B1 as: Что обозначает отметка AS или MS возле категории В1 в водительских правах

Содержание

Что значит пометка «AS» на обратной стороне водительских прав

На некоторых водительских удостоверениях можно встретить отметку AS. Истинное ее значение знают лишь немногие. Водители практически не принимают во внимание эту отметку. Сегодня, мы расскажем, что это за отметка и для чего она нужна.

Расшифровка

Сокращение AS пошло от английского словосочетания «automotive steering». Переводится оно как «великий и могучий», а означает – автомобильное управление.  Отметка AS предусматривает некоторые ограничения по отношению к водителю.

Владелец прав может водить машину только с круглым рулевым колесом. Транспортное средство также должно быть оборудовано водительским сиденьем со спинкой.

Теперь расскажем как это на практике. Допустим у вас нет категории А, но открыта В1. Вот вы захотели прокатиться на трицикле или квадроцикле. Но если они не оборудованы специальным сидением и не имеют круглого рулевого колеса, то делать вам это запрещено.

Чтобы спокойно кататься на этих средствах, необходимо открывать категорию А. Все потому, что они оборудованы рулем мотоциклетного типа. Раньше, владельцу трициклов необходимо было предъявлять отдельные документы, которые подтверждали права управления.

Нововведения в законе это исключили, и теперь достаточно предъявить ВУ, на которых стояла бы отметка AS. Только не путайте  сокращение с AT. Такая пометка означает право управления на автомобилях с АКПП.

Подкатегория B1 с аббревиатурой AS

Такие права выдаются водителям, которые:

  • открыли категорию В, но не открыли категорию А.
  • заменили устаревшие документы на новые. Только при условии открытой категории В но не открытой категории А.

Когда  у вас открыты две категории А и В, отметка не ставится. Почему? В ней нет смысла, так как вы имеете право управлять и мотоциклами и автомобилем.

Какие еще отметки можно встретить на новых правах?

Отметка AS – не единственное, что вызывает вопросы. Кроме нее, на водительском удостоверении могут стоять еще отметки, среди них:

  • MS –  у вас открыта категория В1 и А, но не открыта В. Вам запрещено водить обычную машину, но разрешено управлять мотоциклами, трициклами и квадроциклами. Но если на них будет установлен круглый руль и сидение – вас накажут.
  • ML- отметкой помечаются права водителей с ограничением по состоянию здоровья. Обычно это заболевания зрения, слуха или ампутация конечностей.

Вот видите, всего две буквы, а означают многое.

Остались вопросы или есть, что добавить по статье? Пишите в комментариях, возможно это очень поможет читателям в будущем. Так же подписывайтесь на наш канал в ДЗЕНЕ.

B1 – что означает отметка в правах и какой транспорт можно водить

Фото: https://autourist1.ru/

Права нового образца содержат гораздо больше категорий и подкатегорий, чем раньше, там стоят разные отметки, значение которых знают не все водители. Например, за какой транспорт можно садиться, если у тебя в удостоверении стоит категория B1. Для некоторых эта информация станет открытием! Согласитесь, вы даже не обращали внимания, что у вас открыта данная категория.

Все водители знают, что самая распространенная – категория В – дает право садиться за руль легковых машин, а также небольшие грузовички типа «ГАЗель» и микроавтобусы массой не более 3.5 т.  А что за категория, когда к этой букве приставляют единицу?

Фото: https://auto.today/

Если у вас эта категория есть в правах, значит, вы можете ездить на трицикле и квадрицикле, на котором стоит двигатель объемом не более 50 см3. Вес такого транспорта не может превышать полтонны. Эта категория добавляет вам два транспортных средства. Правда, достаточно экстравагантные для России, но все равно водить их вы можете.

Трицикл, который нуждается в регистрации в ГИБДД, — это трехколёсное транспортное средство с движком не более 50 кубов. В слове «квадрицикл» часто делают ошибку, выдавая его за другое транспортное средство с очень похожим названием. Но путать его не стоит. Это транспорт на 4 колесах, на который установлен движок не мощнее 20 лошадок. Кстати, и его нужно также везти на регистрацию в дорожную полицию. Если на нем стоит электромотор, тогда его мощность не должна быть больше 15 Квт, а весть он должен не больше 400 кг. При этом он не может ехать быстрее 25 километров в час. Он, в отличие от квадроцикла, может идти с кабиной, и на нем можно передвигаться по обычным трассам.

Фото: https://knews.kg/

Чтобы садиться за руль этого транспорта, нужно получить водительское удостоверение по категории В и таким образом открыть В1. Никаких экзаменов допом не потребуется. А на правах появится еще отметка AS. А если права уже есть, тогда категорию эту вам откроют автоматически, без испытаний.

При использовании любых материалов необходима активная ссылка на DRIVENN.RU

R&S®FSWP-B1 Spectrum Analyzer, 10 Hz to 50 GHz | Контроль и измерения | Option

Запрос*

Введите текст запроса.

Согласие на получение маркетинговых материалов

Я соглашаюсь с тем, что ROHDE & SCHWARZ GmbH & Co. KG и предприятие ROHDE & SCHWARZ или его дочерняя компания, указанная на данном Веб-сайте, может обращаться ко мне выбранным способом (по электронной или обычной почте) с целью маркетинга и рекламы (например, сообщения о специальных предложениях и скидках), относящейся в числе прочего к продуктам и решениям в области контрольно-измерительной техники, защищенной связи, мониторинга и тестирования сети, вещания и средств массовой информации, а также кибербезопасности.Настоящее заявление о согласии может быть в любое время отозвано путем отправки электронного письма с темой «Unsubscribe» (отказ от подписки на рассылку) по адресу: [email protected]Кроме этого, в каждом отправляемом вам письме имеется ссылка на отказ от подписки на рассылку будущих рекламных материалов.Дополнительная информация об использовании персональных данных и процедуре отказа от их использования содержится в Положении о конфиденциальности.

Обязательное поле Предоставляя свои персональные данные, я подтверждаю их достоверность и свое согласие на их обработку Обществом с ограниченной ответственностью «РОДЕ и ШВАРЦ РУС» (ОГРН 1047796710389, ИНН 7710557825, находящемуся по адресу: Москва, Нахимовский проспект, 58) в следующем объеме и следующими способами: обработку с использованием средств автоматизации и без таковых, сбор, систематизацию, классификацию, накопление, хранение, уточнение, обновление, изменение, шифрование с помощью любых средств защиты, включая криптографическую, запись на электронные носители, составление и переработку перечней и информационных систем, включающих мои персональные данные, маркировку, раскрытие, трансграничную передачу моих персональных данных, том числе, на территории стран всего мира, передачу с использованием средств электронной почты и/или эцп, в том числе, передачу с использованием интернет-ресурсов, а также обезличивание, блокирование, уничтожение, передачу в государственные органы в случаях, предусмотренных законодательством, использование иными способами, необходимыми для обработки, но не поименованными выше до момента ликвидации / реорганизации Компании либо до моего отзыва настоящего согласия.

Душевой канал 600 мм хром Berges B1 Antik 091124

Тип Душевой канал
Материал Нержавеющая сталь, Полипропилен
Решетка в комплекте Да
Направление выпуска Горизонтальный (в стену)
Гарантия 10 лет
Вид затвора Мокрый
Максимальная пропускная способность 42 л/мин
Количество упаковок 1
Вид решетки Перфорированная
Длина дизайн-вставки(решетки) 60 см
Вес 3.1 кг
Глубина (Упаковки) 18 см
Высота (Упаковки) 74 см
Ширина (Упаковки) 14 см
Высота гидрозатвора 3 см
Длина 69.5 см
Ширина 12.1 см
Производитель Berges
Серия B1 Antik
Страна производства Германия
Форма Прямоугольная
Диаметр сливной трубы 50 мм
Угловая конструкция Нет
Оснащение Решетка, Сифон, Ножки
Область применения Бытовая, Для общественных мест
Стилистика дизайна Классика
Габариты Объем (м3) 0.018 м³
Цвет Хром
Вид установки В пол
Спецпредложения Есть подарок

Комбинация витамина B1 с витаминами B6 и/или B12 входит в группу A11DB

Анатомо-Терапевтически-Химическая (АТХ) система классификации (ATC)

Название: Комбинация витамина B1 с витаминами B6 и/или B12

Латинское название: Vit B1 In Comb With Vitamin B6 And/Or Vitamin B12

Другие подгруппы по коду АТХ: A11D — Витамин B1 и его комбинация с витаминами B6 и B12

Бенфо-Бинавит

Таб., покр. оболочкой, 100 мг+100 мг: 30 или 60 шт.

рег. №: ЛП-005760 от 28.08.19
Бинавит

Р-р д/в/м введения: амп. 2 мл 5, 10 или 20 шт.

рег. №: ЛП-000604 от 21.09.11 Дата перерегистрации: 12.07.18
Бинавит форте

Таб., покр. пленочной оболочкой, 200 мг+100 мг+0.2 мг: 10, 20 или 60 шт.

рег. №: ЛП-005518 от 14.05.19
Битригам

Р-р д/в/м введения: 2 мл амп. 5 или 10 шт.

рег. №: ЛП-006421 от 24.08.20
Витагамма

Р-р д/в/м введения 2 мл: амп. 5 шт.

рег. №: Р N003491/01 от 18.06.09
Комбилипен®

Р-р д/в/м введения 100 мг+100 мг+1 мг+20 мг/2 мл: амп. 5 или 10 шт.

рег. №: ЛС-001680 от 02.08.10 Дата перерегистрации: 06.07.17
Комбилипен® Нейро табс

Таб., покр. пленочной оболочкой, 100 мг+100 мг: 15, 30, 45 или 60 шт.

рег. №: ЛП-006782 от 15.02.21
Комбилипен® НЕО

Р-р д/в/м введения 100 мг+100 мг+1 мг/2 мл: амп. 5 или 10 шт.

рег. №: ЛП-005714 от 09.08.19
Ларигама®

Р-р д/в/м введения: амп. 2 мл 5 или 10 шт.

рег. №: ЛП-005170 от 08.11.18 Дата перерегистрации: 13.01.21
Мильгамма®

Р-р д/в/м введения 100 мг+100 мг+1 мг+20 мг/2 мл: амп. 5, 10 или 25 шт.

рег. №: П N012551/02 от 26.09.11 Дата перерегистрации: 29.06.20
Мильгамма® Композитум

Таб., покр. оболочкой, 100 мг+100 мг: 15, 30 или 60 шт.

рег. №: П N012551/01 от 30.12.11 Дата перерегистрации: 24.12.18
Нейралгин® В

Р-р для в/м введения: 2 мл амп. 5, 10 или 25 шт.

рег. №: ЛП-006457 от 14.09.20
Произведено: HBM PHARMA (Словакия)
Нейробион®

Р-р д/в/м введения 100 мг+100 мг+1 мг/3 мл: амп. 3 или 10 шт.

рег. №: ЛСР-004589/08 от 07.06.08 Дата перерегистрации: 20.03.19
Произведено: MERCK (Германия)
Нейробион®

Таб., покр. оболочкой, 100 мг+200 мг+200 мкг: 20 шт.

рег. №: ЛС-001540 от 26.09.11 Дата перерегистрации: 07.08.15
Нейрогамма

Р-р д/в/в и в/м введения 100 мг+50 мг/1 мл: амп. 5 шт.

рег. №: ЛС-001325 от 02.08.11
Сертогамма

Р-р д/в/м введения: амп. 2 мл 5 шт.

рег. №: ЛП-005118 от 19.10.18
Цитипигам® композитум

Таб., покр. пленочной оболочкой, 100 мг+100 мг: 10, 20, 30, 40, 50, 60, 80, 100, 120 или 200 шт.

рег. №: ЛП-006606 от 30.11.20
Произведено: ОЗОН (Россия)
Эллигамин®

Р-р д/в/м введения 100 мг+100 мг+1 мг+20 мг/2 мл: амп. 5, 10, 20, 25, 50, 250 или 500 шт.

рег. №: ЛП-004966 от 01.08.18
Юнигамма

Таб., покр. пленочной оболочкой, 100 мг+100 мг+2 мкг: 30 или 60 шт.

рег. №: ЛСР-006140/10 от 30.06.10

Информация о витамине B1 (тиамин) | Гора Синай

Амброуз, М.Л., Боуден С.К., Уилан Г. Лечение тиамином и функция рабочей памяти у людей с алкогольной зависимостью: предварительные результаты. Алкоголь Clin Exp Res . 2001; 25 (1): 112-16.

Bonucchi J, Hassan I, Policeni B, Kaboli P. Тиреотоксикоз, связанный с энцефалопатией Вернике. J Gen Intern Med . 2008; 23 (1): 106-109.

Bruno EJ Jr, Ziegenfuss TN. Водорастворимые витамины: результаты исследований. Curr Sports Med Rep . 2005 август; 4 (4): 207-13. Рассмотрение.

Costantini A, Pala MI. Тиамин и усталость при воспалительных заболеваниях кишечника: открытое пилотное исследование. Дж. Альтернативная медицина . 2013; 19 (8): 704-8.

Камминг Р.Г., Митчелл П., Смит В. Диета и катаракта: исследование глаз Голубых гор. Офтальмология . 2000; 107 (3): 450-56.

Дарофф. Неврология Брэдли в клинической практике . 6-е изд. Филадельфия, Пенсильвания: Эльзевьер Сондерс; 2012 г.

ДиНиколантонио Дж. Дж., Ниази А. К., Лави С. Дж., О’Киф Дж. Х., Вентура Х. О.. Добавки тиамина для лечения сердечной недостаточности: обзор литературы. Застойная сердечная недостаточность . 2013; 19 (4): 214-22.

Gibson GE, Blass JP. Тиаминзависимые процессы и стратегии лечения нейродегенерации. Антиоксидный окислительно-восстановительный сигнал . 2007 августа 8; [Epub перед печатью].

Isenberg-Grzeda E, Chabon B, Nicolson SE. Назначение тиамина пациентам с расстройствами, связанными с употреблением алкоголя: насколько хорошо мы себя чувствуем? Дж. Аддикт Мед .2014; 8 (1): 1-5.

Jacques PF, Chylack LT Jr, Hankinson SE и др. Длительное потребление питательных веществ и раннее возрастное помутнение хрусталика. Arch Ophthalmol . 2001; 119 (7): 1009-19.

Клигман: Учебник по педиатрии Нельсона . 19 изд. Филадельфия, Пенсильвания: Эльзевьер Сондерс; 2011: глава 46.

Kuzniarz M, Mitchell P, Cumming RG, Flood VM. Использование витаминных добавок и катаракта: исследование глаз Голубых гор. Ам Дж. Офтальмол . 2001; 132 (1): 19-26.

Лонсдейл Д. Обзор биохимии, метаболизма и клинических преимуществ тиамина (е) и его производных. Альтернативная медицина на основе доказательств . 2006 Март; 3 (1): 49-59.

Lu’o’ng K, Nguyen LT. Роль тиамина в болезни Альцгеймера. Am J Alzheimers Dis Other Demen . 2011; 26 (8): 588-98.

McPherson & Pincus: Клиническая диагностика и лечение Генри с помощью лабораторных методов . 21-е изд. Филадельфия, Пенсильвания: Эльзевьер Сондерс; 2007 г.

Мунен М., Ланселотти П., Бец Р., Ламбермонт Б., Пиерард Л. Берибери. Рев Мед Льеж . 2007; 62 (7-8): 523-30.

Национальная академия наук. Рекомендуемая диета (DRI): рекомендуемая доза для физических лиц, витамины. По состоянию на 1 июня 2011 г.

Raschke M, et al. Для биосинтеза витамина B1 в растениях необходим незаменимый белок кластера железа и серы THIC. Proc Natl Acad Sci. США . 2007; 104 (49): 19637-42.

Rodriquez-Martin JL, Qizilbash N, Lopez-Arrieta JM.Тиамин при болезни Альцгеймера (Кокрановский обзор). Кокрановская база данных Syst Rev . 2001; 2: CD001498.

Roman-Campos D, Cruz JS. Современные аспекты недостаточности тиамина для работы сердца. Life Sci . 2014; 98 (1): 1-5.

Сарма С., Георгиаде М. Оценка питания и поддержка пациента с острой сердечной недостаточностью. Curr Opin Crit Care . Октябрь 2010; 16 (5): 413-18. Рассмотрение.

Sica DA. Петлевые диуретики, баланс тиамина и сердечная недостаточность. Застойная сердечная недостаточность . 2007 июль-август; 13 (4): 244-47.

Soukoulis V, Dihu JB, Sole M, Anker SD, Cleland J, Fonarow GC, Metra M, Pasini E, Strzelczyk T, Taegtmeyer H, Gheorghiade M. Дефицит микронутриентов неудовлетворенная потребность при сердечной недостаточности. Дж. Ам Кол Кардиол . 2009 27 октября; 54 (18): 1660-1673. Рассмотрение.

Thomson AD, Marshall EJ. Лечение пациентов с риском развития энцефалопатии Вернике по месту жительства. Спирт . 2006 март-апрель; 41 (2): 159-67.Epub 2005 29 декабря.

Томпсон Дж. Витамины, минералы и добавки: часть вторая. Общественная практика . 2005 Октябрь; 78 (10): 366-8. Рассмотрение.

Витте К.К., Кларк А.Л., Клеланд JG. Хроническая сердечная недостаточность и микроэлементы. Дж. Ам Кол Кардиол . 2001; 37 (7): 1765-74.

Депрессия, агрессия и добавки тиамина B1 в качестве нового лечения

Что такое витамин B1 (тиамин)?

Тиамин, также известный как витамин B1, является важным микронутриентом, который необходим для метаболизма, ферментативных процессов и передачи нервных сигналов.Все живые организмы используют тиамин, но он может производиться только в бактериях, грибах и растениях. У человека микробиота желудочно-кишечного тракта также производит тиамин, но его недостаточно для функционирования организма. Таким образом, мы, как и другие животные, должны получать витамин B1 из рациона.

Недостаток тиамина

Дефицит тиамина может повлиять на сердечно-сосудистую, нервную и иммунную системы. Тяжелая и хроническая форма называется бери-бери. Влажный бери-бери влияет на сердечно-сосудистую систему, вызывая тахикардию, высокое артериальное и венозное давление, отеки ног.Сухой бери-бери влияет на нервную систему, приводя к нарушению сенсорных, двигательных и рефлекторных функций и изменению психического статуса. О дефиците тиамина во всем мире чаще всего сообщают в группах населения, где основными источниками пищи являются шлифованный рис и зерно. В западных странах он чаще всего поражает людей, страдающих алкоголизмом или хроническими заболеваниями. Дефицит тиамина у пациентов с алкогольным расстройством часто приводит к синдрому Косакова, хроническому заболеванию с серьезной потерей памяти и проблемами с обучением.

Пищевые источники тиамина

Добавить в рацион продукты, богатые тиамином, очень просто. Пищевые источники тиамина включают говядину, свинину, яйца, печень, орехи, овес, апельсины, семена, бобовые и дрожжи. Такие продукты, как рис, макаронные изделия, хлеб, крупы и мука, часто обогащены витамином B1, поскольку обработка, необходимая для создания этих продуктов, удаляет тиамин. На рынке доступны добавки и лекарства с тиамином для лечения или предотвращения дефицита тиамина. Примечательно, что B1 хорошо переносится и почти не имеет побочных эффектов.

Биодоступные аналоги тиамина

Аналоги витамина B1, такие как бенфотиамин или дибензоилтиамин, обладают улучшенной биодоступностью из-за их более высокой растворимости в липидах, что облегчает проникновение в клеточные мембраны. В результате они обеспечивают более высокий уровень тиамина в мышцах, головном мозге и печени. Это может быть причиной их более высокой эффективности.

Тиамин как лекарство

Тиамин был первым из обнаруженных водорастворимых витаминов, и с начала 20 века он активно изучается.Чаще всего добавка тиамина используется для лечения синдромов, связанных с тяжелым дефицитом тиамина, а также во время беременности и кормления грудью из-за повышенной потребности в этом витамине. Быстрое выздоровление может произойти в течение нескольких часов при внутривенном введении тиамина. Если концентрированные добавки с тиамином недоступны, диета, богатая тиамином, также приведет к выздоровлению, хотя и более медленными темпами.

Новые свойства тиамина

Недавно были обнаружены другие важные роли тиамина, включая регуляцию окислительного стресса [1].Поскольку эмоциональный стресс связан с окислительным стрессом в головном мозге, было высказано предположение, что тиамин может противодействовать негативным последствиям стресса. И действительно, исследования тиамина на мышах предотвратили негативные изменения настроения и эмоциональности, а также нейровоспаление и окислительный стресс, вызванные стрессом [2, 3]. Это также улучшило клеточную пролиферацию и нейрогенез в гиппокампе в условиях стресса. В соответствии с исследованиями на животных, витамин B1 также способен улучшать симптомы большого депрессивного расстройства у пациентов [4] или при перепадах настроения, связанных со стрессом на работе [5].

Таким образом, тиамин был показан как многообещающее средство для лечения депрессивных изменений и чрезмерной агрессии, вызванных стрессом. Надеемся, что в ближайшем будущем будут проведены новые исследования тиамина, чтобы показать новые свойства этого витамина.

Витамин B1, 50 мг от Rugby 100 таблеток — Hargraves Online Healthcare

Назначение Пищевая добавка
Срок годности 11/2023
Производитель Регби
Активный ингредиент
  • Витамин B1 (в виде тиамина HCl) — 50 мг
Проезд

Только для взрослых

  • Принимать по 1 таблетке в день в качестве пищевой добавки
Факты
  • Без глютена, консервантов и натрия
  • Без крахмала, сои, кукурузы, дрожжей, искусственных красителей и ароматизаторов

Предупреждения

Беречь от детей

Не использовать, если

  • Отпечатанная защитная пломба под крышкой сломана или отсутствует
Прочие ингредиенты
  • Лактоза, микрокристаллическая целлюлоза и стеарат магния (содержит молоко)
Прочая информация
  • Хранить при 59-86 F (15-30 C)
  • Держать бутылку плотно закрытой для сохранения качества и свежести
Заявление об ограничении ответственности Контент и информация о Hargraves Online Healthcare предоставлены только в информационных целях.Он не предназначен для замены совета врача или другого медицинского работника. Вы не должны использовать информацию, содержащуюся в данном документе, для диагностики или лечения проблем со здоровьем или заболеваний, а также для назначения лекарств. Если у вас есть или вы подозреваете, что у вас есть проблема со здоровьем, немедленно обратитесь к своему врачу. Информация и заявления о пищевых добавках не оценивались Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов и не предназначены для диагностики, лечения или предотвращения каких-либо заболеваний.Хотя мы прилагаем все усилия, чтобы обеспечить верность всей информации о продуктах, производители иногда меняют свои логотипы, упаковку и продукты. Вам следует использовать наш сайт в качестве справочного материала, внимательно прочитать всю упаковку продукта и связаться с производителем с любыми вопросами перед использованием продукта. Мы не несем ответственности за неточности или искажения информации о товарах. Отзывы клиентов предоставляются только в информационных целях. Отзывы клиентов отражают только результаты и опыт отдельных рецензентов и не проверяются и не подтверждаются Hargraves Online Healthcare.Фактические результаты могут отличаться для разных пользователей.

Очищенный мышиный антициклин B1

Bioimaging

1. Засейте клетки в соответствующую культуральную среду из расчета ~ 10 000 клеток на лунку в 96-луночный планшет BD Falcon ™ для визуализации (Кат. № 353219) и культивируйте в течение ночи.

2. Удалите культуральную среду из лунок и зафиксируйте клетки, добавив 100 мкл буфера для фиксации BD Cytofix ™ (каталожный № 554655) в каждую лунку.Инкубируйте 10 минут при комнатной температуре (RT).

3. Удалите фиксатор из лунок и сделайте клетки проницаемыми, используя либо BD Perm Buffer III, 90% метанол, либо Triton ™ X-100:

a. Добавьте 100 мкл -20 ° C 90% метанола или пермского буфера III (Кат. № 558050) в каждую лунку и инкубируйте в течение 5 минут при комнатной температуре.

ИЛИ б. Добавьте 100 мкл 0,1% Triton ™ X-100 в каждую лунку и инкубируйте в течение 5 минут при комнатной температуре.

4. Удалите буфер для повышения проницаемости и дважды промойте лунки 100 мкл 1 × PBS.

5. Удалите PBS и заблокируйте клетки, добавив 100 мкл окрашивающего буфера BD Pharmingen ™ (FBS) (№ по каталогу 554656) в каждую лунку. Инкубируйте 30 мин при комнатной температуре.

6. Удалите блокирующий буфер и добавьте 50 мкл оптимально титрованного первичного антитела (разведенного в буфере для окрашивания) в каждую лунку и инкубируйте в течение 1 часа при комнатной температуре.

7. Удалите первичное антитело и трижды промойте лунки 100 мкл 1 × PBS.

8. Удалите PBS и добавьте реагент второй стадии в его оптимально титрованной концентрации по 50 мкл в каждую лунку и инкубируйте в темноте в течение 1 часа при комнатной температуре.

9. Удалите реагент второго этапа и трижды промойте лунки 100 мкл 1 × PBS.

10. Удалите PBS и контрастно окрашивайте ядра, добавляя 200 мкл на лунку 2 мкг / мл Hoechst 33342 (например, Sigma-Aldrich Cat. No. B2261) в 1 × PBS в каждую лунку не менее 15 мин. перед визуализацией.

11. Просмотрите и проанализируйте клетки на соответствующем приборе для визуализации.

Биовизуализация: Более подробную информацию см. На сайте http: // www.bdbiosciences.com/support/resources/protocols/ceritifed_reagents.jsp

Вестерн-блот: Для получения более подробной информации посетите http://www.bdbiosciences.com/pharmingen/protocols/Western_Blotting.shtml

Полный синтез и характеристика тиелоцина B1 как ингибитора межбелкового взаимодействия гомодимера PAC3

* Соответствующие авторы

Высшая школа фармацевтических наук, Университет Тохоку, 6-3 Аза-аоба, Арамаки, Аоба-ку, Сендай 980-8578, Япония
Эл. Почта: doi_taka @ mail.Pharm.tohoku.ac.jp
Факс: +81 22 795 6865

б Национальный институт передовых промышленных наук и технологий (AIST), 2-4-7 Аоми, Кото-ку, Токио 135-0064, Япония

с Центр исследований биомедицинской информации (BIRC), Японский консорциум биологической информатики (JBIC), 2-4-7 Аоми, Кото-ку, Токио 135-0064, Япония

д Институт интегративной биологии Окадзаки и Институт молекулярных наук, Национальные институты естественных наук, 5-1 Хигасияма, Мёдаидзи, Окадзаки, Аити 444-8787, Япония

и Высшая школа фармацевтических наук, Городской университет Нагоя, 3-1 Танабэ-дори, Мидзухо-ку, Нагоя 467-8603, Япония

f Исследовательский центр вычислительной биологии (CBRC), Национальный институт передовых промышленных наук и технологий (AIST), 2-4-7 Aomi, Koto-ku, Tokyo 135-0064, Japan

Гетерогенный ядерный рибонуклеопротеин B1 как новый маркер раннего выявления рака легких человека

Abstract

Гетерогенный ядерный рибонуклеопротеин (hnRNP) A2 / B1 — это РНК-связывающий белок, необходимый для созревания предшественника мРНК.Tockman et al. ранее сообщал, что hnRNP A2 / B1 с M r из 31000 сверхэкспрессируется на ранней клинической стадии рака легких человека (MS Tockman и др. , J. Clin. Oncol., 6: 1685 –1693, 1988). Однако при отдельном изучении мРНК hnRNP A2 / B1 и мРНК hnRNP B1 мы обнаружили уникальное свидетельство того, что мРНК hnRNP B1 , которая является сплайсинговым вариантом мРНК hnRNP A2 , была более значительно повышена при раке легких. тканей, чем мРНК hnRNP A2 / B1 .Наше hnRNP B1-специфическое поликлональное антитело специфически распознало белок hnRNP B1 как ядерный белок M r 37000 с помощью вестерн-блоттинга, но не распознало белок hnRNP A2. Иммуногистохимическое окрашивание антителом hnRNP B1 показало, что белок hnRNP B1 специфически окрашивался в ядрах раковых клеток человека и, в частности, в плоскоклеточных карциномах, но не в ядрах нормальных соседних эпителиальных клеток легких. Мы считаем, что белок hnRNP B1 M r 37000, а не hnRNP A2, хорошо подходит в качестве биомаркера для выявления рака легких у человека.

Сноски

  • Расходы на публикацию этой статьи были частично покрыты за счет оплаты страницы. Таким образом, данная статья должна быть помечена как реклама в соответствии с 18 U.S.C. Раздел 1734 исключительно для указания этого факта.

  • №1 Эта работа была частично поддержана грантами на исследования рака, Специальное исследование рака Министерства образования, науки, спорта и культуры Японии; грант Министерства здравоохранения и социального обеспечения на реализацию второй комплексной 10-летней стратегии борьбы с раком, Япония; и гранты Фонда содействия исследованиям рака, Фонда исследований курения, Мемориального фонда наук о жизни Уэхара, Мемориального фонда Сузукена и Фонда исследований растений факультета сельского хозяйства Киотского университета.

  • ↵2 Кому следует обращаться с запросами о перепечатке, в Научно-исследовательском институте онкологического центра Сайтамы, Ина, Китаадачи-гун, Сайтама 362-0806, Япония. Эл. Почта: hfuji {at} saitama-cc.go.jp

  • Получено 26 января 1999 г.
  • Принято 15 февраля 1999 г.
  • © 1999 Американская ассоциация исследований рака.

Идентификация рецептора скавенджера B1 в качестве рецептора микроскладчатых клеток дыхательных путей для Mycobacterium tuberculosis

Существенные изменения:

1) Добавьте следующие элементы управления к показанным данным:

A) Генетическая комплементация любого из штаммов Mtb, лишенных генов T7SS.

Мы благодарим рецензента за то, что он подчеркнул необходимость дополнения, которое исторически использовалось для контроля полярных эффектов или нецелевых мутаций. В нашей рукописи мы решили использовать два независимых мутанта, каждый из которых имеет нефункциональный T7SS, поскольку маловероятно, что оба штамма будут иметь схожие нецелевые эффекты введенных генетических модификаций, помимо известного широкого воздействия на T7SS, закодированного в Локус RD1 или оба могут иметь спонтанные мутации в других областях генома.Кроме того, оба штамма, которые мы использовали в этом исследовании, MtbΔ esxA (Stanley et al., 2007) и Mtb eccD1 :: Tn5370 (Stanley et al., 2007; Stanley et al., 2003), имели были изучены ранее, в том числе с комплементацией активности T7SS (т.е. секреции EsxA), что исключает полярные эффекты и основные геномные изменения в исходных мутантах. Чтобы подтвердить отсутствие дополнительных мутаций, которые могли возникнуть во время лабораторного пассажа, мы секвенировали геномы всех трех штаммов, Mtb Erdman, Mtb ErdmanΔ esxA и Mtb Erdman eccD1 :: Tn5370 , и сравнили их с опубликованными данными Mtb Erdman. эталонный геном (GenBank: AP012340).Полное секвенирование генома выявило ожидаемую делецию в esxA вместе с присутствием остаточных последовательностей транспозона и кассеты гигромицина, использованных при создании мутанта (Mtb esxA в эталонном геноме — ERDMAN_RS20430, а делеция расположена в NC_020559. 1: 4333535-4333786) и вставка транспозона в eccD1 (Mtb eccD1 в эталонном геноме — ERDMAN_RS20440, а вставка — NC_020559.1: 4337340). Как и ожидалось, все три штамма имели незначительные отличия от эталонного генома, и, что важно, Mtb Erdman WT и Mtb eccD1 :: Tn5370 были идентичны друг другу.Когда мы сравнивали Mtb Erdman WT с Mtb Erdman Δ esxA, , мы обнаружили только один вариант кодирования, кодирующий миссенс-мутацию в Mtb Erdman Δ esxA , по сравнению с Mtb Erdman WT в предполагаемой оксидоредуктазе. Мы загрузили данные секвенирования в архив считывания последовательностей (№ подачи SRA PRJNA605439) и включили таблицу вариантов в дополнительный материал (дополнительный файл 1).

B) Добавьте EsxB в качестве контрольного белка для рис. 2 D-H.

Этот эксперимент теперь отражен на исправленном Рисунке 2D-H.

C) Добавьте неинфицированные контрольные данные трансвелл на рисунок 1G.

У нас не было неинфицированных данных для добавления, но мы включили данные о транслокации для контрольных трансвеллеров, не культивированных совместно с клетками Raji-B, в новые рисунки 1H и 1I.

D) Добавьте контроль загрузки и белок EsxA, извлеченный для вестерн-блоттинга на Фигуре 3B.

Мы добавили элемент управления загрузкой, как было предложено. Для раскрывающегося списка EsxA мы попытались обнаружить EsxA после анализа переключения биотина, но не смогли обнаружить белок ни с моноклональным антителом EsxA, ни с антителом против His.Возможно, реакция затронула эпитопы, обнаруживаемые антителами.

Кроме того, правильно ли указаны маркеры молекулярной массы для этого рисунка и есть ли другие размеры маркеров? Негликозилированный SR-BI действительно составляет ~ 55-57 кДа, однако, судя по маркерам, в этом блоте это не так. Кроме того, полностью гликозилированный SR-BI должен быть не более 82 кДа. Таким образом, гликозилирование следует подтверждать обработкой EndoH. Также возможно, что полоса при 130 кДа может представлять олигомер SR-BI, но это следует проверить, поскольку расчетная молекулярная масса не совпадает с молекулярной массой димера SR-BI.Проверили ли авторы, действительно ли эта полоса 130 кДа потенциально связана с SR-BI с другим белком?

Мы благодарим рецензента за определение проблемы, связанной с молекулярной массой SR-B1. Что касается расхождения молекулярной массы SR-B1 (130 кДа против 82 кДа), мы вернулись к нашим данным вестерн-блоттинга / IP и обнаружили, что причиной расхождения было первичное антитело, которое мы использовали для обнаружения SR-B1. В проведенном эксперименте мы использовали поликлональные антикроличьи антитела против SR-B1 (Novus Biologicals NB400-104), которые по неясным причинам продемонстрировали SR-B1 на ~ 130 кДа как в наших руках, так и на веб-сайте продукта.Когда мы использовали мышиные моноклональные антитела против SR-B1, которые чаще используются в полевых условиях (abcam; ab52629), мы продемонстрировали SR-B1 с ожидаемой молекулярной массой 82 кДа (см. Изображение ответа автора 1). Мы переделали анализ переключения биотина с использованием моноклонального антитела ab52629, получили соответствующий размер для SR-B1 и соответствующим образом изменили рисунок (новый рисунок 3B).

2) Пожалуйста, добавьте следующую недостающую информацию / данные:

A) Гели кумасси очистки EsxA и EsxB и обсуждение любого контроля качества, выполняемого для белков, например MS-анализа, для подтверждения идентичности / чистоты.

Гель кумасси теперь входит в дополнительные материалы (новый рисунок 2 — приложение к рисунку 1).

B) Методы анализа ЖХ-МС.

Подробные методы ЖХ-МС теперь включены в раздел «Материалы и методы».

C) Для всех микроскопических изображений, пожалуйста, укажите, сколько всего изображений представляют в рукописи. (т.е. сколько полей зрения было отображено за независимый эксперимент?).

В зависимости от эксперимента, от 3 до 5 полей для каждого условия были отображены и количественно оценены. Эта информация добавлена ​​в раздел «Материалы и методы».

D) Количественная оценка совместной локализации EsxA и SRB-1 на Рисунке 4.

Количественное определение представлено на Рисунке 4F.

E) На рисунке 1B показано около 10 бактерий в поле, но график в C показывает 100–150 площади бактерий на поле. Отличается ли площадь бактерий от количества бактерий? Как были получены числа, изображенные на графике?

Мы благодарим рецензента за то, что он указал на этот запутанный момент.Изображение на Рисунке 1B представляет собой репрезентативное изображение с большим увеличением, но не всего поля. Первоначально мы решили количественно определять количество бактерий с помощью ImageJ, чтобы определить интенсивность пикселей на поле в качестве объективного суррогата для ручного подсчета бактерий. Для ясности мы изменили анализ так, чтобы количество бактерий на 100 клеток было определено количественно в исправленной рукописи.

F) На рис. 2E и 3D показано аналогичное количество ядер в поле, но на рис. 2D показано, что ядра по крайней мере в два раза выше, чем 3C.Как эти числа определяются / рассчитываются?

Как и выше, представленные изображения являются репрезентативными изображениями, а не изображениями поля в целом. Ядра на поле подсчитывали с помощью ImageJ.

G) Для рисунка 1B и других авторы должны представить изображение в светлом поле, чтобы определить, где должны быть границы клеток, чтобы попытаться различить прилипшие бактерии или внутри клеток-хозяев.

Несмотря на то, что мы понимаем беспокойство рецензента, на светлых изображениях невозможно различить прикрепленные и усвоенные бактерии.Для этого потребуется конфокальная микроскопия с Z-образными стеками, а такие эксперименты довольно сложны для трансвеллеров. Поскольку нас интересовало связывание с клетками, которое могло включать поверхностное связывание и впоследствии интернализованные бактерии, мы не проводили дополнительных экспериментов.

H) На фиг. 3 обогащение пептидов APOE и SRB1 с помощью EsxA IP значительно меньше, чем обогащение рецептора трансферрина и трансферрина. Сколько или каждый «рецептор» вы снизили относительно количества EsxA и трансферрина? Является ли график вулкана результатом одной, двух или трех независимых копий из IP?

Рецептор трансферрина — это повсеместно экспрессируемый и обильный белок клеточной поверхности, поэтому компания Dualsystems Biotech, с которой мы заключили контракт, предоставляет трансферрин в качестве положительного (экспериментального) контроля.Мы представляем данные трансферрина / рецептора трансферрина только для демонстрации успеха анализа TriCEPS, а не для целей сравнения. Кроме того, с помощью этого метода невозможно количественно определить количество каждого рецептора. График вулкана является результатом одного эксперимента с тремя независимыми биологическими повторами. Последний пункт теперь четко поясняется в легенде к рисунку 3A.

I) Можно ли включить схему трансвеллентного анализа на рис. 1?

Добавлен к рисунку 1 как новый рисунок 1B.

J) Для рисунка 4: должна быть указана молекулярная масса полосы SR-BI. Доступна ли более низкая экспозиция этого иммуноблота?

Молекулярная масса была добавлена, и изображение с более низкой экспозицией теперь заменяет рисунок 3B.

3) Файлы данных и версии статистики:

A) Необходимо предоставить полный файл данных протеомики, подтверждающий график вулкана на Рисунке 3A.

Полный файл данных протеомики был добавлен в качестве дополнительных данных (новый дополнительный файл 2).

B) Следует добавить статистические методы, которые привели к p-значениям, используемым для построения графика вулкана на рисунке 3A.

Добавлен в раздел «Материалы и методы», как было предложено.

C) Неясно, подходит ли t-критерий Стьюдента во всем. Например, я думаю, что t-тест подходит для сравнения обработанных и необработанных (как RajiB против контроля для одного штамма), но не подходит для сравнения двух штаммов или белков (например, 1C-E и 2A, C).

Для всей рукописи мы заменили t-критерий Стьюдента односторонним дисперсионным анализом с поправками на множественные сравнения, поскольку это более строгий инструмент статистического анализа. С этим изменением были обновлены материалы и методы, а также условные обозначения фигур.

D) Укажите, следует ли предполагать, что условия, не указанные на рисунках, существенно не отличаются друг от друга, или добавьте дополнительную таблицу результатов всех статистических сравнений.Например, было бы интересно узнать, значительно ли отличаются друг от друга deccD +/- RajiB в 1С и 1Е.

Мы добавили комментарий к легенде для каждого рисунка, где это уместно, указав, что если сравнения не выделены напрямую, они не являются статистически значимыми.

4) Пожалуйста, добавьте следующие исправления, связанные с ссылками:

A) Следует использовать правильный справочник по гликозилированию SR-BI (подраздел «Рецептор скавенджера класса B типа 1 связывает EsxA и экспрессируется на М-клетках in vitro») (более старые статьи Кригера).

Спасибо за предложение. Мы изменили этот раздел, чтобы отразить новые данные (см. Комментарий 1D выше) и включить исходную статью Acton et al. чтобы указать правильный MW.

B) «Двумя наиболее распространенными белками, секретируемыми T7SS, являются EsxA и EsxB» — добавьте ссылку.

Спасибо за предложение. Мы включили ссылки с подробным описанием содержания этих двух белков.

C) Четвертый абзац обсуждения — укажите, пожалуйста, что Shen et al.это обзор. В противном случае предоставьте исходную ссылку для идентификации SR-BI как рецептора ЛПВП.

Мы изменили ссылку, чтобы указать исходную идентификацию SR-B1 как рецептора HDL.

Некоторые другие моменты, которые необходимо учитывать, чтобы укрепить сделанные выводы:

1) Что нужно учитывать — возможно ли выполнение прямого IP между EsxA и растворимыми доменами SRB-1? Это подтверждает вывод о том, что SRB1 является «рецептором» EsxA и что взаимодействие между ними является прямым.В качестве альтернативы, если используемый вами анализ перекрестной сшивки демонстрирует прямое взаимодействие между EsxA и SRB1, несмотря на то, что это происходит от лизатов, это необходимо четко указать и обсудить.

Спасибо за предложение. Выполнение IP EsxA с растворимым доменом SR-B1 будет проблемой, поскольку неизвестно, являются ли трехмерные структуры растворимого (т.е. рекомбинантного) и трансмембранного SR-B1 одинаковыми, и, следовательно, растворимый SR-B1 может не совпадать. связывают EsxA по техническим, а не биологическим причинам.Мы выполнили два независимых анализа с использованием EsxA для исследования связывания с клеточной поверхностью. Хотя оба включали стадию перекрестного связывания (TriCEP и биотиновый переключатель), они также оба выполнялись на целых клетках, а не на лизатах, и оба продемонстрировали взаимодействие между EsxA и SR-B1.

2) Открытия авторов ставят вопрос о том, может ли химическое ингибирование SR-B1 ингибировать связывание EsxA и транслокацию Mtb. Использование химического ингибитора SR-B1 снимет любые опасения, что генетический нокдаун SR-B1 влияет на биологию М-клеток в целом.Химический ингибитор также можно использовать in vivo.

Спасибо за предложение. Хотя мы признаем, что это важный эксперимент, мы обеспокоены тем, что ингибитор активности SR-B1, который блокирует интернализацию HDL (такой как установленный ингибитор интернализации HDL BLT-1), может не обладать такой же ингибирующей активностью для связывания / интернализации Mtb. Таким образом, интерпретируемым может быть только положительный результат (т.е. ингибитор успешно предотвращает интернализацию Mtb). Кроме того, введение такого ингибитора in vivo может привести к противоречивым результатам, поскольку оно может не только влиять на интернализацию М-клеток, но также на интернализацию, опосредованную макрофагами SR-B1.

3) Можно ли изолировать первичные М-клетки от мышей SR-BI — / — для окончательной идентификации SR-BI как рецептора EsxA? Это повысило бы значимость этих исследований.

SR-B1 — / — мышей практически невозможно разводить, и они имеют множественные аномалии развития и физиологические отклонения. Текущая работа в лаборатории сосредоточена на разработке мыши Cre, специфичной для М-клеток, которая позволит осуществить условную делецию SR-B1 из М-клеток, специфичную для определенного типа клеток, путем скрещивания с мышью SR-B1 fl / fl .Однако проверка и тестирование экспрессии Cre, скрещивание этих мышей и последующее тестирование их на активность М-клеток выходит за рамки этой рукописи.

4) В рукописи есть несколько данных, которые указывают на то, что EsxA может быть не единственным фактором или что на М-клетках могут быть дополнительные рецепторы для EsxA. Например, рисунок 4: все еще есть ячейки EsxA + в отсутствие SRB1. Кроме того, транслокация в М-клетки выше для гранул с EsxA, чем для Mtb? Означает ли это, что на поверхности Mtb могут присутствовать дополнительные факторы, модулирующие этот процесс? У М.tb без esxA по-прежнему перемещаются на низком уровне, что снова указывает на дополнительные факторы? Эта возможность должна быть четко рассмотрена в Обсуждении.

Спасибо, что подняли эти важные вопросы. Мы расширили обсуждение, чтобы включить идею о том, что на М-клетках могут быть дополнительные рецепторы EsxA, и что другие факторы Mtb также могут опосредовать проникновение в М-клетки.

Артикулы:

Стэнли, С.А., Джондроу, Дж. Э., Мансанильо, П., Кокс, Дж. С. 2007. Ответ IFN типа I на инфекцию Mycobacterium tuberculosis требует секреции, опосредованной ESX-1, и вносит свой вклад в патогенез.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *