxxx
938xxxx
БилайнКемеровская область
906-939xxxxБилайнРеспублика Алтай
906-940xxxx
941xxxx
942xxxx
943xxxx
944xxxx
945xxxx
946xxxx
БилайнАлтайский край
906-947xxxx
948xxxx
949xxxx
950xxxx
951xxxx
БилайнТомская область
906-952xxxx
953xxxx
БилайнРеспублика Хакасия
906-954xxxx
955xxxx
956xxxx
957xxxx
958xxxx
959xxxx
БилайнТомская область
906-96xxxxxБилайнАлтайский край
906-970xxxxБилайнРеспублика Алтай
906-971xxxx
972xxxx
973xxxx
974xxxx
БилайнКрасноярский край
906-975xxxx
976xxxx
977xxxx
978xxxx
979xxxx
98xxxxx
БилайнКемеровская область
906-990xxxx
991xxxx
992xxxx
993xxxx
БилайнОмская область
906-994xxxx
995xxxx
996xxxx
БилайнНовосибирская область
906-997xxxx
998xxxx
999xxxx
БилайнРеспублика Тыва

8966165 (+7966165) регион и оператор связи

8 (966) 165 0x xx

ОАО "Вымпел-Коммуникации", г. Москва и Московская область

8 (966) 165 1x xx

ОАО "Вымпел-Коммуникации", г. Москва и Московская область

8 (966) 165 2x xx

ОАО "Вымпел-Коммуникации", г. Москва и Московская область

8 (966) 165 3x xx

ОАО "Вымпел-Коммуникации", г. Москва и Московская область

8 (966) 165 4x xx

ОАО "Вымпел-Коммуникации", г. Москва и Московская область

8 (966) 165 5x xx

ОАО "Вымпел-Коммуникации", г. Москва и Московская область

8 (966) 165 6x xx

ОАО "Вымпел-Коммуникации", г. Москва и Московская область

8 (966) 165 7x xx

ОАО "Вымпел-Коммуникации", г. Москва и Московская область

8 (966) 165 8x xx

ОАО "Вымпел-Коммуникации", г. Москва и Московская область

8 (966) 165 9x xx

ОАО "Вымпел-Коммуникации", г. Москва и Московская область

Азиатско-Тихоокеанский регион: экономика, политика, право

Для цитирования: Евсеенко Е. Д. Некоторые особенности реализации права законодательной инициативы в Российской Федерации и государствах Азиатско-Тихоокеанского региона // Азиатско-Тихоокеанский регион : экономика, политика, право. – 2014. – № 3-4. – С. 158-165.

Евсеенко Екатерина Дмитриевна, Дальневосточный федеральный университет, г. Владивосток, Россия, e-mail: [email protected]

НЕКОТОРЫЕ ОСОБЕННОСТИ РЕАЛИЗАЦИИ ПРАВА ЗАКОНОДАТЕЛЬНОЙ ИНИЦИАТИВЫ В РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ И ГОСУДАРСТВАХ АЗИАТСКО-ТИХООКЕАНСКОГО РЕГИОНА

Аннотация:

Настоящая статья посвящена некоторым особенностям реализации права законодательной инициативы в Российской Федерации и государствах Азиатско-Тихоокеанского региона. В статье автор указывает, что в Конституции РФ 1993 года отсутствует упоминание народной законодательной инициативы как формы непосредственной демократии. К сожалению, до настоящего времени она не получила закрепления и в иных законодательных актах федерального уровня. В этой связи, как указывает автор, остро ощущается необходимость законодательного урегулирования отношений, связанных с реализацией права законодательной инициативы. Опыт стран АТР может стать отправной точкой в развитии данного института с учетом специфики нашего государства. Говоря об особенностях реализации права законодательной инициативы, автор указывает на ее специфическую форму: консолидированную законодательную инициативу. Особенность таких законодательных инициатив состоит в том, что они носят межрегиональный характер. Консолидированная законодательная инициатива является одним из механизмов взаимодействия субъектов законодательного процесса, направленных на улучшение качества принимаемых законов. Анализ опыта федераций Азиатско-Тихоокеанского региона (Австралия, Канада, США, Индия) показывает, что консолидированная законодательная инициатива является уникальной специфической формой, получившей свое распространение только в Российской Федерации. В заключение автор отмечает необходимость учета российским законодателем положительного опыта государств Азиатско-Тихоокеанского региона по вопросам совершенствования механизма реализации законодательной инициативы, принимая во внимание при этом особенности национальной правовой системы.

Ключевые слова:

законодательная инициатива, законотворчество, законодательство стран АТР, консолидированная законодательная инициатива

Школьники Поморья достойно представили регион на всероссийском фестивале ГТО в Крыму · Новости Архангельска и Архангельской области. Сетевое издание DVINANEWS

В Крыму в международном детском центре «Артек» состоялся V Фестиваль всероссийского физкультурно-спортивного комплекса «Готов к труду и обороне» среди обучающихся образовательных организаций. 

В финале фестиваля приняли участие 654 школьника из 83 регионов страны. Все ребята – обладатели золотых знаков отличия комплекса ГТО. 

Спортивная программа фестиваля была очень насыщенной. За несколько недель школьники успели пройти испытания комплекса «Готов к труду и обороне», пообщаться с известными спортсменами, олимпийскими чемпионами и послами ГТО. 

Сборную команду Архангельской области на всероссийском фестивале представляли восемь школьников из Котласа, Северодвинска и Коряжмы.  

В общекомандном зачете наши ребята заняли 33-е место, в командном зачете по третьей ступени – 37-е место, по четвертой ступени – 27-е место. 

Среди команд Северо-Запада России школьники Архангельской области заняли четвертое место. 

В личном первенстве лучший результат показала Екатерина Стрекаловская из Котласа. Из 165 участников четвертой ступени она заняла 19-е место. Достойно среди девушек третьей ступени выступила котлашанка Арина Кораблёва, попав в тридцатку сильнейших участников фестиваля.

- Это лучшее выступление сборной команды Архангельской области за все годы участия в финальном этапе всероссийского фестиваля ГТО. Также в рамках фестиваля состоялся всероссийский семинар-совещание по вопросам реализации комплекса «Готов к труду и обороне» на территории России. Участие в подобных мероприятиях помогает не только получить новые знания и опыт, но и узнать, каким образом поставлена работа у наших коллег в других регионах, обменяться с ними опытом, – сказал инструктор-методист регионального центра спортивной подготовки «Водник» Сергей Владыкин.  

Напомним, что организация тестирования выполнения нормативов комплекса ГТО в Архангельской области проходит в рамках регионального проекта «Спорт – норма жизни» национального проекта «Демография».

Агентство по спорту Архангельской области

РАСПП назвал самый перспективный для российского бизнеса регион Китая

https://ria.ru/20210209/region-1596660568.html

РАСПП назвал самый перспективный для российского бизнеса регион Китая

РАСПП назвал самый перспективный для российского бизнеса регион Китая - РИА Новости, 09.02.2021

РАСПП назвал самый перспективный для российского бизнеса регион Китая

Согласно результатам исследования Русско-Азиатского Союза промышленников и предпринимателей (РАСПП), наиболее перспективным для инвестиций российского бизнеса... РИА Новости, 09.02.2021

2021-02-09T13:07

2021-02-09T13:07

2021-02-09T13:07

россия-китай: главное

экономика

гуанчжоу

москва

гуандун

/html/head/meta[@name='og:title']/@content

/html/head/meta[@name='og:description']/@content

https://cdn22.img.ria.ru/images/111675/45/1116754588_0:165:3053:1882_1920x0_80_0_0_1a865230ca9271356da94aaa0c9b5f6c.jpg

МОСКВА, 9 фев — Проект "Россия-Китай: Главное". Согласно результатам исследования Русско-Азиатского Союза промышленников и предпринимателей (РАСПП), наиболее перспективным для инвестиций российского бизнеса регионом КНР является специальный административный район Сянган (Гонконг), сообщает информационное агентство Regnum.Рейтинг был составлен на основе анализа 39 показателей, в числе которых уровень и динамика экономического развития, интенсивность текущего уровня взаимодействия регионов с Россией, а также показатели финансовой инфраструктуры, налогообложение и общий уровень социально-экономического развития.В результате первое место занял Сянган. Следом за ним идёт провинция Гуандун и её административный центр Гуанчжоу. Замыкает тройку лидеров город центрального подчинения Шанхай. Аутсайдерами рейтинга стали Тибетский автономный район, Цзянси, Нянся-Хуэйский автономный район, Цинхай, Юннань и Хайнань.

https://ria.ru/20210202/chuntsin-1595630147.html

гуанчжоу

москва

гуандун

РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

2021

РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

Новости

ru-RU

https://ria.ru/docs/about/copyright.html

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/

РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

https://cdn24.img.ria.ru/images/111675/45/1116754588_162:0:2893:2048_1920x0_80_0_0_c2f4b31ae05621e1d679b7fba0467d39.jpg

РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

РИА Новости

[email protected]

7 495 645-6601

ФГУП МИА «Россия сегодня»

https://xn--c1acbl2abdlkab1og.xn--p1ai/awards/

экономика, гуанчжоу, москва, гуандун

Губернаторы - июль 2021 | Медиалогия

1. СОБЯНИН Сергей Семенович Москва 56 070 449 610,0
2. ВОРОБЬЕВ Андрей Юрьевич Московская обл. 33 330 159 064,0+1
3. БЕГЛОВ Александр Дмитриевич Санкт-Петербург 12 226 135 918,2-1
4. КУЙВАШЕВ Евгений Владимирович Свердловская обл. 13 443 95 996,7+4
5. АКСЕНОВ Сергей Валерьевич Крым 13 404 95 640,4-1
6. КОНДРАТЬЕВ Вениамин Иванович Краснодарский край 16 597 86 486,8
7. ТЕКСЛЕР Алексей Леонидович Челябинская обл. 9 774 74 911,1+7
8. ХАБИРОВ Радий Фаритович Башкортостан 10 009 74 762,5-3
9. НИКИТИН Глеб Сергеевич Нижегородская обл. 14 084 64 267,3-2
10. МИННИХАНОВ Рустам Нургалиевич Татарстан 10 117 62 459,7+3
11. РУДЕНЯ Игорь Михайлович Тверская обл. 14 632 59 567,4-1
12. АЗАРОВ Дмитрий Игоревич Самарская обл. 7 693 56 020,0
13. ДЕГТЯРЕВ Михаил Владимирович Хабаровский край 6 222 52 947,8+3
14. ВЛАДИМИРОВ Владимир Владимирович Ставропольский край 12 534 51 249,2+1
15. НИКОЛАЕВ Айсен Сергеевич Республика Саха 7 434 50 418,2+8
16. КОБЗЕВ Игорь Иванович Иркутская обл. 10 574 47 096,8+2
17. ДРОЗДЕНКО Александр Юрьевич Ленинградская обл. 5 277 45 680,2-6
18. КАДЫРОВ Рамзан Ахматович Чечня 5 616 44 080,2-9
19. СОЛОДОВ Владимир Викторович Камчатский край 4 877 43 571,0+34
20. КОЖЕМЯКО Олег Николаевич Приморский край 5 357 38 408,4+11
21. КОМАРОВА Наталья Владимировна Ханты-Мансийский АО 5 567 34 378,7+3
22. ПАРФЕНЧИКОВ Артур Олегович Карелия 4 792 33 120,4+15
23. ОРЛОВ Василий Александрович Амурская область 4 591 32 962,4+6
24. ГЛАДКОВ Вячеслав Владимирович Белгородская обл. 5 801 32 674,6+18
25. ГОЛУБЕВ Василий Юрьевич Ростовская обл. 6 849 31 896,5+15
26. ЦИВИЛЕВ Сергей Евгеньевич Кемеровская обл. 5 581 31 021,6-4
27. ТРАВНИКОВ Андрей Александрович Новосибирская обл. 4 472 30 796,3-6
28. ВЕДЕРНИКОВ Михаил Юрьевич Псковская обл. 5 363 29 854,7+4
29. ШАПША Владислав Валерьевич Калужская обл. 5 661 29 361,3+5
30. ЧИБИС Андрей Владимирович Мурманская обл. 5 630 28 531,2-10
31. ДЮМИН Алексей Геннадьевич Тульская обл. 8 750 28 354,4-14
32. АРТАМОНОВ Игорь Георгиевич Липецкая обл. 7 331 27 716,4-13
33. УСС Александр Викторович Красноярский край 5 494 26 899,4-3
34. МООР Александр Викторович Тюменская обл. 3 212 26 609,6+1
35. МЕЛЬНИЧЕНКО Олег Владимирович Пензенская обл. 4 878 25 400,4-2
36. ЛИМАРЕНКО Валерий Игоревич Сахалинская обл. 3 721 25 125,2+5
37. АЛИХАНОВ Антон Андреевич Калиниградская обл. 4 195 24 985,3-12
38. ПАСЛЕР Денис Владимирович Оренбургская обл. 3 732 22 931,4-12
39. МЕЛИКОВ Сергей Алимович Дагестан 6 160 21 596,0+5
40. ОСИПОВ Александр Михайлович Забайкальский край 3 655 21 138,3+19
41. БУРКОВ Александр Леонидович Омская обл. 3 624 20 741,3-13
42. МАХОНИН Дмитрий Николаевич Пермский край 5 412 20 113,0-3
43. ЦЫДЕНОВ Алексей Самбуевич Бурятия 4 110 20 100,2+14
44. УЙБА Владимир Викторович Коми 3 665 20 098,1-8
45. БОГОМАЗ Александр Васильевич Брянская обл. 5 834 19 798,0
46. ЛЮБИМОВ Николай Викторович Рязанская обл. 3 871 19 008,0-19
47. ЗДУНОВ Артем Алексеевич Мордовия 2 660 17 936,1-4
48. ТОМЕНКО Виктор Петрович Алтайский край 4 309 17 907,4+1
49. РАДАЕВ Валерий Васильевич Саратовская обл. 4 102 17 749,6+11
50. БОЧАРОВ Андрей Иванович Волгоградская обл. 6 407 17 025,6-4
51. БАБУШКИН Игорь Юрьевич Астраханская область 3 497 15 865,7+7
52. БРЕЧАЛОВ Александр Владимирович Удмуртия 2 417 15 865,6+2
53. РАЗВОЖАЕВ Михаил Владимирович Севастополь 3 058 15 689,0-6
54. РУССКИХ Алексей Юрьевич Ульяновская обл. 1 903 15 572,9-2
55. КЛЫЧКОВ Андрей Евгеньевич Орловская обл. 3 845 15 120,5+8
56. КУВШИННИКОВ Олег Александрович Вологодская обл. 3 891 15 111,8-8
57. ВАСИЛЬЕВ Игорь Владимирович Кировская обл. 3 544 14 980,0+14
58. СИПЯГИН Владимир Владимирович Владимирская обл. 4 861 14 816,3-3
59. ГУСЕВ Александр Викторович Воронежская обл. 4 192 14 527,6-3
60. СТАРОВОЙТ Роман Владимирович Курская обл. 4 199 14 388,7+1
61. ЦЫБУЛЬСКИЙ Александр Витальевич Архангельская обл. 5 942 14 203,7+6
62. АРТЮХОВ Дмитрий Андреевич Ямало-Ненецкий АО 2 705 14 165,0-24
63. ОСТРОВСКИЙ Алексей Владимирович Смоленская обл. 4 226 13 142,8+5
64. КОНОВАЛОВ Валентин Олегович Хакасия 3 805 12 888,1+5
65. НИКИТИН Александр Валерьевич Тамбовская обл. 2 740 12 148,3+9
66. НИКОЛАЕВ Олег Алексеевич Чувашия 4 841 12 081,1-16
67. ЕВСТИФЕЕВ Александр Александрович Марий Эл 2 230 11 254,6-5
68. МИРОНОВ Дмитрий Юрьевич Ярославская обл. 1 943 10 588,4-17
69. МЕНЯЙЛО Сергей Иванович Северная Осетия - Алания 2 595 9 740,0-3
70. ШУМКОВ Вадим Михайлович Курганская обл. 1 490 9 662,0-5
71. ЖВАЧКИН Сергей Анатольевич Томская обл. 1 842 9 375,0+2
72. КУМПИЛОВ Мурат Каральбиевич Адыгея 1 962 8 676,4-2
73. НОСОВ Сергей Константинович Магаданская обл. 1 709 8 525,4+2
74. ВОСКРЕСЕНСКИЙ Станислав Сергеевич Ивановская обл. 2 276 7 791,0+6
75. НИКИТИН Андрей Сергеевич Новгородская обл. 1 665 7 371,0-11
76. СИТНИКОВ Сергей Константинович Костромская обл. 2 849 7 326,0-4
77. ТЕМРЕЗОВ Рашид Бориспиевич Карачаево-Черкесия 1 294 6 683,5+1
78. ГОЛЬДШТЕЙН Ростислав Эрнстович Еврейская автономная обл. 1 807 6 447,0+4
79. КОКОВ Казбек Валерьевич Кабардино-Балкария 1 456 4 930,0-2
80. ХАСИКОВ Бату Сергеевич Калмыкия 1 142 4 756,0+3
81. КОПИН Роман Валентинович Чукотский АО 719 4 075,0+4
82. КАЛИМАТОВ Махмуд-Али Макшарипович Ингушетия 835 3 580,0-6
83. ХОВАЛЫГ Владислав Товарищтайович Тыва 430 3 123,1-4
84. ХОРОХОРДИН Олег Леонидович Республика Алтай 693 2 228,3-3
85. БЕЗДУДНЫЙ Юрий Васильевич Ненецкий АО 493 2 085,0-1

расшифровка карты недавно определенной критической области для синдрома Вольфа-Хиршхорна размером 165 kb | Молекулярная генетика человека

Аннотация

Синдром Вольфа-Хиршхорна (WHS) - синдром множественных пороков развития, характеризующийся психическими дефектами и дефектами развития, возникающими из-за отсутствия сегмента одного короткого плеча хромосомы 4 (4p16.3). Из-за сложной и изменчивой экспрессии этого расстройства считается, что WHS представляет собой синдром смежных генов с неопределенным количеством генов, вносящих вклад в фенотип.В попытке идентифицировать гены, которые вносят вклад в развитие человека и отсутствие которых приводит к этому синдрому, мы использовали серию знаковых космид, чтобы охарактеризовать коллекцию клеточных линий, полученных от пациентов с WHS. Флуоресценция in situ. Гибридизация с этими космидами была использована для уточнения критической области WHS (WHSCR) до 260 т.п.н. Геномная последовательность этой области доступна, и анализ этой последовательности с помощью BLAST обнаружил несколько клонов кДНК в базе данных dbEST. Всего девять независимых кДНК и их предсказанные продукты трансляции из этого анализа не показывают значительного сходства с членами баз данных ДНК или белков.Более того, эти гены были локализованы в критической области WHS и обнаруживают интересный паттерн транскрипционной организации. Ранее опубликованный отчет о пациенте с проксимальным 4p-синдромом дополнительно уточняет WHSCR до 165 т.п.н., определяемых локусами D4S166 и D4S3327 . Эта работа обеспечивает отправную точку для понимания того, как множественные гены или другие механизмы могут вносить вклад в сложный фенотип, связанный с синдромом Вольфа-Хиршхорна.

Введение

Синдром Вольфа-Хиршхорна (WHS) - синдром множественных пороков развития, характеризующийся психическими дефектами и дефектами развития, возникающими в результате частичной делеции короткого плеча одной хромосомы 4 (4p16.3). У пациентов с WHS проявляется совокупность симптомов, включая тяжелую недостаточность роста, от тяжелой до глубокой умственной отсталости с началом судорог на втором году жизни, микроцефалию, крестцовые ямочки и характерные черты лица, в том числе выраженную глабеллу, гипертелоризм («внешний вид греческого шлема»). микрогнатия, сильно изогнутые брови, загнутый вниз «карповый» рот и простые уши без лепестков. Другие аномалии могут включать различные дефекты закрытия средней линии (расщелина губы или неба, гипоспадия, крипторхизм), деформации сгибания / контрактуры рук и ног, дефекты скелета (сколиоз, кифоз), пороки сердца, гемангиомы, гипоплазия сосков и дефекты глаз (микрофтальмия). , дефекты радужной оболочки, катаракта, косоглазие (1–3).

Фенотип WHS первоначально был связан с цито-генетически наблюдаемыми изменениями кариотипа, возникающими в результате терминальной делеции одного 4p (4–5). Впоследствии для подтверждения диагноза WHS были использованы молекулярные методы, при которых стандартный анализ кариотипа не смог выявить скрытую транслокацию (6) и небольшие терминальные или интерстициальные делеции (7-8). Эти молекулярные анализы были облегчены обширными физическими картами и клонированными ресурсами, доступными для 4p16.3 (9–11). Эти ресурсы послужили основой для создания молекулярной основы для этого синдрома.

Рисунок 1.

( A ) Физическая карта 4p16. Локусы, использованные в этом и предыдущих исследованиях, показаны над линией, а зонды, использованные в этом исследовании, показаны под линией. Расстояние от D4S81 до теломер ∼4.5 Мб. Генетическое расстояние между MSX1 и D4S10 составляет 3 сМ (44). Ранее опубликованная критическая область изображена сплошными прямоугольниками, примыкающими к критической области, определенной пациентами WHS, описанными в этом исследовании, и изображена открытым прямоугольником.Заштрихованная часть открытого прямоугольника - это область, которую можно исключить при рассмотрении пациента с 4p-синдромом (20). ( B ) Космиды второго уровня, используемые в FISH-анализе, определяют контрольные точки у пациентов, определяющих критическую область. Космиды обозначены пластинкой и строкой с координатами столбца в библиотечном массиве Лос-Аламосской хромосомы 4. Непрерывные горизонтальные линии указывают степень делеции у указанного пациента, стрелки указывают, что делеция продолжается либо теломерным (CM), либо центромерным (LGL7447).

Рисунок 1.

( A ) Физическая карта 4p16. Локусы, использованные в этом и предыдущих исследованиях, показаны над линией, а зонды, использованные в этом исследовании, показаны под линией. Расстояние от D4S81 до теломер ∼4.5 Мб. Генетическое расстояние между MSX1 и D4S10 составляет 3 сМ (44). Ранее опубликованная критическая область изображена сплошными прямоугольниками, примыкающими к критической области, определенной пациентами WHS, описанными в этом исследовании, и изображена открытым прямоугольником.Заштрихованная часть открытого прямоугольника - это область, которую можно исключить при рассмотрении пациента с 4p-синдромом (20). ( B ) Космиды второго уровня, используемые в FISH-анализе, определяют контрольные точки у пациентов, определяющих критическую область. Космиды обозначены пластинкой и строкой с координатами столбца в библиотечном массиве Лос-Аламосской хромосомы 4. Непрерывные горизонтальные линии указывают степень делеции у указанного пациента, стрелки указывают, что делеция продолжается либо теломерным (CM), либо центромерным (LGL7447).

Предыдущие исследования исключили D4S43 и D4S168 из критической области (12–13). Из-за обильных ресурсов клонирования из этой области генома было идентифицировано большое количество потенциальных кодирующих последовательностей (14-17). Кроме того, в этом регионе был локализован один охарактеризованный ген, FGFR3 . В целом, область кажется генной. Следовательно, в этом геномном сегменте присутствует несколько потенциальных кодирующих последовательностей, которые могут вносить вклад в фенотип WHS.

По мере того, как критическая область для этого синдрома уменьшается, количество пациентов, которые способствуют очищению области, значительно уменьшается. Чтобы ускорить этот процесс, мы ранее выбрали серию космид-«ориентир» для анализа клеточных линий пациентов с помощью флуоресценции in situ гибридизации (FISH), которые простираются через конечный сегмент 4,5 Mb 4p (13). Используя этот подход, мы охарактеризовали одного нового пациента и дополнительно охарактеризовали трех других пациентов.Эти анализы уточняют как проксимальную, так и дистальную границы критической области WHS (WHSCR).

Вновь определенный WHSCR находится в области, которая была секвенирована. Эта геномная последовательность была использована для идентификации потенциальных кодирующих последовательностей и для построения карты транскрипции этого синдрома смежных генов.

Результаты

Анализ пациента

Чтобы ускорить локализацию точек останова при делеции у пациентов с WHS, была использована серия космид-ориентиров для сканирования геномной области от MSX1 до субтеломерного локуса D4F26 (13; рис.1а). Были выбраны космиды, которые охватывали эту область со средним расстоянием между локусами 560 т.п.н. После этого предварительного анализа был проведен второй раунд FISH с использованием серии перекрывающихся космид, нанесенных на карту между ориентирами (11; рис. 1b). Это позволило локализовать точки останова на конкретном космиде в регионе.

В клеточной линии сигналы флуоресценции CM, соответствующие космиде, были обнаружены на обоих гомологах хромосомы 4 с использованием космид, проксимальных к 10d12, включительно (рис.1а и б). Сигналы флуоресценции, соответствующие космидам, включая 193f8 и удаленные от них, были обнаружены на одной хромосоме 4. Следовательно, CM содержит терминальную делецию, точка разрыва которой лежит в пределах 108f12 (Fig. 1b; определяется с помощью B4P19). Этот результат определяет центромерную проксимальную границу WHS и коррелирует с ранее опубликованными данными, которые помещают точку останова менее чем на 80 kb дистальнее D4S43 (12). Степень терминальной делеции у этого пациента составляет ~ 2,5 Мб. В клеточной линии HHW1839 сигналы флуоресценции, соответствующие космиде, были обнаружены на обоих гомологах хромосомы 4 с использованием космид, проксимальных к 139h8, включительно.Сигналы флуоресценции, соответствующие космидам, включая 65c1, были обнаружены на одной хромосоме 4. Следовательно, HHW1839 содержит терминальную делецию, точка разрыва которой находится между космидами 139h8 и 65c1 (обе космиды расположены между D4S183 и D4S181 ; 11) . Степень делеции у этого пациента составляет ~ 3 мб. FISH-анализ клеточной линии MS2505 показал, что космиды, удаленные от 33C6 включительно ( D4S43 ), присутствовали только на одном из гомологов.Сигналы флуоресценции, соответствующие космидам, включая 247f6 и проксимально к ним, были обнаружены на обоих гомологах хромосомы 4. Следовательно, MS2505 содержит окончательное удаление с точками останова между D4S182 и D4S43 .

Дистальная точка разрыва WHSCR была определена с использованием производной от WHS линии клеток LGL7447. Сигналы флуоресценции, соответствующие космиде, были обнаружены на обоих гомологах хромосомы 4 с использованием космид, включая 190b4 и удаленные от него (рис. 1a и b).Сигналы флуоресценции, соответствующие космиде, были обнаружены на одной хромосоме 4 с использованием космид, включая 19h2 и проксимально к ней. Это помещает дистальную точку разрыва у этого пациента ближе к концу космид 190b4 и 19h2 (Рис. 1b; определяется B4P20). Проксимальная точка разрыва в LGL7447 является центромерной по отношению к MSX1 . Следовательно, степень интерстициальной делеции у этого пациента, вероятно, будет не менее 4,5 МБ. Сравнение наименьшей области перекрытия у этих пациентов снижает WHSCR с 750 т.п.н. до ∼260 т.п.н., который находится между локусами D4S132 (определяется космидами 10d12 и 108f12) и D4S3327 (определяется космидой 190b4).

Рисунок 2.

Карта транскрипции WHSCR. Показан космидный контиг WHSCR и области, непосредственно фланкирующей. Горизонтальная линия указывает положение WHSCR. Положение и направление транскрипции кДНК, если они известны, показаны под WHSCR. Пунктирная линия представляет собой область, которую можно исключить при рассмотрении пациента с 4р-синдромом (20).

Рисунок 2.

Карта транскрипции WHSCR. Показан космидный контиг WHSCR и области, непосредственно фланкирующей.Горизонтальная линия указывает положение WHSCR. Положение и направление транскрипции кДНК, если они известны, показаны под WHSCR. Пунктирная линия представляет собой область, которую можно исключить при рассмотрении пациента с 4р-синдромом (20).

Выраженная идентификация последовательности

Недавно определенный WHSCR размером 260 kb полностью попадает в космидный контиг размером 2 Mb (11), который был секвенирован Центром Сэнгера, Великобритания. Последовательности космид в пределах WHSCR и фланкирующей области были выровнены, чтобы сформировать непрерывную последовательность области.В свете продолжающегося обсуждения требований к качеству данных последовательностей сообществом Genome, стоит отметить, что мы выявили два несоответствия в этом наборе данных. Во-первых, в последовательности контига есть задокументированные пробелы, которые делают его неполным. Во-вторых, и это, вероятно, наиболее важно для нашего анализа, пять ошибок indel (неоднозначность вставки или делеции оснований) были идентифицированы в перекрытии в 7 т.п.н., связывающем два клона (номера доступа Z67997 и Z68226). Несмотря на эти незначительные проблемы, эта последовательность предоставляет большой объем информации для анализа.Геномную последовательность этого WHSCR анализировали посредством BLAST, Fasta и GRAIL с использованием программы Sequence Comparison ANalysis (SCAN; 18). Всего с помощью dbEST было идентифицировано 42 клона кДНК. Выравнивание как 5'-, так и 3'-последовательности в сочетании с анализом положения 3'-последовательности и направления транскрипции позволило идентифицировать в общей сложности девять независимых последовательностей. Для дальнейшего анализа был выбран один клон кДНК, представляющий каждый набор последовательностей. Эти кДНК и их предсказанные продукты трансляции не обнаруживают значительного сходства с членами других баз данных ДНК или белков.Эти клоны были локализованы обратно в конкретную космиду двумя разными методами. Индивидуальные кДНК гибридизовали с расщепленными EccRI космидами в критической области. Кроме того, последовательность из dbEST анализировали относительно геномной последовательности области с помощью BLAST. Клоны из TIGR (Институт геномных исследований) секвенировали с одним праймером, и эта последовательность была локализована в геномной последовательности (таблица 1). Клоны из консорциума IMAGE были секвенированы как с 5 ', так и с 3' направления (таблица 1).Таким образом было получено окончательное положение для 3 'и 5' концов клонов IMAGE (таблица 1). Это позволило определить транскрипционную ориентацию этих клонов кДНК (рис. 2). Результаты двух методов сравнивались, чтобы убедиться в отсутствии расхождений. Локализация этих кДНК обратно к космидам обеспечивает карту транскриптов для WHSCR (рис. 2).

Картирование и характеристика кДНК

Клоны кДНК 53283, 267784 и 194164, картированные на космиду 96a2; клоны кДНК HHCJ43 и 153048, картированные на космиду 174g8; клон кДНК 174766, картированный на космиду 19h2; клон кДНК 44997, картированный на космиду 19h2; последовательность из клона кДНК 27812, картированная на космиды 27h9 и 19h2.Клон кДНК HFBEP10 охватывает космиды 19h2 и 190b4 (таблица 1; данные не показаны). Анализ последовательности HFBEP10 локализовал один конец внутри космиды 190b4. Однако гибридизация с клоном кДНК космид обнаружила сигнал в обеих космидах 190b4 и 19h2. Следовательно, клон охватывает эти космиды и, возможно, охватывает дистальную точку разрыва WHSCR. Все клоны кДНК картируются в WHSCR размером 165 т.п.н. (фиг. 2).

Клоны кДНК 27812, 53283 и 267784 транскрибируются от центромерного к теломерному направлению.Клоны кДНК 194164, 153048, 44997 и 174766 транскрибируются в противоположном направлении (рис. 2). Направление транскрипции клонов кДНК HFBEP10 и HHCJ43 не могло быть определено, поскольку информация о последовательности была получена только с одного конца. Помимо ориентации клонов кДНК, выравнивание последовательности кДНК с геномной последовательностью выявило структуры интрон-экзон в клонах кДНК 53283 и 267784. Информация о последовательности из клона кДНК 53283 показала, что он содержит по крайней мере четыре экзона, которые находятся над 26.Геномная область размером 2 т.п.н. Положение этих экзонов в космиде 96a2: 3048–3250 п.н., 20 270–20 442 п.н., 22 117–22 213 п.н. и 28 860–29 277 п.н. (Таблица 1). Три из четырех экзонов были обнаружены в 5'-последовательности; это 202, 173 и> 96 п.н. 3'-экзон имеет длину> 417 п.н. Информация о последовательностях клона кДНК 267784 показала, что он содержит по меньшей мере три экзона, которые простираются на область генома размером 10,6 т.п.н. Положение этих экзонов внутри космиды 96a2: 18 616–19 112 пар оснований, 19 470–19 722 пар оснований и 29 101–29 277 пар оснований (таблица 1).Два из трех экзонов обнаруживаются в 3'-последовательности; это 176 и> 252 п.н., а 5'-экзон -> 496 п.н. Клон кДНК 174766 полностью секвенирован (таблица 1). Клон кДНК 174766 имеет размер ~ 600 п.н. и не имеет интрон-экзонной структуры.

Анализ GRAIL

Анализ

GRAIL этой области предсказал всего 109 экзонов. Тридцать четыре экзона GRAIL 2 были предсказаны в проксимальной геномной области WHSCR (112 340 п.н.) и 75 экзонов GRAIL 2 в космидах, охватывающих дистальную геномную область WHSCR (180 430 п.н.).Поскольку организация эукариотических генов обычно включает несколько экзонов, мы обнаружили, что предсказания гена GRAIL наиболее надежны, когда кластеры экзонов наблюдаются вдоль сегмента последовательности геномной ДНК. Шесть кластеров предсказанных GRAIL экзонов наблюдались в дистальной области генома WHSCR (рис. 3b). Однако только один кластер наблюдался в проксимальной области генома (рис. 3а). Из всех предсказаний экзонов GRAIL только три частично перекрываются с областями гомологии EST, все в кластере B2 (F) GRAIL (рис.3б). Основываясь на предсказаниях экзонов GRAIL, дистальная область WHSCR имеет по крайней мере в три раза более высокую плотность человеческих генов, чем соседняя проксимальная геномная область.

Обсуждение

В этом исследовании мы использовали серию ранее определенных знаковых космид (13) для дальнейшего анализа четырех пациентов с WHS. Результаты этого анализа уточнили WHSCR с 750 т.п.н. (13) до области 260 т.п.н. между локусами D4S132 (определяется космидой 108f12, рис.2b) и D4S3327 (определяется космидой 190b4, рис. 2b). Это означает, что набор генов, ответственных за симптомы WHS, находится в этой сильно сокращенной области. Это важное достижение делает возможным идентификацию и анализ генов, вызывающих этот синдром.

Это дальнейшее уменьшение WHSCR (с 750 до 260 т.п.н.) исключило единственный охарактеризованный ген, FGFR3 , из области. Поэтому очень важно изолировать кодирующие последовательности из этой области и выяснить их роль как в нормальном развитии человека, так и в синдроме смежных генов.Область размером 260 т.п.н. полностью отображается внутри космидного контига размером 2 МБ, последовательность которого известна (неопубликованные данные, Центр Сэнгера, Великобритания). Несмотря на то, что некоторые незначительные несоответствия остаются нерешенными, этот набор данных предоставляет огромное количество информации. Анализ последовательности с помощью BLAST обнаружил 42 совпадения с клонами кДНК в dbEST, которые, по-видимому, сливаются в девять различных кДНК. Они и их предсказанные продукты трансляции не обнаруживают значительного сходства с членами баз данных ДНК или белков, за исключением dbEST.Следовательно, помимо частоты этих последовательностей в тканеспецифических библиотеках клонов, нет никаких указаний на биологическую функцию этих клонов. Каждый из этих клонов кДНК был локализован в конкретной космиде в WHSCR, и положение 3 'и 5' последовательностей в этих космидах было определено. Эта карта транскриптов обеспечивает отправную точку для дальнейшей характеристики и выяснения роли этих клонов как в синдроме Вольфа-Хиршхорна, так и в нормальном развитии человека.

Таблица 1. Анализ

кДНК из WHSCR

Таблица 1.

Анализ кДНК из WHSCR

Рисунок 3.

Компьютер предсказал гены в критической области синдрома Вольфа-Хиршхорна. ( A ) Предсказания экзонов GRAIL 2 для космид от 108f12 до 206d7. Кластер экзонов GRAIL обозначен A1 и (R) для обратной цепи. ( B ) Предсказания экзонов GRAIL 2 для космид с 174g8 по 190b4. Предсказания экзонов и помеченные гомологии EST идентифицируют гены-кандидаты с WHSCR.Кластеры экзонов GRAIL на каждой цепи помечены B1 – B6 с (F) для прямой цепи и (R) для обратной цепи. Области идентичности EST помечены закрашенными треугольниками (t для прямого и s для обратного) или закрашенным ромбом (ориентация нити неизвестна) и типичным именем клона EST.

Рисунок 3.

Компьютер предсказал гены в критической области синдрома Вольфа-Хиршхорна. ( A ) Предсказания экзонов GRAIL 2 для космид от 108f12 до 206d7. Кластер экзонов GRAIL обозначен A1 и (R) для обратной цепи.( B ) Предсказания экзонов GRAIL 2 для космид с 174g8 по 190b4. Предсказания экзонов и помеченные гомологии EST идентифицируют гены-кандидаты с WHSCR. Кластеры экзонов GRAIL на каждой цепи помечены B1 – B6 с (F) для прямой цепи и (R) для обратной цепи. Области идентичности EST помечены закрашенными треугольниками (t для прямого и s для обратного) или закрашенным ромбом (ориентация нити неизвестна) и типичным именем клона EST.

Анализ последовательности этих клонов показал, что клон кДНК 53283 охватывает 26.Геномная область 2 т.п.н. в космиде 96a2 (как указано в таблице 1). Используя последовательность, найденную в dbEST для этого клона, можно идентифицировать интрон размером 17 т.п.н., обнаруженный в 5'-последовательности. 5'-экзон составляет 202 п.н., а оставшаяся часть 5'-последовательности попадает в два экзона (таблица 1). Клон кДНК 267784 имеет общую 3'-последовательность 175 п.н. с клоном кДНК 53283. Остальные эти последовательности расходятся друг от друга на уровне 29 101 п.о. в космиде 96a2. 3'-последовательность в клоне кДНК 53283 примыкает к геномной последовательности, а оставшаяся часть 3'-последовательности в клоне кДНК 267784 обнаружена на расстоянии 10 т.п.н. проксимальнее на 19 725 п.о. в космиде 96a2.5'-последовательность клона кДНК 267784 начинается с 18 696 пар оснований в космиде 96a2. Это отображается в интроне 17 т.п.н. клона кДНК 53283. Следовательно, весьма вероятно, что оба этих клона представляют разные гены.

Предсказания GRAIL экзонов-кандидатов дополняют экзоны-кандидаты, идентифицированные поиском сходства последовательностей. Только три из 19 областей гомологии EST частично перекрываются с предсказаниями экзона GRAIL 2. КДНК, представленные EST, секвенировали с одного или обоих концов.Внутренние области большинства этих EST еще предстоит секвенировать. Для кластера B2 (F) экзонов GRAIL (рис. 3b) следует ожидать дополнительных перекрытий между экзонами GRAIL и кДНК. Остальные кластеры экзонов GRAIL вполне могут представлять реальные гены, которые не были бы обнаружены EST или другими подобиями баз данных. Напротив, восемь клонов кДНК не тесно связаны с предсказаниями экзонов GRAIL (рис. 3b). Эти наблюдения подтверждают ценность как анализа GRAIL, так и анализа идентичности последовательностей.Кроме того, интересно отметить, что кДНК в WHSCR обнаруживают неравномерное распределение. Все идентифицированные клоны попадают в WHSCR размером 165 т.п.н. (фиг. 2b).

WHSCR можно дополнительно уменьшить, учитывая анализ пациента, у которого диагностирован проксимальный 4p– синдром (19–20). Эта клинически отчетливая аномалия вызвана интерстициальной делецией проксимального короткого плеча хромосомы 4. Цитогенетический анализ этого пациента выявил интерстициальную делецию с участием полосы 4p14–4p16.1 (20). Молекулярная характеристика клеточной линии, полученной от этого пациента, определила, что дистальная точка разрыва находится в пределах D4S166 (21). Поскольку у этого пациента нет «типичных» аномалий, связанных с WHS (20), можно исключить область от D4S132 до D4S166 из WHSCR. Следовательно, в то время как критическая область, основанная только на пациентах WHS, составляет 260 т.п.н., включение этого пациента с 4p-синдромом уменьшает критическую область до 165 т.п.н. Интересно отметить, что не было идентифицировано клонов кДНК в этой области, ограниченной D4S132 и D4S166 (рис.2). Кроме того, только один из кластеров потенциальных экзонов GRAIL отображается в область (рис. 3a).

В настоящее время три различных клинически определенных состояния связаны с потерей части короткого плеча хромосомы 4. В то время как 4p-синдром (20–22) отличается от WHS, синдром Питта-Роджерса-Дэнкса (PRD) ) отображает ряд функций, аналогичных WHS, но, как правило, менее серьезен (23). Недавно было продемонстрировано, что PRD связана с потерей материала из дистального 4p (24).Интересно, что, по-видимому, существует значительное перекрытие в геномных сегментах, отсутствующих при этих нарушениях, что делает вероятным то, что ряд одних и тех же генов вносят вклад в эти фенотипы. Попытки идентифицировать гены, связанные с синдромом смежных генов, во многом зависят от нашей способности определить минимальную критическую область для поиска. Этим усилиям часто мешает вариабельная экспрессия фенотипа. В этой статье мы сообщаем о молекулярной характеристике одного пациента с относительно небольшой терминальной делецией, который имеет характерные черты WHS.Кроме того, мы расширили молекулярный анализ трех пациентов, у которых ранее было установлено, что у них есть WHS. У всех этих пациентов имеется частично удаленная хромосома 4, характерно дисморфическое лицо и некоторая задержка в развитии. У этих пациентов небольшая область генома перекрывается с ранее описанным 4p-синдромом.

Недавняя попытка создать фенотипическую карту 4p16 на основе характеристики пациентов с делециями 4p (25), безусловно, поможет нашему поиску функции генов, идентифицированных в этом исследовании.Хотя характеристика наших пациентов не полностью согласуется с наблюдениями Эстабрукса (например, пациент, представленный клеточной линией MS2505, имеет гипоспадию, но не удален для сегмента от D4S10 до D4S127 ), возникает соблазн связать клоны кДНК с фенотипическими компонентами этого заболевания. В этом отношении интересным кандидатом на врожденный порок сердца, ассоциированный с WHS, является клон 44997 кДНК. Этот клон идентифицировал шесть независимых клонов в базе данных dbEST, которые могут представлять собой единое сообщение, созданное из библиотеки кДНК, специфичной для аорты.Аналогичные фенотипические ассоциации могут быть сделаны для ряда других кДНК, но более целесообразным будет поиск гистологического распределения РНК, соответствующей этим кДНК, в тканях человека и мыши в качестве начала для понимания их биологической функции.

Как гены, идентифицированные в этом исследовании, вносят вклад в фенотип WHS и его вариабельность, еще предстоит определить. Фенотип и плейотропия, связанные с этим синдромом, могут быть результатом снижения дозы гена, выявления вредоносных аллелей, аллельной вариации в оставшейся копии гена или комбинации этих механизмов.Кроме того, может быть задействован единственный ген, который служит «главным» регулятором и влияет на экспрессию ряда других генов как в 4p, так и / или в других местах генома. Также возможно, что делеция определенного сегмента генома или изменение положения теломеры изменяет локальную структуру хромосомы таким образом, что влияет на экспрессию генов в непосредственной близости от хромосомной аберрации. Исследования по решению этих проблем продолжаются.

Таким образом, в этой статье представлены данные, указывающие на то, что WHSCR содержится в геномном сегменте размером 165 т.п.н.Всего девять независимых клонов кДНК были идентифицированы из 42 совпадений, полученных во время анализа последовательности WHSCR. Кроме того, с помощью анализа геномных последовательностей GRAIL было предсказано несколько других потенциальных кодирующих последовательностей. Все эти кодирующие последовательности являются кандидатами на аномалии, связанные с WHS, потому что они попадают в WHSCR и удалены у всех пациентов с этим синдромом, которые до сих пор изучены. Эта карта транскрипции обеспечивает отправную точку для анализа биологических функций, которые вносят вклад в фенотип WHS.

Материалы и методы

Клеточные линии

Клеточная линия

CM была получена от пациента WHS, подробно описанного ранее (12). У нее была микроцефалия, широкий лоб с выступающей глабелью, широкий нос с выступающей переносицей и короткий желобок. Развитие было отложено, и через 1 год у нее развились судорожные припадки. Предыдущий анализ показал, что у нее была терминальная делеция 4p16.3 с точкой останова между D4S43 и D4S166 .

Клеточная линия HHW1839 была получена от ранее описанного пациента WHS (26). Он был описан как имеющий «вид греческого шлема» с гипертелоризмом, наклонным вниз к глазным щелям, микрогнатией и высоким сводчатым нёбом. Развитие было отложено, и через 18 месяцев он был госпитализирован для снятия приступов.

Клеточная линия LGL7447 была получена от ранее описанного пациента WHS (27). У нее было треугольное лицо, широкий и выступающий лоб, гипертелоризм, антимонголоидный раскос глаз, высокая переносица с широким носом и короткий желобок.У нее была задержка роста и умеренная задержка развития. Исследования прометафазы показали делецию между 4p15.32 и 4p16.3. FISH-анализ показал, что у этого пациента локусы D4F26 и D4S96 были интактными.

Клеточная линия MS2505 была получена от 3-летнего мужчины с WHS. У него был низкий рост, микроцефалия, легкая форма «греческого шлема», приступы, начинавшиеся в возрасте 1 года, гипоспадия и общая задержка.

ДНК-зонды

Серия ранее выбранных знаковых космидов из 4p16.3 были использованы для FISH (13). Космиды L228a7 ( D4S81 ), L21f12 ( D4S180 ), L247f6 ( D4S182 ) и 33c6 ( D4S43 ), охватывающие опубликованный контиг, были получены из исходной библиотеки с сортировкой по потоку, распределенной по хромосоме 4 (11,28). Кроме того, были получены пять других космид, которые обеспечивают ориентиры для остатка 4pter: pC385.12 (содержащий ген FGFR3 ; 13), pC678 ( D4S96 ; 2), CD2 ( D4S90 ; 21) и pC847. .351 ( D4F26 ; 29).Космида, содержащая ген MSX1 , pWEHx712, была наиболее проксимальным использованным маркером (30). После анализа FISH с космидами-ориентирами был проведен дополнительный раунд анализа с использованием серии перекрывающихся картирований клонов между космидами-ориентирами (11).

Когда были доступны STS для определенного локуса, космидные ДНК были проверены с помощью ПЦР-амплификации (31).

Флуоресцентный

in situ гибридизация (FISH)

FISH выполняли, как описано (32).Биотинилированную клоновую ДНК (0,2 мкг) смешивали с ДНК фракции Cot-1 человека для подавления повторяющихся последовательностей или блокирования неспецифической гибридизации. Гибридизацию выявляли с использованием последовательных циклов флуоресцеина (FITC) авидина D и биотинилированного козьего антиавидина D (Vector Laboratories, Burlingame, CA).

Анализ последовательности WHSCR

Космиды из 2-мегабайтного контига 4p16.3 (11) секвенированы Центром Сэнгера, Великобритания. WHSCR теперь полностью попадает в эту секвенированную область.Последовательности космид сравнивали с базами данных GenBank (33), GenPept, PIR (34), SWISS-PROT (35), dbEST (база данных для «экспрессируемых тегов последовательностей») (36) и REPEAT с BLAST (37–38) и Fasta (39) на локальных серверах анализа последовательностей. Эти результаты поиска были интегрированы вместе с программой LANL Sequence Comparison ANalysis (SCAN) (18). Программа SCAN свела результаты анализа BLAST к сводному отчету. Сходство последовательностей с повторяющимися последовательностями было указано по наилучшей идентичности для запрашиваемой последовательности.Чтобы улучшить обнаружение кодирующих и повторяющихся последовательностей, SCAN проанализировал доступную аннотацию для последовательностей GenBank и SWISS-PROT. Результаты сканирования были проанализированы на основе сводного текстового отчета и сводного отчета в формате WWW HTML.

GRAIL анализ WHSCR

WHSCR анализировали с помощью XGRAIL (40) версии 1.3c для выявления потенциальных экзонов. Последовательности выравнивали с помощью программы GCG LineUp (41). Два разрыва в последовательности внутри космиды 174g8 были представлены предсказанными размерами разрыва в выравнивании.Эти промежутки были преобразованы в области поли (C) с помощью XGRAIL, чтобы исключить предсказания экзонов внутри промежутков.

Анализ кДНК

кДНК, идентифицированных с помощью SCAN, были получены либо из IMAGE (42), либо из TIGR (43). Клоны выращивали в селективных условиях, и ДНК экстрагировали с использованием набора для подготовки миди Qiagen. Размер клонов кДНК определяли путем двойного переваривания клона для выделения вставки. Клоны были локализованы путем мечения линеаризованных кДНК с использованием ECL (Amersham) и гибридизации с расщеплением Eco RI этих космид из WHSCR.

кДНК из IMAGE секвенировали как с 3 ', так и с 5' концов клона. кДНК из TIGR были секвенированы с одного конца. Последовательность этих клонов была локализована в WHSCR с помощью BLAST (37–38).

Благодарности

Финансирование этого проекта было предоставлено Министерством энергетики США по контракту № W-7405-ENG-36 (DR, MRA), Фондом научных исследований и разработок Национальной лаборатории Лос-Аламоса (TW, KD, SA, MRA) и грант от The Lehman Brothers Foundation (KH).Мы благодарим доктора Нормана Доггетта за его ценные комментарии во время подготовки рукописи. Мы хотим поблагодарить доктора Джона Дж. Васмута за его поддержку, критические комментарии и энтузиазм на начальных этапах этого проекта. Авторы благодарны Ирине Гершин, Лизе Гибсон и Нэнси Оуэнс за выдающуюся техническую помощь.

Список литературы

1

Лурье

И. З.

,

Лазюк

Г. И.

,

Усова

Ю.И.

,

Пресман

Е. Б.

,

Гуревич

Д. Б.

.

Синдром Вольфа-Хиршхорна

,

Clin. Genet

,

1980

, т.

17

(стр.

375

-

384

) 2

Smith

B.

,

Skarecky

D.

,

Bengtsson

U.

,

Magenis

RE

,

Carpenter

N.

,

Wasmuth

JJ

.

Выделение ДНК-маркеров в направлении гена болезни Гентингтона из локуса G8

,

Am. J. Hum. Genet.

,

1988

, т.

42

(стр.

335

-

344

) 3

Wilson

MG

,

Towner

JW

,

Гроб

GS

,

Ebbin

AJ

,

Siris

,

Brager

P.

.

Генетические и клинические исследования у 13 пациентов с синдромом Вольфа-Хиршхорна [del (4p)]

,

Hum.Genet.

,

1981

, т.

59

(стр.

297

-

307

) 4

Hirschhorn

K.

,

Cooper

H. L.

,

Firschein

I. L.

.

Делеция коротких плеч хромосомы 4–5 у ребенка с дефектами слияния средней линии

,

Humangenetik

,

1965

, vol.

1

(стр.

479

-

482

) 5

Wolf

U.

,

Reinwein

H.

,

Porsch

R.

,

Schroter

R.

,

Baitsch

H.

.

Defizienz an den kurzen Armen eines Chromosoms nr. 4

,

Humangenetik

,

1965

, т.

1

(стр.

397

-

413

) 6

Altherr

M. R.

,

Bengtssson

U.

,

Elder

F. F. B.

,

Ledbetter

D. Was H. 900muth

04 D. Was H. 900muth,

D. Was H.J.

,

McDonald

M. E.

,

Gusella

J. F.

,

Greenberg

F.

.

Молекулярное подтверждение синдрома Вольфа-Хиршхорна с тонкой транслокацией хромосомы 4

,

Am. J. Hum. Genet.

,

1991

, т.

49

(стр.

1235

-

1242

) 7

Johnson

W. P.

,

Altherr

M. R.

,

Blake

J. M.

,

Keppen

L.Д.

.

FISH-обнаружение синдрома Вольфа-Хиршхорна: исключение D4F26 как критического участка

,

Am. J. Med. Genet.

,

1994

, т.

52

(стр.

70

-

74

) 8

Рулстон

D.

,

Altherr

M.

,

Wasmuth

JJ

,

Christian

C.

,

Graham

J.

,

Schreck

RR

.

Подтверждение предполагаемой делеции 4p16 флуоресцентной гибридизацией in situ (FISH) с космидным зондом

,

Am.J. Hum. Genet.

,

1991

, т.

49

стр.

274

9

Zuo

J.

,

Robbins

C.

,

Baharloo

S.

,

Cox

D. R.

,

Myers

R. M.

.

Конструирование космидных контигов и рестрикционное картирование с высоким разрешением области болезни Хантингтона на хромосоме 4

,

Hum. Мол. Genet.

,

1993

, т.

2

(стр.

889

-

899

) 10

Бейтс

G.P.

,

MacDonald

ME

,

Baxendale

S.

,

Youngman

S.

,

Lin

C.

,

Whaley

WL

,

Wasmuth

004 JJ

,

Wasmuth

004 JJ

,

Gusella

JF

,

Lehrach

H.

.

Определенные физические пределы области кандидата гена болезни Хантингтона

,

Am. J. Hum. Genet.

,

1991

, т.

49

(стр.

7

-

16

) 11

Baxendale

S.

,

MacDonald

ME

,

Mott

R.

,

Francis

F.

,

Lin

C.

,

Kirby

SF

,

James

M.

,

Zehetner

G.

,

Hummerich

H.

,

Valdes

J.

,

Collins

FS

,

Deaven

L.J.

,

Gusella

J. F.

,

Lehrach

H.

,

Bates

G. P.

.

Космидный контиг и рестрикционная карта с высоким разрешением области 2 мегабазы, содержащей ген болезни Хантингтона

,

Nature Genet.

,

1993

, т.

4

(стр.

181

-

186

) 12

Гандельман

К.-Ю.

,

Gibson

L.

,

Meyn

M. S.

,

Yang-Feng

T.Л.

.

Молекулярное определение наименьшего участка перекрытия делеций при синдроме Вольфа-Хиршхорна

,

Am. J. Hum. Genet.

,

1992

, т.

51

(стр.

571

-

578

) 13

Altherr

MR

,

Wright

TJ

,

Denison

K.

,

Perez-Castro

AV

,

Johnson

VP

.

Ограничение критической области синдрома Вольфа-Хиршхорна до 750 пар оснований.

,

Am. J. Med. Genet

,

1997

14

Gilliam

TC

,

Bucan

M.

,

MacDonald

ME

,

Zimmer

M.

,

Haines

JL

,

Cheng

Cheng

,

Pohl

TM

,

Meyers

RH

,

Whaley

WL

,

Allitto

BA

,

Farynlarz

A.

,

Wasmuth

J. J.

,

Frischauf

A.-M.

,

Conneally

P. M.

,

Lehrach

H.

,

Gusella

J. F.

.

Сегмент ДНК, кодирующий два гена, очень тесно связанных с болезнью Хантингтона

,

Science

,

1987

, vol.

238

(стр.

950

-

952

) 15

Джон

Р. М.

,

Роббинс

К. А.

,

Майерс

Р.М.

.

Идентификация генов внутри CpG-обогащенной ДНК из хромосомы 4p16.3 человека

,

Hum. Мол. Genet.

,

1994

, т.

3

(стр.

1611

-

1616

) 16

Rommens

JM

,

Lin

B.

,

Hutchinson

GB

,

Andrew

SE

,

Goldberg

YP ,

Glaves

ML

,

Graham

R.

,

Lai

V.

,

McArthur

J.

,

Nasir

J.

,

Theilman

J.

,

McDonald

H.

,

Kalchman

M.

,

Clarke

LA

,

Schappert

K.

,

Hayden

MR

.

Карта транскрипции области, содержащей ген болезни Хантингтона

,

Hum. Мол. Genet.

,

1993

, т.

2

(стр.

910

907

) 17

Snell

RG

,

Doucette-Stamm

KA

,

Gillespie

KM

,

Taylor

14 SAM Liba

a,

,

Bates

GP

,

Altherr

MR

,

MacDonald

ME

,

Gusella

JF

,

Wasmuth

JJ

,

Lehrach

H.

,

Dousman

D. E.

,

Harper

P. S.

,

Shaw

D. J.

.

Выделение кДНК в области болезни Хантингтона путем гибридизации искусственных хромосом дрожжей с библиотекой кДНК

,

Hum. Мол. Genet.

,

1993

, т.

2

(стр.

305

-

309

) 18

Ricke

D. O.

,

Mundt

M.O.

,

Букингем

Дж.M.

,

Deaven

L. L.

,

Moyzis

R. K.

.

Отбор образцов последовательности всего генома и анализ генов и аннотация мегабаз низко избыточной хромосомы человека 16p13 SAmple Сравнительный анализ секвенирования (SCAN)

,

Microb. Сравните. Геномика

,

1996

, т.

1

стр.

264

19

Magenis

R. E.

,

Gusella

J.

,

Weliky

K.

,

Olson

S.

,

Haight

G.

,

Toth-Fejel

S. E.

,

Sheehy

R.

.

Полиморфизм длины рестрикционного фрагмента, связанный с болезнью Хантингтона, локализованный внутри полосы p16.1 хромосомы 4 посредством in situ гибридизации

,

Am. J. Hum. Genet.

,

1986

, т.

39

(стр.

383

-

391

) 20

Белый

D. M.

,

Pillers

D.-A. M.

,

Reiss

J.A.

,

Коричневый

M. G.

,

Magenis

R. E.

.

Интерстициальные делеции короткого плеча хромосомы 4 у пациентов с аналогичным сочетанием множественных незначительных аномалий и умственной отсталости

,

Am. J. Med. Genet.

,

1995

, т.

57

(стр.

588

-

597

) 21

Whaley

W. L.

,

Bates

G. P.

,

Novelletto

A.

,

Sedlacek

Z.

,

Cheng

S.

,

Romano

D.

,

Ormondroyd

E.

,

Allitto

B.

,

Lin

C.

,

Youngman

S.

,

Baxendale

S.

,

Bucan

M.

,

Altherr

M.

,

Wasmuth

J.

,

Wexler

NS

,

Frontali

M.

,
14 Frischauf

А.-M.

,

Lehrach

H.

,

MacDonald

M. E.

,

Gusella

J. F.

.

Картирование космидных клонов в области болезни Хантингтона на хромосоме 4

,

сом. Cell Mol. Genet.

,

1991

, т.

17

(стр.

83

-

91

) 22

Francke

U.

,

Arias

D. E.

,

Nyhan

W. L.

.

Проксимальная 4p-делеция: фенотип отличается от классического 4p-синдрома

,

J.Педиат.

,

1977

, т.

90

(стр.

250

-

252

) 23

Питт

Д.

,

Роджерс

Дж. Г.

,

Дэнкс

.

Умственная отсталость, необычное лицо и задержка внутриутробного развития

,

Am. J. Med. Genet.

,

1984

, т.

19

(стр.

307

-

313

) 24

Clemens

M.

,

W

M.E.

,

Surt

U.

.

Микроделеция 4p у ребенка с синдромом Питта-Роджерса-Дэнкса

,

Am. J. Hum. Genet.

,

1995

, т.

57

стр.

A85

25

Estabrooks

LL

,

Rao

кВт

,

Driscoll

DA

,

Crandall

BF

,

Dean

JCS

,

Ikonen

,

Ikonen

Б.

,

Эйлсворт

А.С.

.

Предварительная фенотипическая карта хромосомы 4p16 на основе делеций 4p

,

Am. J. Med. Genet.

,

1995

, т.

57

(стр.

581

-

586

) 26

Zackai

EH

,

McDonald-McGinn

DM

,

Spinner

N.

,

Altherr

MR

,

Bengt U.

,

Wasmuth

JJ

.

Классический синдром Вольфа-Хиршхорна подтвержден молекулярно, несмотря на нормальные результаты с использованием коммерчески доступных зондов: новое определение критической области

,

Am.J. Hum. Genet.

,

1994

, т.

55

стр.

A11

27

Somer

M.

,

Peippo

M.

,

Keinanen

M.

.

Спорные результаты у двух пациентов с коммерчески доступным датчиком D4S96 для синдрома Вольфа-Хиршхорна

,

Am. J. Hum. Genet.

,

1995

, т.

57

стр.

A127

28

Riess

O.

,

Siedlaczck

I.

,

Kredtke

S.

,

Melmer

G.

,

Epplen

J. T.

,

Deaven

L. L.

.

Характеристика библиотеки космид с сортировкой по хромосоме 4 человека

,

Cytogenet. Cell Genet.

,

1994

, т.

65

(стр.

238

-

242

) 29

Altherr

M. R.

,

Smith

B.

,

MacDonald

M. E.

,

Hall

L.

,

Васмут

Дж. Дж.

.

Выделение новой слегка повторяющейся последовательности ДНК, которая преимущественно расположена на конце короткого плеча хромосомы 4 рядом с геном болезни Хантингтона.

,

Genomics

,

1989

, vol.

5

(стр.

581

-

588

) 30

Hewitt

J. E.

,

Clark

L. N.

,

Ivens

A.

,

Williamson

R.

.

Структура и последовательность гена гомеобокса человека HOX-7

,

Genomics

,

1991

, vol.

11

(стр.

670

-

678

) 31

Gusella

JF

,

Altherr

MR

,

McClatchey

AI

,

Doucette-Stamm

LA

,

LA

,

,

Plummer

S.

,

Groot

N.

,

Barnes

G.

,

Hummerich

H.

,

Collins

FS

,

Housman

DE

,

Lehrach

H.

,

MacDonald

ME

,

Bates

G.

,
14 Wasm

JJ

.

Сайты, меченные последовательностями (STS), охватывающие 4p16.3 и область-кандидат болезни Хантингтона

,

Genomics

,

1992

, vol.

13

(стр.

75

-

80

) 32

Lichter

P.

,

Чанг

C.-J.

,

Звоните

K.

,

Hermanson

G.

,

Evans

G. A.

,

Housman

D.

,

Ward

D. C.

.

Картирование с высоким разрешением хромосомы человека 11 с помощью in situ гибридизация с космидными клонами

,

Science

,

1990

, vol.

247

(стр.

64

-

69

) 33

Бенсон

D.A.

,

Boguski

M.

,

Lipman

D. J.

,

Ostell

J.

.

GenBank

,

Nucleic Acids Res

,

1996

, т.

24

(стр.

1

-

5

) 34

Джордж

DG

,

Баркер

WC

,

Mewes

HW

,

Pfeiffer

F.

,

Цугита

Цугита

.

Международная база данных белковых последовательностей PIR

,

Nucleic Acids Res.

,

1996

, т.

24

(стр.

17

-

20

) 35

Байрох

A.

,

Apweiler

R.

.

Банк данных о последовательности белков SWISS-PROT и его новая добавка TREMBL

,

Nucleic Acids Res.

,

1996

, т.

24

(стр.

21

-

25

) 36

Богуски

М. С.

,

Лоу

Т. М.

,

Толстошев

К. М.

.

dbEST - база данных «тегов выраженной последовательности» [буква]

,

Nature Genet.

,

1993

, т.

4

(стр.

332

-

3

) 37

Altschul

SF

,

Gish

W.

,

Miller

W.

,

Myers

EW

,

Lipman

DJ

.

Базовый инструмент локального поиска совмещения

,

J. Mol. Биол.

,

1990

, т.

215

(стр.

403

-

410

) 38

Gish

W.

,

States

D. J.

.

Идентификация кодирующих областей белков с помощью поиска сходства в базе данных

,

Nature Genet.

,

1993

, т.

3

(стр.

266

-

272

) 39

Lipman

D. J.

,

Pearson

W. R.

.

Быстрый и точный поиск сходства белков

,

Science

,

1985

, vol.

227

(стр.

1435

-

1441

) 40

Uberbacher

E.C.

,

Mural

R.J.

.

Обнаружение кодирующих белок участков в последовательностях ДНК человека с помощью подхода с множеством сенсорно-нейронных сетей

,

Proc. Natl. Акад. Sci. США

,

1991

, т.

88

(стр.

11261

-

11265

) 41

Devereux

J.

,

Haeberli

P.

,

Smithies

O.

.

Полный набор программ анализа последовательностей для VAX

,

Nucleic Acids Res.

,

1984

, т.

12

(стр.

387

-

395

) 42

Auffray

C.

,

Behar

G.

,

Bois

F.

,

Bouchier

C.

,

Dasilva

C.

,

Devignes

M.

,

Duprat

S.

,

Houlgatte

R.

,

Jumeau

M.

,

Lamy

B.

,

Lorenzo

F.

,

Mitchell

H.

,

Mariagesamson

R.

,

Pietu

G.

,

Pouliot

Y.

,

Sebastianikabaktchis

C.

,

Tessier

A.

.

IMAGE: Комплексный молекулярный анализ генома человека и его экспрессии

,

C.R. Acad. Sci. III

,

1995

, т.

318

(стр.

263

-

272

) 43

Адамс

MD

,

Дубник

М.

,

Kerlavage

AR

,

Морено

Р.

,

Келли

Келли

,

Utterback

TR

,

Nagle

JW

,

Fields

C.

,

Venter

JC

.

Идентификация последовательностей 2375 генов головного мозга человека

,

Nature

,

1992

, т.

355

(стр.

632

-

634

) 44

Миллс

KA

,

Buetow

KH

,

Xu

Y.

,

Ritty

TM

,
14 Mathews ,

Bodrug

SE

,

Wijmenga

C.

,

Balazs

I.

,

Murray

JC

.

Генетическое и физическое картирование хромосомы 4 сужает локализацию гена фасциоскапуломеральной мышечной дистрофии (FSHD)

,

Am.J. Hum. Genet.

,

1992

, т.

51

(стр.

432

-

439

)

© 1997 Oxford University Press

(PDF) Карта стенограммы недавно определенной критической области для синдрома Вольфа-Хиршхорна размером 165 kb

323

Nucleic Acids Research, 1994, Vol. 22, No. 1

Human Molecular Genetics, 1997, Vol. 6, No. 2 323

Программа GCG LineUp (41). Два разрыва в последовательности в космиде

174g8 были представлены предсказанными размерами разрыва в выравнивании

.Эти промежутки были преобразованы в области поли (C) с помощью

XGRAIL, чтобы исключить предсказания экзонов в промежутках.

кДНК анализ

кДНК, идентифицированных с помощью SCAN, были получены либо из

IMAGE (42), либо из TIGR (43). Клоны выращивали в селективных условиях

, и ДНК экстрагировали с использованием набора Qiagen midi prepare

. Размер клонов кДНК определяли путем двойного переваривания клона до

, чтобы выделить вставку. Клоны были локализованы путем мечения линеаризованных кДНК

с использованием ECL (Amersham) и гибридизации с расщеплением EcoRI

этих космид из WHSCR.КДНК

из IMAGE секвенировали как с 3 ',

, так и с 5'-концов клона. кДНК из TIGR были секвенированы

с одного конца. Последовательность этих клонов была локализована в пределах

WHSCR с помощью BLAST (37–38).

БЛАГОДАРНОСТИ

Финансирование этого проекта было предоставлено Министерством энергетики США

по контракту № W-7405-ENG-36 (DR, MRA), Лос

Аламосская национальная лаборатория направила исследования и разработки -

. Fund (TW, KD, SA, MRA) и грант от Lehman

Brothers Foundation (KH).Мы благодарим доктора Нормана Доггетта за его ценные комментарии

во время подготовки рукописи. Мы,

, хотим поблагодарить доктора Джона Дж. Васмута за его поддержку, критические комментарии

и энтузиазм на начальных этапах этого проекта.

Авторы благодарны Ирине Гершин, Лизе Гибсон и Нэнси

Оуэнс за выдающуюся техническую помощь.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Лурье, И.В., Лазюк, Г.И., Усова, Ю.И., Пресман, Э.и Гуревич Д. Б.

(1980) Синдром Вольфа – Хиршхорна. Clin. Genet., 17, 375–384.

2. Smith, B., Skarecky, D., Bengtsson, U., Magenis, RE, Carpenter, N. и

Wasmuth, JJ (1988) Выделение ДНК-маркеров в направлении гена болезни Гентингтона

из локуса G8. Являюсь. J. Hum. Genet., 42,

335–344.

3. Wilson, MG, Towner, JW, Coffin, GS, Ebbin, AJ, Siris, E. and Brager,

P. (1981) Генетические и клинические исследования у 13 пациентов с синдромом Вольфа – Хиршхорна

[ del (4p)].Гм. Genet., 59, 297–307.

4. Хиршхорн, К., Купер, Х. Л. и Фиршейн, И. Л. (1965) Делеция коротких

плеч хромосомы 4–5 у ребенка с дефектами слияния средней линии.

Humangenetik, 1, 479–482.

5. Вольф, У., Рейнвейн, Х., Порш, Р., Шротер, Р. и Байтч, Х. (1965)

Defizienz an den kurzen Armen eines Chromosoms nr. 4. Humangenetik, 1,

397–413.

6. Altherr, M. R., Bengtssson, U., Elder, F. F. B., Ledbetter, D.H., Wasmuth, J. J.,

McDonald, M. E., Gusella, J. F. и Greenberg, F. (1991) Молекулярное

подтверждение синдрома Вольфа – Хиршхорна с тонкой транслокацией хромосомы

4. Am. J. Hum. Genet., 49, 1235–1242.

7. Джонсон, У. П., Алтерр, М. Р., Блейк, Дж. М. и Кеппен, Л. Д. (1994) FISH

Выявление синдрома Вольфа – Хиршхорна: исключение D4F26 как критического участка.

Am. J. Med. Genet., 52, 70–74.

8. Рулстон, Д., Алтерр, М., Wasmuth, J. J., Christian, C., Graham, J. и

Schreck, R. R. (1991) Подтверждение предполагаемой делеции 4p16 с помощью

флуоресцентной гибридизации in situ (FISH) с космидным зондом. Являюсь. J. Hum.

Genet., 49, 274.

9. Zuo, J., Robbins, C., Baharloo, S., Cox, DR and Myers, RM (1993)

Построение космидных контигов и рестрикционное картирование с высоким разрешением из

область болезни Хантингтона хромосомы 4. Hum. Мол. Genet., 2,

889–899.

10. Бейтс, Г.П., Макдональд, Мэн, Баксендейл, С., Янгман, С., Лин, К.,

Уэйли, У.Л., Васмут, Дж. Дж., Гуселла, Дж. Ф. и Лехрах, Х. (1991) Определение

физических пределов области-кандидата гена болезни Хантингтона. Являюсь. J. Hum.

Genet., 49, 7–16.

11. Baxendale, S., MacDonald, ME, Mott, R., Francis, F., Lin, C., Kirby, SF,

, James, M., Zehetner, G., Hummerich, H., Valdes , J., Collins, FS, Deaven, L.

J., Gusella, J. F., Lehrach, H. и Bates, G. P. (1993) Космидный контиг и рестрикционная карта с высоким разрешением

области 2 мегабаз, содержащей ген болезни Гентингтона

. Nature Genet., 4, 181–186.

12. Гандельман, К.-Й., Гибсон, Л., Мейн, М. С. и Янг-Фенг, Т. Л. (1992)

Молекулярное определение наименьшей области перекрытия делеций в синдроме Вольфа – Хиршхорна

. Являюсь. J. Hum. Genet., 51, 571–578.

13. Алтерр, М. Р., Райт, Т.Дж., Денисон, К., Перес-Кастро, А. В. и Джонсон, В.

P. (1997) Ограничение критической области синдрома Вольфа – Хиршхорна до 750

пар килобаз. Являюсь. J. Med. Genet., В печати.

14. Гиллиам, Т.С., Букан, М., Макдональд, М.Э., Циммер, М., Хейнс, Д.Л.,

Ченг, С.В., Пол, Т.М., Мейерс, Р.Х., Уэйли, В.Л., Аллитто, Б.А.,

Farynlarz, A., Wasmuth, JJ, Frischauf, A.-M., Conneally, PM, Lehrach, H.

и Gusella, JF (1987) Сегмент ДНК, кодирующий два гена, очень тесно связанных с болезнью Хантингтона

.Science, 238, 950–952.

15. Джон Р. М., Роббинс К. А. и Майерс Р. М. (1994) Идентификация генов

внутри CpG-обогащенной ДНК из хромосомы 4p16.3 человека. Гм. Мол.

Genet., 3, 1611–1616.

16. Ромменс, Дж. М., Лин, Б., Хатчинсон, Дж. Б., Эндрю, С. Е., Голдберг, Ю. П.,

Глэйвс, М. Л., Грэм, Р., Лай, В., МакАртур, Дж., Насир, Дж. , Theilman, J.,

McDonald, H., Kalchman, M., Clarke, LA, Schappert, K. and Hayden, M.,

R.(1993) Карта транскрипции области, содержащей ген болезни Хантингтона

. Гм. Мол. Genet., 2, 910–907.

17. Snell, RG, Doucette-Stamm, KA, Gillespie, KM, Taylor, SAM, Riba,

L., Bates, GP, Altherr, MR, MacDonald, ME, Gusella, JF, Wasmuth, J.

J., Lehrach, H., Dousman, DE, Harper, PS и Shaw, DJ (1993) Выделение

кДНК в области болезни Хантингтона путем гибридизации

искусственных хромосом дрожжей с библиотекой кДНК.Гм. Мол. Genet., 2,

305–309.

18. Ricke, DO, Mundt, MO, Buckingham, JM, Deaven, LL и Moyzis, R.

K. (1996) Выборка последовательности всего генома и анализ генов и аннотация

мегабаз хромосомы 16p13 человека с низкой избыточностью

Сравнительный анализ секвенирования SAmple (SCAN). Microb. Сравните.

Genomics, 1, 264.

19. Магенис, Р. Э., Гуселла, Дж., Велики, К., Олсон, С., Хейт, Г., Тот-Фейел, С. Е.

и Шихи, Р.(1986) Связанный с болезнью Хантингтона рестрикционный фрагмент длиной

, полиморфизм локализован в полосе p16.1 хромосомы 4 путем гибридизации in situ

. Являюсь. J. Hum. Genet., 39, 383–391.

20. Уайт Д. М., Пиллерс Д.-А. М., Рейсс, Дж. А., Браун, М. Г. и Магенис, Р. Е.

(1995) Интерстициальные делеции короткого плеча хромосомы 4 у пациентов с

, аналогичным сочетанием множественных незначительных аномалий и умственной отсталости.

Am. J. Med.Genet., 57, 588–597.

21. Whaley, WL, Bates, GP, Novelletto, A., Sedlacek, Z., Cheng, S., Romano,

D., Ormondroyd, E., Allitto, B., Lin, C., Youngman , S., Baxendale, S., Bucan,

M., Altherr, M., Wasmuth, J., Wexler, NS, Frontali, M., Frischauf, A.-M.,

Lehrach, H., MacDonald, ME и Gusella, JF (1991) Картирование клонов космиды

в области болезни Хантингтона на хромосоме 4. Сом. Cell Mol.

Genet., 17, 83–91.

22.Francke, U., Arias, D. E. и Nyhan, W. L. (1977) Проксимальная делеция 4p:

Фенотип отличается от классического 4p-синдрома. J. Pediat., 90, 250–252.

23. Питт Д., Роджерс Дж. Г. и Дэнкс (1984) Умственная отсталость, необычное лицо и

задержка внутриутробного развития. Являюсь. J. Med. Genet., 19, 307–313.

24. Клеменс М., У., М. Э. и Сурт, У. (1995) 4p микроделеция у ребенка с синдромом Питта – Роджерса – Дэнкса

. Являюсь. J. Hum. Genet., 57, А85.

25.Estabrooks, LL, Rao, KW, Driscoll, DA, Crandall, BF, Dean, JCS,

Ikonen, E., Korf, B. и Aylsworth, AS (1995) Предварительная фенотипическая карта

хромосомы 4p16 на основе делеций 4p . Являюсь. J. Med. Genet., 57, 581–586.

26. Zackai, EH, McDonald-McGinn, DM, Spinner, N., Altherr, MR,

Bengtsson, U. и Wasmuth, JJ (1994) Классический синдром Вольфа – Хиршхорна

подтвержден молекулярно, несмотря на нормальные результаты при коммерческом использовании

доступных зонда: новое определение критической области.Являюсь. J. Hum. Genet., 55, А11.

27. Somer, M., Peippo, M. и Keinanen, M. (1995) Противоречивые результаты исследования

двух пациентов с коммерчески доступным датчиком D4S96 для синдрома Рога Вольфа – Хирша-

. Являюсь. J. Hum. Genet., 57, А127.

28. Рисс, О., Зидлачк, И., Кредтке, С., Мелмер, Г., Эпплен, Дж. Т. и Дивен, Л.

L. (1994) Характеристика космиды

с сортировкой по хромосоме 4 человека Библиотека

. Cytogenet. Cell Genet., 65, 238–242.

Беррихилл крупно выигрывает в региональном финале

Столкнувшись с хозяином Моргантауна, Западная Вирджиния, в игре чемпионата региона Великих озер в воскресенье, Беррихилл быстро вырвался вперед в шесть раундов, а затем постепенно оторвался на 10 очков. -1 победа, чтобы пробить свой билет на девятую путевку в Мировую серию и первую с момента выхода на национальный турнир подряд в 2017 и 2018 годах.

Пост 165 (30-3) начнет игру Мировой серии в Шелби, Северная Каролина, в четверг в 16:00.м. против чемпиона Северо-Западного региона.

«Это фантастика. Тренеры были там (на Мировой серии) раньше, но только один из наших игроков (Дерек Беугер) был в команде, которая уехала в 2018», - сказал менеджер Berryhill Дэн Кронкрайт. «У нас много новых парней и много новых семей, которые будут брать отпуск, чтобы добраться туда. Это будет особенный опыт, действительно будет.

«Это то, над чем они работали все лето.Летом они становились все лучше и лучше, и они этого заслуживают », - добавил он.

В воскресенье, в игре, которая была отложена более чем на четыре часа из-за дождя в первом иннинге, Беррихилл вырвался вперед со счетом 3: 0 и стал лидером первого тайма. После того, как Логан Маккой и Эвайн Ривера сыграли вничью, Эл Уорнер удвоился и вышел на левый фланг, а за ним Маккой, а Трент Джонсон последовал за ним, сделав двойной дубль в центр поля.

Подача позже, Брейлен Лаверти был поражен подачей, Нолан Сандерс достиг сингла с головкой, а Эл Мани поехал в Лаверти с синглом RBI для лидерства 4-0.Затем Маккой удвоился до левого поля, вернув домой еще двух бегунов и сделав счет 6: 0.

Кронкрайт сказал, что длительная задержка не повлияла отрицательно на его команду.

«Я думаю, что большая разница в том, что у нас было преимущество 3-0 (до задержки), поэтому было намного легче сидеть и ждать с преимуществом в три раунда, чем если бы мы проигрывали 3-0», - сказал он. отметил. «Мы вернулись в отель на некоторое время, затем вернулись и еще немного попрактиковались в ударе, и мы были готовы к работе.«

«Моргантаун» сократил счет до 6-1 в конце второго матча после двух подряд удвоений Аарона Форбса и Энтони Марша и жертвоприношения Джейкоба Спирена, но это все, что он мог получить против подачи Беррихилла.

Джонсон с шага вышел на вершину третьей, Броуди Кшисяк вышел из строя, а двумя аутами позже Мани выбрал Джонсона и вышел вперед со счетом 7: 1. Джонсон добавил сингл RBI в четвертом, Warner имел дубль RBI в шестом, а Натан Масар увеличил результативность в седьмом по счету попаданием, парой пропущенных мячей и вылетом.

«У нас была очень хорошая подача Макс (Кафлин), мы хорошо играли в защите, а в нападении мы бежали, бежали и бежали», - сказал Кронкрайт. «Мы бились и убегали, и мы крали базы. Это был очень агрессивный подход к нам сегодня в нападении».

Кафлин заработал победу, сделав шесть иннингов и позволив одну пробежку с тремя ударами и без прогулок.

Кронкрайт сказал, что его подача, которая была превосходной на протяжении всего постсезона, и его защита, которая превратила невероятные девять двойных игр в региональный, были большими ключами к чемпионату.

«У нас не так много силовых рук. У нас есть ловкость, питчеры, работающие с подачей в контакт, и мы собираемся избавиться от множества двойных игр, потому что мы не бросаем мяч. "Это не минус, это просто другой стиль подачи", - отметил он.

«... Я сказал очень рано (в сезоне), что защита будет сильной стороной этой команды, и это определенно было во время государственных и региональных турниров», - добавил он.«У нас действительно талантливая защитная команда».

Стартер Моргантауна Калеб Коттл принял поражение, отказавшись от девяти пробежек, восьми заработанных, на 13 попаданиях и четырех прогулках за 5 2/3 подач.

У Warner была огромная игра для Беррихилла: 3-к-4 с тремя дублями, два рана с битой и два забитых рана, в то время как Джонсон пошел 2-к-3 с ходьбой и тремя ИКР и забил один раз, у Денег было два. попаданий и два ИКР и забил один раз, и у Гриффина Кларка также было два попадания.

На вопрос, чего он больше всего ждет в поездке в Шелби на Мировую серию, Кронкрайт ответил: «Чтобы дети испытали, какая прекрасная, почти фестивальная атмосфера на стадионе. Для меня, эгоистично, я» мы бывали там много раз, и мы всегда останавливаемся в одной принимающей семье, так что я с нетерпением жду встречи с ними снова.

«Но что касается детей, я с нетерпением жду, когда они насладятся атмосферой», - добавил он. «У них есть концерты, красивая церемония открытия и турнир для игроков с денежными призами победителям и множество различных мероприятий.Будет очень весело ».

Произошла ошибка при настройке вашего пользовательского файла cookie

Произошла ошибка при настройке вашего пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

  • В вашем браузере отключены файлы cookie.Вам необходимо сбросить настройки вашего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
  • Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, используйте кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
  • Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
  • Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie.Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
  • Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу.Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файле cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта.Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Демографический статистический атлас Соединенных Штатов

Демографический статистический атлас Соединенных Штатов - Статистический атлас

Штаты:

Алабама, Аляска, Аризона, Арканзас, Калифорния, Колорадо, Коннектикут, Делавэр, Флорида, Джорджия, Гавайи, Айдахо, Иллинойс, Индиана, Айова, Канзас, Кентукки, Луизиана, Мэн, Мэриленд, Массачусетс, Мичиган, Миннесота, Миссисипи, Миссури, Монтана, Небраска, Невада, Нью-Гэмпшир, Нью-Джерси, Нью-Мексико, Нью-Йорк, Северная Каролина, Северная Дакота, Огайо, Оклахома, Орегон, Пенсильвания, Род-Айленд, Южная Каролина, Южная Дакота, Теннесси, Техас, Юта, Вермонт, Вирджиния , Вашингтон, Западная Вирджиния, Висконсин, Вайоминг

Основные округа:

Аламеда, Аллегейни, Бексар, Бронкс, Бровард, Кларк, Контра Коста, Кук, Кайахога, Даллас, Фэрфакс, Фэрфилд, Франклин, Фресно, Фултон, Харрис, Хеннепин, Хиллсборо, Гонолулу, Кинг, Кингз, Лос-Анджелес, Марикопа, Мекленбург, Майами-Дейд, Мидлсекс, Милуоки, Монтгомери, Нассау, Нью-Йорк, Окленд, Оранжевый, Апельсин, Палм-Бич, Филадельфия, Пима, Куинс, Риверсайд, Сакраменто, Солт-Лейк, Сан-Бернардино, Сан-Диего, Санта-Клара, Св.Луис, Саффолк, Таррант, Трэвис, Уэйк, Уэйн, Вестчестер

Основные города:

Альбукерке, Арлингтон, Атланта, Остин, Балтимор, Бостон, Шарлотта, Чикаго, Кливленд, Колорадо-Спрингс, Колумбус, Даллас, Денвер, Детройт, Эль-Пасо, Форт-Уэрт, Фресно, Хьюстон, Джексонвилл, Канзас-Сити, Лас-Вегас, Лонг-Бич, Лос-Анджелес, Мемфис, Меса, Майами, Милуоки, Миннеаполис, Нью-Йорк, Окленд, Оклахома-Сити, Омаха, Филадельфия, Финикс, Портленд, Роли, Сакраменто, Сан-Антонио, Сан-Диего, Сан-Франциско, Сан-Хосе, Сиэтл, Тусон, Талса , Вирджиния-Бич, Вашингтон, Уичито

Основные районы метро:

Район Атланты, Район Остина, Район Балтимора, Район Бирмингема, Район Бостона, Район Буффало, Район Шарлотт, Район Чикаго, Район Цинциннати, Район Кливленда, Район Колумбуса, Район Далласа, Район Денвера, Район Детройта, Район Хартфорда, Район Хьюстона, Район Индианаполиса , Район Джексонвилл, район Канзас-Сити, район Лас-Вегас, район Лос-Анджелеса, район Луисвилля, район Мемфис, район Майами, район Милуоки, район Миннеаполис, район Нэшвилл, район Нового Орлеана, район Нью-Йорка, район Оклахома-Сити, район Орландо, Филадельфия Район, район Феникс, район Питтсбург, район Портленд, район Провиденс, район Роли, район Ричмонд, район Риверсайд, район Сакраменто, район Солт-Лейк-Сити, район Сан-Антонио, район Сан-Диего, район Сан-Франциско, район Сан-Хосе, район Сиэтла, Санкт-ПетербургРайон Луи, Район Тампа, Район Вирджиния-Бич, Район Вашингтона

Демографический статистический атлас Соединенных Штатов

Демографический статистический атлас Соединенных Штатов - Статистический атлас

Штаты:

Алабама, Аляска, Аризона, Арканзас, Калифорния, Колорадо, Коннектикут, Делавэр, Флорида, Джорджия, Гавайи, Айдахо, Иллинойс, Индиана, Айова, Канзас, Кентукки, Луизиана, Мэн, Мэриленд, Массачусетс, Мичиган, Миннесота, Миссисипи, Миссури, Монтана, Небраска, Невада, Нью-Гэмпшир, Нью-Джерси, Нью-Мексико, Нью-Йорк, Северная Каролина, Северная Дакота, Огайо, Оклахома, Орегон, Пенсильвания, Род-Айленд, Южная Каролина, Южная Дакота, Теннесси, Техас, Юта, Вермонт, Вирджиния , Вашингтон, Западная Вирджиния, Висконсин, Вайоминг

Основные округа:

Аламеда, Аллегейни, Бексар, Бронкс, Бровард, Кларк, Контра Коста, Кук, Кайахога, Даллас, Фэрфакс, Фэрфилд, Франклин, Фресно, Фултон, Харрис, Хеннепин, Хиллсборо, Гонолулу, Кинг, Кингз, Лос-Анджелес, Марикопа, Мекленбург, Майами-Дейд, Мидлсекс, Милуоки, Монтгомери, Нассау, Нью-Йорк, Окленд, Оранжевый, Апельсин, Палм-Бич, Филадельфия, Пима, Куинс, Риверсайд, Сакраменто, Солт-Лейк, Сан-Бернардино, Сан-Диего, Санта-Клара, Св.Луис, Саффолк, Таррант, Трэвис, Уэйк, Уэйн, Вестчестер

Основные города:

Альбукерке, Арлингтон, Атланта, Остин, Балтимор, Бостон, Шарлотта, Чикаго, Кливленд, Колорадо-Спрингс, Колумбус, Даллас, Денвер, Детройт, Эль-Пасо, Форт-Уэрт, Фресно, Хьюстон, Джексонвилл, Канзас-Сити, Лас-Вегас, Лонг-Бич, Лос-Анджелес, Мемфис, Меса, Майами, Милуоки, Миннеаполис, Нью-Йорк, Окленд, Оклахома-Сити, Омаха, Филадельфия, Финикс, Портленд, Роли, Сакраменто, Сан-Антонио, Сан-Диего, Сан-Франциско, Сан-Хосе, Сиэтл, Тусон, Талса , Вирджиния-Бич, Вашингтон, Уичито

Основные районы метро:

Район Атланты, Район Остина, Район Балтимора, Район Бирмингема, Район Бостона, Район Буффало, Район Шарлотт, Район Чикаго, Район Цинциннати, Район Кливленда, Район Колумбуса, Район Далласа, Район Денвера, Район Детройта, Район Хартфорда, Район Хьюстона, Район Индианаполиса , Район Джексонвилл, район Канзас-Сити, район Лас-Вегас, район Лос-Анджелеса, район Луисвилля, район Мемфис, район Майами, район Милуоки, район Миннеаполис, район Нэшвилл, район Нового Орлеана, район Нью-Йорка, район Оклахома-Сити, район Орландо, Филадельфия Район, район Феникс, район Питтсбург, район Портленд, район Провиденс, район Роли, район Ричмонд, район Риверсайд, район Сакраменто, район Солт-Лейк-Сити, район Сан-Антонио, район Сан-Диего, район Сан-Франциско, район Сан-Хосе, район Сиэтла, Санкт-ПетербургРайон Луи, Район Тампа, Район Вирджиния-Бич, Район Вашингтона

Международные отношения США, 1958–1960, Восточно-Азиатско-Тихоокеанский регион; Камбоджа; Лаос, Том XVI

165. Письмо заместителя заместителя государственного секретаря по экономике Дела (Диллон) в Директор Центральной разведки (Даллес) 1

Вашингтон, 15 февраля г., 1958 г.

Уважаемый г-н Даллес! Как вам известно, 4 мая 1958 г. выборы в Лаосе имеют жизненно важное значение для Соединенных Штатов, поскольку впервые подконтрольный коммунистам Патет Лао будет оспаривать эти выборы в качестве законной политической партии с явным и общенациональным скрытый аппарат. Если Патет Лао выиграет значительное количество из 21 Под вопросом места в Национальном собрании, коммунисты были бы хорошо на путь к достижению их цели по захвату всей страны; если, с другой стороны, правительство преуспеет в подавляющем большинстве районов, коммунисты потерпят серьезную неудачу, от которой они потребуется много времени на восстановление.

Чтобы помочь консерваторам в этих выборах, мы полагаем [1 строка исходного текста не рассекречена], что мы следует предпринять чрезвычайную программу политического воздействия на уровне села проекты по повышению осведомленности жителей села о 1) Королевском Озабоченность правительства своими проблемами и 2) реальность американского помогать. Такая программа могла бы во многом противодействовать ожидаемому энергичному Коммунистическая кампания в деревнях и растущая критика того, что Американская помощь приносит пользу немногим в городах и не достигает сельских жителей. Население.

Примеры предусмотренных проектов: бурение скважин в засуху. территорий, снос простых дорог, соединяющих села, строительство школьные здания, ремонт пагод и добавление двух Операций Братские команды. Каждый проект будет рассматриваться с точки зрения его немедленные и ощутимые политические преимущества в конкретной ситуации, будет максимально использовать местные ресурсы и рабочую силу, и будет относительно недорогой.Хотя основной упор будет сделан на повышение шансов консерваторов на майских выборах, программа будет продолжаться в течение достаточного периода времени после выборов, чтобы обеспечить длительное благоприятное воздействие на общественное мнение.

[3 абзаца (29 строк исходного текста) и сноска (3 строк текста) не рассекречено]

С уважением,

.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *